Seroloogilised reaktsioonid nakkushaiguste diagnoosimisel. Seroloogiline meetod viirusnakkuste diagnoosimiseks Seroloogilised testid, mida kasutatakse viirusnakkuste diagnoosimiseks

Antigeenid– geneetiliselt võõrad ained, mis looma või inimese organismi sattudes põhjustavad spetsiifilise immuunvastuse – antikehade sünteesi, sensibiliseeritud T-lümfotsüütide teket, immunoloogilist mälu ehk tolerantsust. Võõrained on keemilised struktuurid, mida kehas ei esine. Inimkehale võõrad on viirused, mikroorganismid, aga ka loomade ja teiste inimeste rakud, koed, elundid. Antigeenidel on antikehadega seondumiseks mitmeid retseptoreid ja nad on võimelised nendega reageerima nii looma või inimese kehas (in vivo) kui ka väljaspool keha – in vitro (in vitro).

Antikehad- vereseerumi globuliinifraktsiooni suure molekulmassiga valgud. Antikehad sünteesitakse antigeeni mõjul ja on võimelised spetsiifiliselt reageerima (kombineerima) vastava antigeeniga. Kõikidel antikehadel on iseloomulik immunoglobuliini struktuur; erinevad immunoloogiliste, bioloogiliste ja füüsikalised omadused; ja jagunevad 5 klassi - IgG, IgA, IgM, IgD ja IgE.

Seroloogilised reaktsioonid

Laboripraktikas kasutavad nad seroloogilised reaktsioonid- laboratoorsed reaktsioonid antigeenide ja antikehade vahel, mis põhjustavad registreeritud muutusi uuritavas süsteemis. Neid reaktsioone nimetatakse seroloogilisteks, kuna nende tootmiseks kasutatakse antikehi sisaldavat seerumit (seerumit).

Seroloogilised uuringud spetsiifiliste antikehade ja patogeeni antigeeni tuvastamiseks nakkushaiguste korral on kättesaadavamad meetodid laboratoorne diagnostika kui patogeeni bakterioloogiline tuvastamine. Mõnel juhul jäävad seroloogilised uuringud ainsaks meetodiks nakkushaiguste diagnoosimisel.

Mõned laboripraktikas kasutatavad antikehade tuvastamise meetodid

Kõik seroloogilised reaktsioonid põhinevad antigeeni ja antikeha interaktsioonil immuunkomplekside moodustumisega, mida saab tuvastada in vitro testides (st "in vitro" - väljaspool elusorganismi). Antigeen-antikeha reaktsioonidega in vitro süsteemis võivad kaasneda mitmed nähtused - aglutinatsioon, sadestumine, lüüs ja teised. Reaktsiooni välised ilmingud sõltuvad antigeeni füüsikalis-keemilistest omadustest (osakeste suurusest, füüsiline seisund), antikehade klass ja tüüp, samuti katsetingimused (söötme konsistents, soola kontsentratsioon, pH, temperatuur).

1. Komplemendi sidumisreaktsioon

Täiendage on vereplasma valkude süsteem, mis sisaldab 9 C-tähega tähistatud komponenti (C1, C2, C3, ... C9), faktorit B, faktorit D ja mitmeid regulaatorvalke. Mõned neist komponentidest koosnevad 2-3 valgust, näiteks C1 on kolme valgu kompleks. Need valgud ringlevad vereringes ja esinevad rakumembraanidel. Komplement on nii kaasasündinud kui ka omandatud immuunsuse kõige olulisem süsteem. See süsteem on loodud keha kaitsmiseks võõrkehade toime eest ja osaleb organismi immuunvastuse rakendamises. Täienduse avastas 19. sajandi lõpus Belgia teadlane J. Borde.

Komplemendi fikseerimise reaktsioon (CFR)- seroloogiline test, mida kasutatakse komplementi siduvate antikehade ja antigeenide kvantifitseerimiseks. Esmakordselt kirjeldasid Bordet ja Zhangu (Bordet – Gengou) 1901. aastal. RSK põhineb asjaolul, et antigeen-antikeha kompleks on võimeline absorbeerima reaktsioonisegule lisatavat komplementi. Kui antigeenid ja antikehad vastavad üksteisele, moodustavad nad immuunkompleksi, millele on kinnitatud komplement. Spetsiifiline immuunkompleks adsorbeerib süsteemi lisatud komplemendi, st. komplemendi sidumine antigeen-antikeha kompleksi poolt. Mida rohkem antikehi, seda rohkem komplementi fikseeritakse. Kui antigeen-antikeha kompleksi ei moodustu, jääb komplement vabaks.

CSC keerukus seisneb selles, et kompleksi "antigeen-antikeha-komplement" moodustumise reaktsioon on nähtamatu. Reaktsiooni komponentide tuvastamiseks kasutatakse täiendavat indikaatori hemolüütilist süsteemi. Hemolüüsireaktsiooni abil määratakse pärast antigeeni ja antiseerumi reaktsiooni lõppu komplemendi jäägi kvantitatiivne määramine.

Komplemendi fikseerimise testi (RCT) kasutatakse spetsiifilise antigeeni vastaste antikehade tuvastamiseks või antigeeni tüübi määramiseks teadaoleva antikeha abil. See keeruline seroloogiline reaktsioon hõlmab kahte süsteemi ja komplementi. Esimene süsteem - bakterioloogiline (peamine), koosneb antigeenist ja antikehast. Teine süsteem on hemolüütiline (indikaator). See sisaldab lamba erütrotsüüte (antigeen) ja neile vastavat hemolüütilist seerumit (antikeha).

RSK pannakse kahes etapis: esmalt kombineeritakse antigeen testitava vereseerumiga, milles otsitakse antikehi ja seejärel lisatakse komplement. Kui antigeen ja antikeha ühtivad, moodustub immuunkompleks, mis seob komplementi. Antikehade puudumisel seerumis immuunkompleks ei moodustu ja komplement jääb vabaks. Kuna kompleksi poolt komplemendi adsorptsiooni protsess on visuaalselt nähtamatu, lisatakse selle protsessi paljastamiseks heemisüsteem.

Selle kõrge tundlikkuse tõttu kasutatakse komplemendi sidumisreaktsiooni (CFR) mõlema jaoks seroloogiline diagnoos bakteriaalsed ja viirusnakkused, allergilised seisundid ja antigeenide tuvastamine (isoleeritud bakterikultuur).

Sadestumise reaktsioon (RP)(ladina keelest praecipitatio – sadenemine, allakukkumine) põhineb lahustuvast antigeenist ja spetsiifilisest antikehast koosneva spetsiifilise immuunkompleksi sadestamisel elektrolüüdi juuresolekul. Reaktsiooni tulemusena tekib hägune rõngas või lahtine sade - sade. Vees lahustuva antigeeni ja antikeha vahel toimub sadenemisreaktsioon, mille tulemuseks on suured kompleksid et sade

3. Flokulatsioonireaktsioon

Flokulatsioonireaktsioon (Ramoni järgi)(ladina keelest floccus - villahelbed, flocculi - hakid, helbed; flokulatsioon - lahtiste flokulentsete agregaatide (flokulite) moodustumine hajutatud faasi väikestest osakestest) - opalestsentsi või flokulentse massi ilmumine (immunosadestamine) katseklaasis katseklaasis toksiini reaktsioon - antitoksiin või anatoksiin - antitoksiin. Seda kasutatakse antitoksilise seerumi või toksoidi aktiivsuse määramiseks.

Flokulatsioonireaktsioon põhineb "esialgse" flokulatsiooni tuvastamisel - hägusus eksotoksiini (anatoksiin) + antitoksiini kompleksi moodustumisel koostisosade optimaalsetes kvantitatiivsetes suhetes.

4. Aglutinatsioonireaktsioon

Aglutinatsioon(ladina keelest agglutinatio - sidumine) on antigeeni interaktsiooni reaktsioon spetsiifilise antikehaga, mis avaldub sideme kujul. Sel juhul liimitakse antigeenid osakeste-keste kujul (mikroobsed rakud, erütrotsüüdid jne) antikehade abil kokku ja sade (aglutineerub) helveste kujul. Aglutinaadid on tavaliselt palja silmaga nähtavad. Reaktsiooni toimumiseks on vajalik elektrolüütide (näiteks isotoonilise naatriumkloriidi lahuse) olemasolu, mis kiirendab aglutinatsiooniprotsessi.

Kasutades aglutinatsioonitesti (RA), tuvastatakse reactio agglutinationis (inglise aglutinatsioonitest), antikehad või korpuskulaarsed antigeenid. Olenevalt kasutatavast immuundiagnostika tüübist on mikroobide aglutinatsiooni, hemaglutinatsiooni, lateksi aglutinatsiooni, koagulatsiooni jne reaktsioone.

5. Sadestamisreaktsioonides osalevate antikehade nimetus

Settereaktsioonides osalevad antikehad said traditsioonilise nimetuse nende interaktsiooni kohta antigeeniga:

aglutiniinid - põhjustavad korpuskulaarse antigeeni - aglutinogeeni - aglutinatsiooni ja antigeen-antikeha kompleksi (aglutinaadi) sadenemist;

sademed - moodustavad sademe lahustuva antigeeniga - sademega.

Bakteriolüsiinid (põhjustab bakterite lüüsi) ja hemolüsiinid (põhjustab punaste vereliblede lüüsi) osalevad lüütilistes reaktsioonides.

Antigeen-antikeha reaktsioonil põhinevat seroloogilist diagnostikat saab kasutada mõlema määramiseks ja see mängib rolli viirusinfektsiooni etioloogia määramisel isegi viiruse eraldamise negatiivsete tulemuste korral.

Seroloogilise diagnoosimise edukus sõltub reaktsiooni spetsiifilisusest ja keha antikehade sünteesiks vajalike verevõtu ajutiste tingimuste järgimisest.

Enamasti kasutatakse paarisvereseerumit, mida võetakse 2–3-nädalaste intervallidega. Positiivseks reaktsiooniks loetakse antikehade tiitri vähemalt 4-kordset suurenemist. On teada, et enamik spetsiifilisi antikehi kuulub IgG ja IgM klassidesse, mis sünteesitakse nakkusprotsessi erinevatel aegadel. Kus IgM antikehad on varajased ning nende määramiseks kasutatud teste kasutatakse varajaseks diagnoosimiseks (piisab ühe seerumi uurimisest). IgG klassi antikehad sünteesitakse hiljem ja säilitatakse pikka aega.

Viiruse tüpiseerimiseks kasutatakse pH-d, rühmaspetsiifiliseks diagnostikaks, näiteks adenoviirusnakkuse korral, komplemendi sidumise reaktsioon(RSK). Enim kasutatud on hemaglutinatsiooni pärssimise reaktsioon(RTGA), RSK, RIF, passiivsed reaktsioonid ja vastupidine passiivne hemaglutinatsioon(RPGA, ROPGA), erinevad ELISA variandid, mis peaaegu kõikjal asendasid RIA-d, on selle suhtes võrdsed.

RTGA kasutatakse hemaglutineerivate viiruste põhjustatud haiguste diagnoosimiseks. See põhineb antikehade seondumisel lisatud standardviiruse patsiendi seerumiga. Reaktsiooniindikaatoriks on spetsiifiliste antikehade puudumisel viiruse poolt aglutineeritud (iseloomuliku "vihmavarju" moodustumine) erütrotsüüdid, mis settivad põhja, nende olemasolul aglutineerimata.

RSK on üks traditsioonilistest seroloogilistest testidest ja seda kasutatakse paljude viirusnakkuste diagnoosimiseks. Reaktsioonis osalevad kaks süsteemi: patsiendi seerumi antikehad + standardviirus ja lamba erütrotsüüdid + nende vastased antikehad, samuti tiitritud komplement. Kui antikehad ja viirus kattuvad, seob see kompleks komplementi ja lamba erütrotsüütide lüüsi ei toimu ( positiivne reaktsioon). Negatiivse RSC korral aitab komplement kaasa erütrotsüütide lüüsile. Meetodi puuduseks on selle ebapiisavalt kõrge tundlikkus ja reaktiivide standardimise raskus.

RSK ja RTGA olulisuse arvessevõtmiseks on vaja tiitrida paarisseerumeid, st võtta haiguse alguses ja taastumise ajal.

RPGA- viiruse antigeenide poolt sensibiliseeritud erütrotsüütide (või polüstüreenhelmeste) aglutinatsioon antikehade juuresolekul. Erütrotsüütidele saab sorbeerida mis tahes viirusi, olenemata nende hemaglutineeriva toime olemasolust või puudumisest. Mittespetsiifiliste reaktsioonide esinemise tõttu testitakse seerumeid lahjenduses 1:10 või rohkem.

RNGA- spetsiifiliste antikehade poolt sensibiliseeritud erütrotsüütide aglutinatsioon viiruse antigeenide juuresolekul. ROPHA sai HBs antigeeni tuvastamisel kõige suurema jaotuse nii patsientidel kui ka veredoonoritel.

KUI meetod samuti ELISA kasutatakse antikehade tuvastamiseks seerumis. ELISA diagnostilistel eesmärkidel muutub üha olulisemaks ja laialdasemaks. Viiruse antigeen sorbeeritakse tahkele faasile (polüstüreenplaatide või polüstüreenhelmeste süvendite põhja). Kui lisatakse seerumis olevad vastavad antikehad, seostuvad need adsorbeeritud antigeenidega. Soovitud antikehade olemasolu tuvastatakse ensüümiga (peroksüdaas) konjugeeritud antikehade (näiteks inimese) abil. Substraadi lisamine ja substraadi-ensüümi reaktsioon annavad värvi. ELISA-d saab kasutada ka antigeenide määramiseks. Sel juhul adsorbeeritakse antikehad tahkele faasile.

monoklonaalsed antikehad. Viirusnakkuste diagnoosimisel on tehtud suuri edusamme viimasel kümnendil, mil geenitehnoloogia uuringute arenedes töötati välja süsteem monoklonaalsete antikehade saamiseks. See suurendas dramaatiliselt spetsiifilisust ja tundlikkust diagnostilised meetodid viiruse antigeenide määramine. Monokloonide kitsas spetsiifilisus, mis esindavad väikest osa viirusvalkudest, mida kliinilises materjalis ei pruugi olla, on edukalt ületatud, kasutades mitmeid monoklonaalseid antikehi erinevate viirusdeterminantide vastu.

Nr 1 Diagnoosimisel kasutatavad seroloogilised testid viirusnakkused.

immuunreaktsioonid kasutatakse diagnostilistes ja immunoloogilistes uuringutes patsientidel ja terved inimesed. Selleks rakendage seroloogilised meetodid st meetodid antikehade ja antigeenide uurimiseks, kasutades vereseerumis ja teistes vedelikes, aga ka kehakudedes määratud antigeen-antikeha reaktsioone.

Patogeeni antigeenide vastaste antikehade tuvastamine patsiendi vereseerumis võimaldab haigust diagnoosida. Seroloogilisi uuringuid kasutatakse ka mikroobide antigeenide, erinevate bioloogiliselt aktiivsete ainete, veregruppide, koe- ja kasvajaantigeenide, immuunkomplekside, rakuretseptorite jms tuvastamiseks.

Kui patsiendilt eraldatakse mikroob, tuvastatakse patogeen selle antigeensete omaduste uurimisel, kasutades immuundiagnostilisi seerumeid, st spetsiifilisi antikehi sisaldavaid hüperimmuniseeritud loomade vereseerumeid. See on mikroorganismide niinimetatud seroloogiline identifitseerimine.

Mikrobioloogias ja immunoloogias kasutatakse laialdaselt aglutinatsiooni, sadestamist, neutraliseerimisreaktsioone, reaktsioone, mis hõlmavad komplementi, kasutades märgistatud antikehi ja antigeene (radioimmunoloogiline, ensüümimmunoanalüüs, immunofluorestsentsmeetodid). Loetletud reaktsioonid erinevad registreeritud toime ja staadiumitehnika poolest, kuid need kõik põhinevad antigeeni ja antikeha interaktsiooni reaktsioonil ning neid kasutatakse nii antikehade kui ka antigeenide tuvastamiseks. Immuunsusreaktsioone iseloomustab kõrge tundlikkus ja spetsiifilisus.

Antikeha ja antigeeni interaktsiooni tunnused on laborites diagnostiliste reaktsioonide aluseks. In vitro reaktsioon antigeeni ja antikeha vahel koosneb spetsiifilisest ja mittespetsiifilisest faasist. Spetsiifilises faasis toimub antikeha aktiivse saidi kiire spetsiifiline seondumine antigeeni determinandiga. Siis tuleb mittespetsiifiline faas – aeglasem, mis väljendub nähtavate füüsikaliste nähtustena, nagu helveste teke (aglutinatsiooninähtus) või sademe hägususe kujul. See faas nõuab teatud tingimusi (elektrolüüdid, söötme optimaalne pH).

Antigeenideterminandi (epitoobi) seondumine antikeha Fab fragmendi aktiivse saidiga on tingitud van der Waalsi jõududest, vesiniksidemetest ja hüdrofoobsetest interaktsioonidest. Antikehadega seotud antigeeni tugevus ja kogus sõltuvad antikehade afiinsusest, aviidsusest ja nende valentsusest.

Nr 2 Leishmaniaasi tekitajad. Taksonoomia. Tunnusjoon. Mikrobioloogiline diagnostika. Ravi.

Taksonoomia: tüüp Sarcomastigophorae, alamtüüp Mastigophora - flagella, klass Zoomastigophora, järjekord Kinetoplastida, perekond Leishmania.

kasvatamine: NNN sööde, mis sisaldab defibrineeritud küülikuvere agarit. Leishmania kasvab ka tibu embrüo koorion-allantoismembraanil ja rakukultuurides.

Epidemioloogia: sooja kliimaga riikides. Patogeenide ülekandemehhanism on ülekantav vektorite - sääskede - hammustuse kaudu. Peamised patogeenide allikad: naha antroponootilise leishmaniaasi korral - inimesed; naha zoonootilise leishmaniaasiga - närilised; vistseraalse leishmaniaasiga - inimesed; mukokutaanse leishmaniaasiga - närilised, mets- ja koduloomad.

Patogenees ja kliinik. Naha leishmaniaasi põhjustajaid on kaks: L. tropica, antroponootilise leishmaniaasi põhjustaja, ja L. major, zoonootilise naha leishmaniaasi põhjustaja.

Antroponootilist nahaleishmaniaasi iseloomustab pikk peiteaeg - mitu kuud. Sääsehammustuse kohale ilmub tuberkuloos, mis 3 kuu pärast suureneb ja haavandub. Haavandid paiknevad kõige sagedamini näol ja ülemised jäsemed, cicatrise aasta lõpuks. Zoonootiline nahaleishmaniaas (varajane haavandiline leishmaniaas, Pendinsky haavand, maapiirkonna vorm) on ägedam. Inkubatsiooniperiood on 2-4 nädalat. Nutvad haavandid lokaliseeritakse sagedamini alajäsemed. Mukokutaanset leishmaniaasi põhjustab L. braziliensise kompleksi leishmania; tekivad nina, suu ja kõri limaskestade granulomatoossed ja haavandilised kahjustused. Antrapoonset vistseraalset leishmaniaasi põhjustab L. donovani kompleksi leishmania; patsientidel on mõjutatud maks, põrn, lümfisõlmed, luuüdi ja seedetrakt.

Immuunsus: püsiv eluaegne

Romanovsky-Giemsa järgi värvitud määrdudes (tuberkulidest, haavandite sisust, elundite punktidest) leitakse intratsellulaarselt paiknevad väikesed ovaalse kujuga leishmania (amastigootid). Patogeeni puhaskultuuri eraldamiseks inokuleeritakse NNN söötmega: inkubeeritakse 3 nädalat. Seroloogilised meetodid ei ole piisavalt spetsiifilised. Võimalik on kasutada RIF-i, ELISA-t.

Leishmaniini HAR nahaallergia testi kasutatakse leishmaniaasi epidemioloogilistes uuringutes.

Ravi: Kell vistseraalne leishmaniaas kasutatakse antimonipreparaate ja diamidiine (pentamidiini). Naha leishmaniaasiga - kinakriin, amfoteritsiin.

Ärahoidmine: hävitada haigeid loomi, viia läbi võitlust näriliste ja sääskedega. Naha leishmaniaasi immunoprofülaktika viiakse läbi L. major eluskultuuri nakatamise teel.

PILET nr 28

№ 1 Immunoglobuliinid, struktuur ja funktsioonid.

immunoglobuliinide olemus. Vastuseks antigeeni sissetoomisele toodab immuunsüsteem antikehi – valke, mis võivad spetsiifiliselt ühineda nende moodustumist põhjustanud antigeeniga ja osaleda seega immunoloogilistes reaktsioonides. Antikehad kuuluvad a-globuliinide hulka, st vereseerumi valkude fraktsiooni, mis on elektriväljas kõige vähem liikuv. Organismis toodavad β-globuliine spetsiaalsed rakud – plasmarakud. α-globuliine, mis kannavad antikehade funktsioone, nimetatakse immunoglobuliinideks ja neid tähistatakse sümboliga Ig. Seetõttu on antikehad immunoglobuliinid, mida toodetakse vastusena antigeeni sisestamisele ja mis on võimelised spetsiifiliselt interakteeruma sama antigeeniga.

Funktsioonid. Esmane funktsioon on nende aktiivsete keskuste interaktsioon antigeenide komplementaarsete determinantidega. Teisene funktsioon on nende võime:

Siduge antigeen selle neutraliseerimiseks ja organismist väljutamiseks, st osalege antigeenivastase kaitse moodustamises;

Osaleda "võõra" antigeeni äratundmises;

Tagada immunokompetentsete rakkude (makrofaagid, T- ja B-lümfotsüüdid) koostöö;

Osalema erinevaid vorme immuunvastus (fagotsütoos, tapjafunktsioon, GNT, HAR, immunoloogiline tolerantsus, immunoloogiline mälu).

Antikehade struktuur. Immunoglobuliinide valgud keemiline koostis kuuluvad glükoproteiinide hulka, kuna koosnevad valkudest ja suhkrutest; ehitatud 18 aminohappest. Neil on liigierinevused, mis on seotud peamiselt aminohapete komplektiga. Nende molekulid on silindrilise kujuga, need on nähtavad elektronmikroskoobis. Kuni 80% immunoglobuliinidest on settimiskonstant 7S; vastupidav nõrkadele hapetele, leelistele, kuumutades kuni 60 °C. Immunoglobuliine on võimalik eraldada vereseerumist füüsikaliste ja keemiliste meetoditega (elektroforees, isoelektriline sadestamine alkoholi ja hapetega, väljasoolamine, afiinsuskromatograafia jne). Neid meetodeid kasutatakse tootmises immunobioloogiliste preparaatide valmistamisel.

Immunoglobuliinid jagunevad nende struktuuri, antigeensete ja immunobioloogiliste omaduste järgi viide klassi: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Immunoglobuliinidel M, G, A on alamklassid. Näiteks IgG-l on neli alamklassi (IgG, IgG 2, IgG 3, IgG 4). Kõik klassid ja alamklassid erinevad aminohappejärjestuse poolest.

Kõigi viie klassi immunoglobuliinide molekulid koosnevad polüpeptiidahelatest: kaks identset rasket ahelat H ja kaks identset kerget ahelat - L, mis on ühendatud disulfiidsildadega. Vastavalt igale immunoglobuliinide klassile, s.o. M, G, A, E, D, eristavad viit tüüpi raskeid ahelaid: ? (mu), ? (gamma), ? (alfa), ? (epsilon) ja? (delta), mis erinevad antigeensuse poolest. Kõigi viie klassi valgusketid on tavalised ja neid on kahte tüüpi: ? (kappa) ja? (lambda); Erinevate klasside immunoglobuliinide L-ahelad võivad ühineda (rekombineeruda) nii homoloogsete kui ka heteroloogsete H-ahelatega. Samas molekulis võivad aga olla ainult identsed L-ahelad (? või?). Nii H- kui ka L-ahelal on varieeruv - V piirkond, milles aminohappejärjestus on ebastabiilne, ja konstantne - C piirkond konstantse aminohapete komplektiga. Kergetes ja rasketes ahelates eristatakse NH2- ja COOH-terminaalseid rühmi.

Töötlemise ajal? -globuliini merkaptoetanool hävitab disulfiidsidemed ja immunoglobuliini molekul laguneb eraldi polüpeptiidide ahelateks. Proteolüütilise ensüümi papaiiniga kokkupuutel lõhustatakse immunoglobuliin kolmeks fragmendiks: kaheks mittekristalluvaks fragmendiks, mis sisaldavad antigeeni determinantseid rühmi ja mida nimetatakse Fab-fragmentideks I ja II, ning üheks kristalliseerivaks Fc-fragmendiks. FabI ja FabII fragmendid on omadustelt ja aminohappelise koostise poolest sarnased ning erinevad Fc fragmendist; Fab- ja Fc-fragmendid on kompaktsed moodustised, mis on omavahel ühendatud H-ahela painduvate osadega, mille tõttu on immunoglobuliini molekulidel paindlik struktuur.

Nii H-ahelatel kui ka L-ahelatel on eraldi, lineaarselt ühendatud kompaktsed piirkonnad, mida nimetatakse domeenideks; neid on 4 H-ahelas ja 2 L-ahelas.

Aktiivsed saidid või determinandid, mis moodustuvad V-piirkondades, hõivavad ligikaudu 2% immunoglobuliini molekuli pinnast. Igal molekulil on kaks hüpermuutujaga seotud determinanti lõigud H-ja L-ahelad, see tähendab, et iga immunoglobuliini molekul võib siduda kahte antigeeni molekuli. Seetõttu on antikehad kahevalentsed.

Immunoglobuliini molekuli tüüpiline struktuur on IgG. Ülejäänud immunoglobuliinide klassid erinevad IgG-st oma molekulide organiseerimise täiendavate elementide poolest.

Vastuseks mis tahes antigeeni sisestamisele saab toota kõigi viie klassi antikehi. Tavaliselt toodetakse kõigepealt IgM, seejärel IgG, ülejäänud - veidi hiljem.

Nr 2 Klamüüdia tekitaja. Taksonoomia. Tunnusjoon. Mikrobioloogiline diagnostika. Ravi.

Taksonoomia: seltsi Chlamydiales, perekond Chlamydaceae, perekond Chlamydia. Perekonda esindavad liigid C.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae.

Klamüüdia põhjustatud haigusi nimetatakse klamüüdia. C. trachomatise ja C. pneumoniae põhjustatud haigused on antroponoosid. Ornitoos, mille põhjustajaks on C. psittaci, on zooantroponootiline infektsioon.

Klamüüdia morfoloogia: väikesed, gram "-" bakterid, sfääriline kuju. Ärge moodustage eoseid, lippe ja kapsleid. Rakusein: 2-kihiline membraan. Neil on glükolipiidid. Gramm on punane. Peamine värvimismeetod on Romanovsky-Giemsa järgi.

2 olemasoluvormi: elementaarkehad (mitteaktiivsed nakatavad osakesed, väljaspool rakku); retikulaarsed kehad (rakkude sees, vegetatiivne vorm).

Kasvatamine: Saab paljundada ainult elusrakkudes. AT munakollane kott tibude embrüote, vastuvõtlike loomade ja rakukultuuri arendamiseks

Ensümaatiline aktiivsus: väike. Nad kääritavad püroviinamarihapet ja sünteesivad lipiide. Ei ole võimeline sünteesima suure energiasisaldusega ühendeid.

Antigeenne struktuur: Kolme tüüpi antigeenid: perekonnaspetsiifiline termostabiilne lipopolüsahhariid (rakuseinas). RSK abiga tuvastatud; valgulise iseloomuga liigispetsiifiline antigeen (välismembraanis). Tuvastage RIF-i abil; valgulise iseloomuga variantspetsiifiline antigeen.

patogeensuse tegurid. Klamüüdia välismembraani valgud on seotud nende adhesiivsete omadustega. Neid adhesiine leidub ainult elementaarkehades. Klamüüdia toodab endotoksiine. On leitud, et mõnel klamüüdias on kuumašoki valk, mis võib põhjustada autoimmuunreaktsioone.

vastupanu. Kõrge erinevate keskkonnategurite suhtes. Madalatele temperatuuridele vastupidav, kuivamine. Tundlik kuumuse suhtes.

C. trachomatis on inimeste urogenitaalsüsteemi, silmade ja hingamisteede haiguste põhjustaja.

Trahhoom on krooniline nakkushaigus, mida iseloomustab silma sidekesta ja sarvkesta kahjustus. Antroponoos. Edastatud kontakt-leibkonna teel.

Patogenees: mõjutab silmade limaskesta. See tungib läbi sidekesta ja sarvkesta epiteeli, kus see paljuneb, hävitades rakke. Areneb follikulaarne keratokonjunktiviit.

Diagnostika: sidekesta kraapide uurimine. Mõjutatud rakkudes leitakse Romanovsky-Giemsa järgi värvimisel lilla värvi tsütoplasmaatilisi lisandeid, mis asuvad tuuma - Provacheki keha lähedal. RIF-i ja ELISA-d kasutatakse ka spetsiifilise klamüüdia antigeeni tuvastamiseks mõjutatud rakkudes. Mõnikord kasutavad nad klamüüdia trachoma kasvatamist kana embrüotel või rakukultuuril.

Ravi: antibiootikumid (tetratsükliin) ja immunostimulaatorid (interferoon).

Ärahoidmine: Mittespetsiifiline.

Urogenitaalne klamüüdia on sugulisel teel leviv haigus. See on äge/krooniline nakkushaigus, mida iseloomustab valdav urogenitaaltrakti kahjustus.

Inimese nakatumine toimub suguelundite limaskestade kaudu. Nakatumise peamine mehhanism on kontakt, edasikandumise viis on seksuaalne.

Immuunsus: rakuline, nakatunud - spetsiifiliste antikehade seerumiga. Pärast ülekantud haigust - seda ei moodustu.

Diagnostika: Silmahaiguste korral kasutatakse bakterioskoopilist meetodit - sidekesta epiteeli kraapides tuvastatakse rakusisesed kandmised. RIF-i kasutatakse klamüüdia antigeeni tuvastamiseks mõjutatud rakkudes. Urogenitaaltrakti kahjustuse korral võib rakendada bioloogilist meetodit, mis põhineb rakukultuuri uuritava materjaliga nakatumisel (epiteeli kraapimine ureetrast, tupest).

Avaldus RIF, ELISA võimaldavad tuvastada klamüüdia antigeene uuritavas materjalis. Seroloogiline meetod – C. trachomatise vastase IgM tuvastamiseks kopsupõletiku diagnoosimisel vastsündinutel.

Ravi. antibiootikumid (asitromütsiin makroliidide rühmast), immunomodulaatorid, eubiootikumid.

Ärahoidmine. Ainult mittespetsiifiline (patsientide ravi), isiklik hügieen.

Venereaalne lümfogranuloom on sugulisel teel leviv haigus, mida iseloomustavad suguelundite ja piirkondlike lümfisõlmede kahjustused. Nakatumise mehhanism on kontakt, edasikandumise tee seksuaalne.

Immuunsus: püsiv, rakuline ja humoraalne immuunsus.

Diagnostika: Uuringu materjaliks on mäda, kahjustatud lümfisõlmede biopsia, vereseerum. Bakterioskoopiline meetod, bioloogiline (kasvatamine kana embrüo munakollases kotis), seroloogiline (paarisseerumiga RCC on positiivne) ja allergoloogiline (klamüüdia allergeeniga intradermaalne test).

Ravi. Antibiootikumid - makroliidid ja tetratsükliinid.

Ärahoidmine: Mittespetsiifiline.

C. pneumoniae - hingamisteede klamüüdia tekitaja, põhjustab ägedat ja kroonilist bronhiiti ja kopsupõletikku. Antroponoos. Nakatumine toimub õhus olevate tilkade kaudu. Nad sisenevad kopsudesse ülemiste hingamisteede kaudu. Põhjustada põletikku.

Diagnostika: RSK määramine spetsiifiliste antikehade tuvastamiseks (seroloogiline meetod). Esmase infektsiooni korral võetakse arvesse IgM määramist. RIF-i kasutatakse ka klamüüdia antigeeni ja PCR tuvastamiseks.

Ravi: Teostatakse antibiootikumide (tetratsükliinide ja makroliidide) abil.

Ärahoidmine: Mittespetsiifiline.

C. psittaci - ornitoosi tekitaja - äge nakkushaigus mida iseloomustab kopsude kahjustus närvisüsteem ja parenhüümorganid (maks, põrn) ja mürgistus.

Zooantroponoos. Nakkuse allikad - linnud. Nakkuse mehhanism on aerogeenne, levikutee on õhus. Haigustekitaja on lima kaudu. kestad hingavad. rajad, bronhide epiteeli, alveoolidesse, paljuneb, põletik.

Diagnostika: Uuringu materjaliks on veri, patsiendi röga, vereseerum seroloogiliseks testimiseks.

Kasutatakse bioloogilist meetodit - klamüüdia kasvatamist kana embrüo munakollases rakukultuuris. Seroloogiline meetod. Rakendage RSK, RPHA, ELISA, kasutades patsiendi paarisvereseerumit. Intradermaalne allergia test ornitiiniga.

Ravi: antibiootikumid (tetratsükliinid, makroliidid).

PILET nr 29

Nr 1 Difteeria tekitaja. Taksonoomia ja omadused. Tinglikult patogeensed korünebakterid. Mikrobioloogiline diagnostika. Anatoksilise immuunsuse tuvastamine. Spetsiifiline ennetus ja ravi.

Difteeria - äge nakkushaigus, mida iseloomustab fibrinoosne põletik neelus, kõris, harvem teistes organites ja mürgistusnähtused. Selle põhjustajaks on Corynebacterium diphtheriae.

Taksonoomia. Corynebacterium kuulub Firmicutes'i divisjoni, perekonda Corynebacterium.

Morfoloogilised ja toonilised omadused. Difteeria tekitajat iseloomustab polümorfism: leitakse peenikesi, kergelt kõveraid vardaid (enamlevinud), kookoidseid ja hargnevaid vorme. Bakterid asuvad sageli üksteise suhtes nurga all. Nad ei moodusta eoseid, neil puuduvad lipud, paljudel tüvedel on mikrokapsel. Iseloomulik on volutiini terade olemasolu pulga otstes (põhjustab nuiakujulist kuju). Difteeria põhjustaja Grami järgi värvub positiivselt.

kultuuriväärtused. Fakultatiivne anaeroobne, opt. temperatuuri. Mikroob kasvab spetsiaalsetel toitesöötmetel, näiteks Claubergi söötmel (vere-telluliitagar), millel difteeriabatsill toodab 3 tüüpi kolooniaid: a) suured, hallid, ebaühtlaste servadega, radiaalse triibuga, meenutavad karikakraid; b) väike, must, kumer, siledate servadega; c) sarnased esimesele ja teisele.

Sõltuvalt kultuurilistest ja ensümaatilistest omadustest eristatakse 3 C. diphtheriae bioloogilist varianti: gravis, mitis ja intermediate intermedius.

ensümaatiline aktiivsus. Kõrge. Nad kääritavad happe moodustamisel glükoosi ja maltoosi, ei lagunda sahharoosi, laktoosi ja mannitooli. Nad ei tooda ureaasi ega moodusta indooli. Toodab ensüümi tsüstinaasi, mis lõikab tsüsteiini H2S-ks. Moodustab katalaasi, suktsinaatdehüdrogenaasi.

antigeensed omadused. O-antigeenid on termostabiilsed polüsahhariidid, mis asuvad sügaval rakuseinas. K-antigeenid - pindmised, termolabiilsed, hallikaspetsiifilised. Seerumite abil K-antigeeni C. diph. jagatud serovarideks (58).

patogeensuse tegurid. Eksotoksiin, mis häirib valkude sünteesi ja selle tulemusena mõjutab müokardi, neerupealiste, neerude ja närviganglionide rakke. Eksotoksiini tootmise võime tuleneb toksiini moodustumise eest vastutava toxgeeni kandva profaagi olemasolust rakus. Agressiivsuse ensüümid - hüaluronidaas, neuraminidaas. Mikrokapsel kuulub ka patogeensustegurite hulka.

vastupanu. Kuivamiskindel, toime madalad temperatuurid Seetõttu võib seda mitu päeva vees olevatel esemetel hoida.

Epidemioloogia. Difteeria allikas - haiged inimesed Nakatumine toimub sagedamini hingamisteede kaudu. Peamine levikutee on õhus ja võimalik on ka kontakttee - läbi voodipesu, nõude.

Patogenees. Nakkuse sissepääsu värav on neelu, nina, neelu limaskestad, hingamisteed, silmad, suguelundid, haavapind. Sissepääsu värava kohas täheldatakse fibrinoosset põletikku, moodustub iseloomulik kile, mis ei ole peaaegu eraldatud aluskudedest. Bakterid eritavad eksotoksiini, mis satub verre – tekib toksikeemia. Toksiin mõjutab müokardit, neere, neerupealisi ja närvisüsteemi.

Kliinik. Difteerial on erinevaid lokaliseerimise vorme: neelu difteeria, mida täheldatakse 85-90% juhtudest, nina, kõri, silmade, häbeme, naha, haavade difteeria. Inkubatsiooniperiood on 2 kuni 10 päeva. Haigus algab kehatemperatuuri tõusuga, valu neelamisel, kile ilmumisega mandlitele, tõusuga. lümfisõlmed. Tekib kõriturse, difteeria laudjas, mis võib põhjustada lämbumist ja surma. Teised rasked tüsistused, mis võivad samuti põhjustada surma, on toksiline müokardiit, hingamislihaste halvatus.

Immuunsus. Pärast haigust - püsiv, intensiivne antitoksiline immuunsus. Eriti oluline on antikehade moodustumine fragmendi B vastu. Need neutraliseerivad difteeria histotoksiini, takistades viimase kinnitumist raku külge. Antibakteriaalne immuunsus - pingevaba, hallikaspetsiifiline

Mikrobioloogiline diagnostika. Tampooni abil võetakse patsiendilt kurgust ja ninast kile ja lima. Esialgse diagnoosi tegemiseks on võimalik kasutada bakterioskoopilist meetodit. Peamine diagnostiline meetod on bakterioloogiline: inokuleerimine Klauber II söötmele (vere-telluriitagar), tihedale seerumi söötmele tsüstinaasi produktsiooni tuvastamiseks, Hissi söötmele, söötmele patogeeni toksilisuse määramiseks. Liigisisene tuvastamine seisneb bio- ja serovari määramises. Difteeriatoksiini kiirendatud tuvastamiseks kasutatakse: RIHA (kaudne hemaglutinatsioonireaktsioon) antikehaga erütrotsüütide diagnostika, antikeha neutraliseerimise reaktsioon (toksiini olemasolu hinnatakse hemaglutinatsiooni ennetava toime järgi); RIA (radioimmuun) ja ELISA (ensümaatiline immunoanalüüs).

Ravi. Peamine ravimeetod on spetsiifilise antitoksilise antidifteeria hobuste vedelseerumi kohene manustamine. Inimese immunoglobuliini antidifteeria intravenoosseks manustamiseks.

Seotud vaktsiinid: DTP (absorbeeritud läkaköha-teetanuse vaktsiin), DTP (absorbeeritud difteeria-teetanuse toksoid).

№ 2 Immunoglobuliinide klassid, nende omadused.

Immunoglobuliinid jagunevad nende struktuuri, antigeensete ja immunobioloogiliste omaduste järgi viide klassi: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.

Immunoglobuliinide klass G. Isotüüp G on Ig seerumi põhiosa. See moodustab 70–80% kogu seerumi Ig-st, samas kui 50% leidub koevedelikus. Terve täiskasvanu keskmine IgG sisaldus vereseerumis on 12 g/l. IgG poolväärtusaeg on 21 päeva.

IgG on monomeer, millel on 2 antigeeni siduvat tsentrit (see võib samaaegselt siduda 2 antigeeni molekuli, seetõttu on selle valents 2), molekulmass on umbes 160 kDa ja settimiskonstant 7S. Seal on alatüübid Gl, G2, G3 ja G4. Sünteesivad küpsed B-lümfotsüüdid ja plasmarakud. See on primaarse ja sekundaarse immuunvastuse tipus vereseerumis hästi määratletud.

Omab kõrget afiinsust. IgGl ja IgG3 seovad komplementi ja G3 on aktiivsem kui Gl. IgG4-l, nagu IgE-l, on tsütofiilsus (tropism või afiinsus nuumrakud ja basofiilid) ning osaleb selle väljatöötamises allergiline reaktsioon ma kirjutan. Immunodiagnostiliste reaktsioonide korral võib IgG avalduda mittetäieliku antikehana.

Läbib kergesti platsentaarbarjääri ja annab vastsündinule humoraalse immuunsuse esimesel 3-4 elukuul. Seda võib difusiooni teel sekreteerida ka limaskestade, sealhulgas piima sekretsiooni.

IgG tagab antigeeni neutraliseerimise, opsoniseerimise ja märgistamise, käivitab komplemendi vahendatud tsütolüüsi ja antikehast sõltuva rakuvahendatud tsütotoksilisuse.

Immunoglobuliinide klass M. Kõigi Ig suurim molekul. See on pentameer, millel on 10 antigeeni siduvat tsentrit, st valents on 10. Selle molekulmass on umbes 900 kDa, settimiskonstant on 19S. On alamtüüpe Ml ja M2. Erinevalt teistest isotüüpidest on IgM molekuli rasked ahelad üles ehitatud 5 domeenist. IgM poolväärtusaeg on 5 päeva.

See moodustab umbes 5-10% kogu seerumi Ig-st. Terve täiskasvanu vereseerumis on keskmine IgM sisaldus umbes 1 g/l. See tase saavutatakse inimestel 2-4-aastaselt.

IgM on fülogeneetiliselt vanim immunoglobuliin. Sünteesitakse prekursorite ja küpsete B-lümfotsüütide poolt. Tekib esmase immuunvastuse alguses, sünteesitakse ka esimesena vastsündinu organismis - määratakse juba 20. emakasisese arengu nädalal.

Sellel on kõrge aviidsus ja see on klassikalise raja kõige tõhusam komplemendi aktivaator. Osaleb seerumi ja sekretoorse humoraalse immuunsuse moodustamises. Olles J-ahelat sisaldav polümeerne molekul, võib see moodustada sekretoorse vormi ja erituda limaskestade, sealhulgas piima sekretsiooni. Enamik normaalsetest antikehadest ja isoaglutiniinidest on IgM.

Ei läbi platsentat. Spetsiifiliste isotüübi M antikehade tuvastamine vastsündinu vereseerumis viitab kunagisele emakasisesele infektsioonile või platsenta defektile.

IgM tagab antigeeni neutraliseerimise, opsoniseerimise ja märgistamise, käivitab komplemendi vahendatud tsütolüüsi ja antikehast sõltuva rakuvahendatud tsütotoksilisuse.

Immunoglobuliinide klass A. Esineb seerumi ja sekretoorse vormina. Umbes 60% kogu IgA-st leidub limaskesta sekretsioonides.

Seerumi IgA: See moodustab umbes 10–15% kogu seerumi Ig-st. Terve täiskasvanu vereseerum sisaldab umbes 2,5 g/l IgA-d, maksimum saavutatakse 10. eluaastaks. IgA poolväärtusaeg on 6 päeva.

IgA on monomeer, sellel on 2 antigeeni siduvat tsentrit (st 2-valentset), molekulmass on umbes 170 kDa ja settimiskonstant on 7S. On alamtüüpe A1 ja A2. Sünteesivad küpsed B-lümfotsüüdid ja plasmarakud. See on primaarse ja sekundaarse immuunvastuse tipus vereseerumis hästi määratletud.

Omab kõrget afiinsust. Võib olla mittetäielik antikeha. Ei seo komplementi. Ei läbi platsentaarbarjääri.

IgA tagab antigeeni neutraliseerimise, opsoniseerimise ja märgistamise, käivitab antikehast sõltuva raku poolt vahendatud tsütotoksilisuse.

Sekretoorne IgA: Erinevalt seerumist eksisteerib sekretoorne sIgA polümeersel kujul di- või trimeerina (4- või 6-valentse) ning sisaldab J- ja S-peptiide. Molekulmass 350 kDa ja rohkem, settimiskonstant 13S ja üle selle.

Seda sünteesivad küpsed B-lümfotsüüdid ja nende järeltulijad - vastava spetsialiseerumisega plasmarakud ainult limaskestade sees ja vabanevad nende saladustesse. Tootmismaht võib ulatuda 5 g-ni päevas. SlgA kogumit peetakse kehas kõige arvukamaks - selle arv ületab IgM ja IgG kogusisaldust. Seda vereseerumis ei leidu.

IgA sekretoorne vorm on seedekulgla, urogenitaalsüsteemi ja hingamisteede limaskestade spetsiifilise humoraalse lokaalse immuunsuse peamine tegur. Tänu S-ahelale on see proteaaside suhtes vastupidav. slgA ei aktiveeri komplementi, vaid seondub tõhusalt antigeenidega ja neutraliseerib need. See takistab mikroobide adhesiooni epiteelirakud ja infektsiooni üldistamine limaskestade sees.

Immunoglobuliinide klass E. Nimetatakse ka reagin. Vere seerumi sisaldus on äärmiselt madal - umbes 0,00025 g / l. Tuvastamiseks on vaja kasutada spetsiaalseid ülitundlikke diagnostikameetodeid. Molekulmass - umbes 190 kDa, settimiskonstant - umbes 8S, monomeer. See moodustab umbes 0,002% kogu ringlevast Ig-st. See tase saavutatakse 10-15-aastaselt.

Seda sünteesivad küpsed B-lümfotsüüdid ja plasmarakud peamiselt bronhopulmonaalpuu lümfoidkoes ja seedetraktis.

Ei seo komplementi. Ei läbi platsentaarbarjääri. Sellel on väljendunud tsütofiilsus - tropism nuumrakkude ja basofiilide suhtes. Osaleb ülitundlikkuse tekkes vahetu tüüp- I tüüpi reaktsioon.

Immunoglobuliinide klass D. Selle isotüübi Ig kohta pole palju teavet. Peaaegu täielikult sisaldub vereseerumis kontsentratsioonis umbes 0,03 g / l (umbes 0,2% ringleva Ig koguarvust). IgD molekulmass on 160 kDa ja settimiskonstant 7S, monomeer.

Ei seo komplementi. Ei läbi platsentaarbarjääri. See on B-lümfotsüütide prekursorite retseptor.

PILET nr 30

Nr 1 Amööbiaasi tekitaja. Taksonoomia. Iseloomulik. Mikrobioloogiline diagnostika. spetsiifiline ravi.

Taksonoomia: hõim Sarcomastigophorae, alamhõim Sarcodina, klass Lobosia, seltsi Amoebida.

Morfoloogia: Patogeeni arengus on kaks etappi: vegetatiivne ja tsüstiline. Vegetatiivsel etapil on mitu vormi: suur vegetatiivne (kude), väike vegetatiivne; Pretsüstiline vorm, mis sarnaneb poolläbipaistvatele, moodustades tsüstid.

Tsüst (puhkestaadium) on ovaalse kujuga. Küps tsüst sisaldab 4 tuuma. Poolläbipaistev vorm on passiivne, elab ülemise käärsoole luumenis kahjutu kommensaalina, toitudes bakteritest ja detriidist.

Suur vegetatiivne vorm moodustub teatud tingimustel väikesest vegetatiivsest vormist. See on suurim, moodustab pseudopoodia ja on liikumisega. Võib fagotsüteerida erütrotsüüte. Leitud amööbiaasi korral värskest väljaheitest.

kasvatamine: toitainerikkal söötmel.

Vastupidavus: Väljaspool keha surevad patogeeni vegetatiivsed vormid kiiresti (30 minuti jooksul). Tsüstid on vastupidavad keskkond säilivad väljaheites ja vees. Toiduainetes, köögiviljadel ja puuviljadel püsivad tsüstid mitu päeva. Nad surevad keetmisel.

Epidemioloogia: Amebiasis - antroponootiline haigus; sissetungi allikas on inimene. Ülekandemehhanism on fekaal-oraalne. Nakatumine tekib siis, kui tsüstid sisestatakse toidu, vee ja majapidamistarvete kaudu.

Patogenees ja kliinik: Soole sisenenud ja seejärel neist moodustunud tsüstid, amööbide luminaalsed vormid võivad elada jämesooles ilma haigusi põhjustamata. Keha vastupanuvõime vähenemisega tungib amööb sooleseina ja paljuneb. Areneb soole amebiaas.

Koevormi trofosoidid on pseudopoodide moodustumise tõttu liikuvad. Nad tungivad läbi käärsoole seina, põhjustades nekroosi; võimeline fagotsüteerima erütrotsüüte; võib leida inimese väljaheites. Nekroosiga tekivad haavandid. Kliiniliselt väljendub soole amebiaas sagedase vedela väljaheitena koos verega, millega kaasneb palavik ja dehüdratsioon. Väljaheites leitakse mäda ja lima, mõnikord koos verega.

Verevooluga amööb võib siseneda maksa, kopsudesse, ajju, mille tulemusena areneb välja sooleväline amööbias.

Immuunsus: Ebastabiilne, peamiselt on aktiveeritud mobiilsideühendus.

Mikrobioloogiline diagnostika. Peamine meetod on patsiendi väljaheidete mikroskoopiline uurimine, samuti abstsesside sisu. siseorganid. Määrdused värvitakse Lugoli lahuse või hematoksüliiniga. Seroloogilised uuringud (RNGA, ELISA, RSK): kõrgeim antikehade tiiter vereseerumis tuvastatakse soolevälise amööbiaasi korral.

Ravi: Kandke metronidasool, furamiid.

Ärahoidmine: tsüstiliste eritajate ja amööbikandjate tuvastamine ja ravi, üldised sanitaarmeetmed.

Nr 2 Interferoonid. Iseloom, saamise meetodid. Rakendus.

Interferoonid on glükoproteiinid, mida rakud toodavad vastusena viirusinfektsioonile ja muudele stiimulitele. Blokeerida viiruse paljunemist teistes rakkudes ja osaleda rakkude interaktsioonis immuunsussüsteem. Interferoonidel on kaks seroloogilist rühma: I tüüpi - IFN-? ja IFN-y; II tüüp - IFN-.? I tüüpi interferoonidel on viiruse- ja kasvajavastane toime, samas kui II tüüpi interferoonid reguleerivad spetsiifilist immuunvastust ja mittespetsiifilist resistentsust.

Interferooni (leukotsüütilist) toodavad leukotsüüdid, mida töödeldakse viiruste ja muude ainetega. α-interferooni (fibroblast) toodavad viirusega töödeldud fibroblastid.

I tüüpi IFN seondub tervete rakkudega ja kaitseb neid viiruste eest. I tüüpi IFN-i viirusevastane toime võib tuleneda ka sellest, et see on võimeline pärssima rakkude proliferatsiooni, häirides aminohapete sünteesi.

IFN-? toodetakse T-lümfotsüütide ja NK poolt. Stimuleerib T- ja B-lümfotsüütide, monotsüütide/makrofaagide ja neutrofiilide aktiivsust. Indutseerib aktiveeritud makrofaagide, keratinotsüütide, hepatotsüütide, rakkude apoptoosi luuüdi, endoteliotsüüdid ja pärsib perifeersete monotsüütide ja herpesega nakatunud neuronite apoptoosi.

Geneetiliselt muundatud leukotsüütide interferooni toodetakse prokarüootsetes süsteemides (E. coli). Biotehnoloogia hankimine leukotsüütide interferoon hõlmab järgmisi etappe: 1) leukotsüütide massi töötlemine interferooni indutseerijatega; 2) mRNA segu eraldamine töödeldud rakkudest; 3) kogu komplementaarse DNA saamine pöördtranskriptaasi abil; 4) cDNA sisestamine plasmiidi coli ja selle kloonimine; 5) interferooni geene sisaldavate kloonide valik; 6) tugeva promootori lisamine plasmiidi geeni edukaks transkriptsiooniks; 7) interferooni geeni ekspressioon, s.o. vastava valgu süntees; 8) prokarüootsete rakkude hävitamine ja interferooni puhastamine afiinsuskromatograafia abil.

Interferoonid kohaldada mitmete viirusnakkuste ennetamiseks ja raviks. Nende toime määratakse ravimi annuse järgi, kuid interferooni suurtel annustel on toksiline toime. Interferoone kasutatakse laialdaselt gripi ja muude ägedate haiguste korral hingamisteede haigused. Ravim on efektiivne varajased staadiumid haigus, manustatakse paikselt. Interferoonidel on terapeutiline toime B-hepatiidi, herpese ja ka pahaloomuliste kasvajate korral.

Tuvastamine vereseerumis patsiendi antikehad patogeeni antigeenide vastu võimaldavad teil teha haiguse diagnoosi. Seroloogilisi uuringuid kasutatakse ka mikroobide antigeenide, erinevate bioloogiliselt aktiivsete ainete, veregruppide, koe- ja kasvajaantigeenide, immuunkomplekside, rakuretseptorite jms tuvastamiseks.

Mikroobi isoleerimisel patsiendilt tuvastatakse patogeen, uurides selle antigeenseid omadusi, kasutades immuundiagnostilisi seerumeid, st spetsiifilisi antikehi sisaldavaid hüperimmuniseeritud loomade vereseerumeid. See nn seroloogiline tuvastamine mikroorganismid.

Laialdaselt kasutatav mikrobioloogias ja immunoloogias aglutinatsioon, sadestumine, neutraliseerimisreaktsioonid, reaktsioonid, mis hõlmavad komplementi, kasutades märgistatud antikehi ja antigeene (radioimmunoloogiline, ensüümi immunoanalüüs, immunofluorestsentsmeetodid). Loetletud reaktsioonid erinevad registreeritud toime ja staadiumitehnika poolest, kuid need kõik põhinevad antigeeni ja antikeha interaktsiooni reaktsioonil ning neid kasutatakse nii antikehade kui ka antigeenide tuvastamiseks. Immuunsusreaktsioone iseloomustab kõrge tundlikkus ja spetsiifilisus.

Antikeha ja antigeeni interaktsiooni tunnused on laborite diagnostiliste reaktsioonide aluseks. Reaktsioon in vitro antigeeni ja antikeha vahel koosneb spetsiifilisest ja mittespetsiifilisest faasist. AT konkreetne faas toimub antikeha aktiivse saidi kiire spetsiifiline seondumine antigeeni determinandiga. Siis tuleb mittespetsiifiline faas - aeglasem, mis väljendub nähtavates füüsikalistes nähtustes, näiteks helveste moodustumisel (aglutinatsiooninähtus) või sademe kujul hägususena. See faas nõuab teatud tingimusi (elektrolüüdid, söötme optimaalne pH).

Küsimusele kiirdiagnostika kohta:

1. Puhtal kujul isoleeritud kultuuri saab diagnoosida.
2. Spetsiaalselt varustatud laborites (peab olema luba)
3. Rangete reeglite järgimine, nagu: isoleeritud ruum, vajalikud spetsiaalsed kaitseülikonnad, ruumide kohustuslik täielik desinfitseerimine pärast patogeeniga töötamist, teadlaste desinfitseerimine pärast tööd.

Ekspressdiagnostika meetodid.
1. Bakterioloogia - kombineeritud polütroopne toitainekeskkond morfide, tintori, biokeemi kiireks uurimiseks. omadused. Ensüümiindikaatorlindi kasutamine, elektrofüüsikaline meetod, erinevate ainetega (glükaso, laktoos jne) immutatud paberketaste meetod
2. Faagi diagnostika.
3. Serodiagnosis - Mancini meetod, sadestamise reaktsioon geelis vastavalt Ascoli, RA, RPGA.
4. Bakterioskoopia - otsene ja kaudne RIF.

Ekspressdiagnostika meetodid:
Koolera - M. Z. Ermolyeva, immobiliseerimispiirkond koolera diagnostilise seerumiga, RIF.
Tulareemia - RA klaasil, RPGA
Chume - faagitüüpimine, süsivesikute paberketaste meetod, RPHA.
Siberi katk - Ascoli meetod, RIF, RPGA.

Kasvu iseloom: on kolm difuusset (fakultatiivsed anaeroobid), põhjalähedased (kohustuslikud anaeroobid) ja pinnaaeroobid (kohustuslikud anaeroobid).

Puhta kultuuri isoleerimine anaeroobsed bakterid

Laboratoorses praktikas on sageli vaja töötada anaeroobsete mikroorganismidega. Nad on toitainekeskkonna suhtes nõudlikumad kui aeroobid, vajavad sageli spetsiaalseid kasvulisandeid, vajavad kasvatamise ajal hapnikuvarustuse katkemist, nende kasvuperiood on pikem. Seetõttu on nendega töötamine keerulisem ja nõuab bakterioloogide ja laborantide märkimisväärset tähelepanu.

Oluline on kaitsta anaeroobseid patogeene sisaldavat materjali õhuhapniku toksiliste mõjude eest. Seetõttu on soovitatav võtta materjal mädapõletiku koldetest nende punktsiooni ajal süstlaga, aeg materjali võtmise ja toitekeskkonnale külvamise vahel peaks olema võimalikult lühike.

Kuna anaeroobsete bakterite kasvatamiseks kasutatakse spetsiaalseid toitekeskkondi, mis ei tohiks sisaldada hapnikku ja millel on madal redokspotentsiaal (-20 -150 mV), siis lisatakse nende koostisesse indikaatorid - resasuriin, metüleensinine jms, mis reageerivad muutus selles potentsiaalis. Selle kasvuga taastuvad indikaatorite värvitud vormid ja muutuvad nende värvi: resasuriin värvib keskmiselt roosa ja metüleensinine - sinine. Sellised muutused näitavad, et anaeroobsete mikroobide kasvatamiseks ei ole söödet võimalik kasutada.

See aitab vähendada redokspotentsiaali, kui söötmesse sisestatakse vähemalt 0,05% agarit, mis viskoossust suurendades aitab vähendada hapnikuvarustust. See omakorda saavutatakse ka värske (mitte hiljem kui kaks tundi pärast tootmist) ja vähendatud söötme kasutamisega.

Tuleb märkida, et anaeroobsete bakterite metabolismi fermentatiivse tüübi iseärasuste tõttu vajavad nad toitainete ja vitamiinide poolest rikkamat söödet. Kõige sagedamini kasutatavad on südame-aju ja maksa infusioonid, soja- ja pärmiekstraktid, kaseiini hüdrolüütiline seedimine, peptoon, trüptoon. Kohustuslik on lisada kasvufaktoreid, nagu tween-80, hemiin, menadioon, täis- või hemolüüsitud veri.

Aeroobsete mikroorganismide puhaskultuuri eraldamine koosneb mitmest etapist.
Esimesel päeval (uuringu 1. etapp) viiakse patoloogiline materjal steriilsesse mahutisse (katseklaas, kolb, viaal). Seda uuritakse selleks välimus, konsistentsi, värvuse, lõhna ja muude tunnuste korral valmistatakse äigepreparaadi, värvitakse ja uuritakse mikroskoobi all. Mõnel juhul (äge gonorröa, katk) on selles etapis võimalik panna eelnev diagnoos ja lisaks valida sööde, millele materjal külvatakse. Võtsin seda bakterioloogilise silmusega (kasutatakse kõige sagedamini), spaatliga Drygalsky meetodil, vati-marli tampooniga. Tassid suletakse, pööratakse tagurpidi, allkirjastatakse spetsiaalse pliiatsiga ja asetatakse optimaalse temperatuuriga (37 ° C) termostaadi 18-48 aastaks. Etapi eesmärk on saada isoleeritud mikroorganismide kolooniaid.
Mõnikord külvatakse aga materjali kuhjamiseks vedelale toitekeskkonnale.

Kahtlastest kolooniatest valmistatakse määrded, mis värvitakse Gram-meetodil, et uurida patogeenide morfoloogilisi ja toonilisi omadusi, ning liikuvaid baktereid uuritakse “rippuva” või “purustatud” tilgana. Need märgid on teatud tüüpi mikroorganismide iseloomustamisel äärmiselt suure diagnostilise väärtusega.
Uuritud kolooniate jäänused eemaldatakse ettevaatlikult söötme pinnalt ilma teisi puudutamata ja nakatatakse kald agarile või Petri tassi sektoritele toitekeskkonnaga, et saada puhas kultuur. Katseklaasid või -nõud põllukultuuridega asetatakse 18-24 tunniks optimaalse temperatuuriga termostaadi.

Vedelal toitainekeskkonnal võivad bakterid kasvada ka erinevalt, kuigi kasvuilmingute tunnused on kehvemad kui tahketel.

Bakterid on võimelised tekitama söötme hajutatud hägusust, samas kui selle värvus ei pruugi muutuda ega omandada pigmendi värvi. Seda kasvumustrit täheldatakse kõige sagedamini enamiku fakultatiivsete anaeroobsete mikroorganismide puhul.

Mõnikord tekib toru põhjas sade. See võib olla murenev, homogeenne, viskoosne, limane jne. Selle kohal olev keskkond võib jääda läbipaistvaks või muutuda häguseks. Kui mikroobid ei moodusta pigmenti, on sade erksa või kollaka värvusega. Anaeroobsed bakterid kasvavad reeglina sarnaselt.

Seina kasv väljendub katseklaasi siseseintele kinnitunud helveste, terade moodustumisel. Sööde jääb läbipaistvaks.

Aeroobsed bakterid kipuvad pinnal kasvama. Sageli tekib pinnale õrn värvitu või sinakas kile vaevumärgatava katte kujul, mis kaob söötme maha raputamisel või segamisel. Kile võib olla niiske, paks, silmkoelise, lima konsistentsiga ja kleepuv aasa külge, venitades selle jaoks. Siiski on ka tihe, kuiv, rabe kile, mille värvus sõltub pigmendist, mida toodavad mikroorganismid.

Vajadusel tehakse äigepreparaadi, värvitakse, uuritakse mikroskoobi all ja mikroorganismid külvatakse isoleeritud kolooniate saamiseks silmusega tiheda toitekeskkonna pinnale.

Kolmandal päeval (uuringu 3. etapp) uuritakse mikroorganismide puhaskultuuri kasvu olemust ja tehakse kindlaks selle identifitseerimine.

Esiteks pööratakse tähelepanu mikroorganismide kasvu omadustele söötmel ja tehakse määrdumine, värvides seda Grami meetodil, et kontrollida kultuuri puhtust. Kui mikroskoobi all vaadeldakse sama tüüpi morfoloogiat, suurust ja toonimisvõimet (värvimisvõimet) omavaid baktereid, järeldatakse, et kultuur on puhas. Mõnel juhul võib juba nende kasvu välimuse ja omaduste põhjal teha järelduse isoleeritud patogeenide tüübi kohta. Bakterite tüübi määramine nende jaoks morfoloogilised tunnused nimetatakse morfoloogiliseks identifitseerimiseks. Patogeenide tüübi määramist nende kultuuriliste omaduste järgi nimetatakse kultuuriliseks identifitseerimiseks.

Nendest uuringutest ei piisa aga lõpliku järelduse tegemiseks isoleeritud mikroobide tüübi kohta. Seetõttu uurivad nad bakterite biokeemilisi omadusi. Need on üsna mitmekesised.

Kõige sagedamini uuritakse sahharolüütilisi, proteolüütilisi, peptolüütilisi, hemolüütilisi omadusi, dekarboksülaasi, oksüdaasi, katalaasi, plasmakoagulaasi, DNaasi, fibrinolüsiini ensüümide moodustumist, nitraatide redutseerimist nitrititeks jms. Selleks on spetsiaalsed toitekeskkonnad, mis on nakatatud mikroorganismidega (kirju Hissi sari, MPB, kalgendatud vadak, piim jne).

Patogeeni tüübi määramist selle biokeemiliste omaduste järgi nimetatakse biokeemiliseks tuvastamiseks.

KULTUURIMEETODID
JA PUHTA BAKTERI KULTUURI ERALDAMINE

Edukaks kasvatamiseks on lisaks õigesti valitud söötmele ja korralikult külvatud optimaalsed tingimused vajalikud: temperatuur, niiskus, aeratsioon (õhuvarustus). Anaeroobide kasvatamine on aeroobidest keerulisem, õhu eemaldamiseks toitekeskkonnast kasutatakse erinevaid meetodeid.
Teatud tüüpi bakterite (puhaskultuuri) eraldamine uuritavast materjalist, mis tavaliselt sisaldab erinevate mikroorganismide segu, on iga bakterioloogilise uuringu üks etappe. Puhas mikroobikultuur saadakse eraldatud mikroobikolooniast.
Verest puhaskultuuri (hemokultuuri) isoleerimisel "kasvatatakse" eelnevalt vedelas söötmes: 100-150 ml vedelsöötmes külvatakse 10-15 ml steriilset verd. Külvatud vere ja toitekeskkonna suhe 1:10 ei ole juhuslik – nii saavutatakse vere lahjendus (lahjendamata veri mõjub mikroorganismidele kahjulikult).
Bakterite puhaskultuuri eraldamise sammud
I etapp (kohalik materjal)
Mikroskoopia (ligikaudne ettekujutus mikrofloorast).
Külv tihedale toitekeskkonnale (kolooniate saamine).
II etapp (isoleeritud kolooniad)
Kolooniate uurimine (bakterite kultuurilised omadused).
Mikroobide mikroskoopiline uurimine värvitud äigepreparaadis
(bakterite morfoloogilised omadused).
Inokuleerimine toitaineagarile, et eraldada puhas kultuur.
III etapp (puhaskultuur)
Kultuurilise, morfoloogilise, biokeemilise määramine
ja muud omadused bakterikultuuri tuvastamiseks
BAKTERITE IDENTIFITSEERIMINE

Isoleeritud bakterikultuuride identifitseerimiseks uuritakse bakterite morfoloogiat, nende kultuurilisi, biokeemilisi ja muid igale liigile omaseid omadusi.

Sarnane teave.

11621 0

Seroloogilised reaktsioonid määratakse vastavalt nähtustele, mis kaasnevad antigeeni-antikeha kompleksi moodustumisega erinevate omadustega komponentide koostoimel. Esinevad aglutinatsiooni-, sadenemis- ja lüüsireaktsioonid.

Aglutinatsioonireaktsioon (RA)

Aglutinatsioonireaktsioon (RA) põhineb spetsiifiliste antikehadega interakteeruva korpuskulaarse antigeeni (bakterite suspensioon, sensibiliseeritud erütrotsüüdid, lateksiosakesed jne) kasutamisel, mille tulemusena sadestub tekkinud antigeen-antikeha kompleks. Seda reaktsiooni kasutatakse laialdaselt laboripraktikas bakteriaalsete infektsioonide seroloogiliseks diagnoosimiseks ja isoleeritud mikroorganismide tuvastamiseks.

RA-d kasutatakse paljude nakkushaiguste diagnoosimiseks: brutselloos (Wrighti, Heddlesoni reaktsioon), tulareemia, leptospiroos (RAL - leptospira aglutinatsiooni ja lüüsi reaktsioon), listerioos, tüüfus(PAP – riketsia aglutinatsioonireaktsioon), šigelloos, jersinioos, pseudotuberkuloos jne.

Kaudse või passiivse aglutinatsiooni reaktsioon (RIGA või RPGA).

Selle reaktsiooni käivitamiseks tuleb loomade (lambad, ahvid, ahvid) erütrotsüüdid merisead, mõned linnud), mis on sensibiliseeritud antikehade või antigeenidega, mis saavutatakse erütrotsüütide suspensiooni ja antigeeni või immuunseerumi lahuse inkubeerimisega.

Antigeenidega sensibiliseeritud erütrotsüütide põhjal saadud diagnostikaid nimetatakse antigeenne erütrotsüütide diagnostika. Need on ette nähtud antikehade tuvastamiseks vereseerumite seerialahjendustes, nagu erütrotsüütide šigelloosi diagnostilised ained, erütrotsüütide salmonella O-diagnostika.

Vastavalt sellele nimetatakse spetsiifiliste immunoglobuliinidega sensibiliseeritud erütrotsüütidel põhinevaid diagnostilisi meetodeid antikeha(immunoglobuliin) diagnostika ja need aitavad tuvastada antigeene erinevat materjali näiteks RIGA jaoks mõeldud erütrotsüütide immunoglobuliini difteeria diagnostika, mida kasutatakse korünebakterite difteeria eksotoksiini tuvastamiseks vedelas toitainekeskkonnas, kui sellesse nakatatakse ninast ja orofarünksist pärit materjal.

Hemaglutinatsioonireaktsiooni kasutatakse nii bakteriaalsete (tüüfus, paratüüfus, düsenteeria, brutselloos, katk, koolera jt) kui ka viirusnakkuste (gripp, adenoviirusnakkused, leetrid jne) diagnoosimiseks. RIGA on RA suhtes tundlikkuse ja spetsiifilisuse poolest parem.

Hemaglutinatsiooni pärssimise reaktsioon (HITA)

Hemaglutinatsiooni inhibeerimise testi (HITA) kasutatakse viirusevastaste antikehade tiitrimiseks vereseerumis, samuti isoleeritud viiruskultuuride seotuse tüübi kindlakstegemiseks. RTHA abil saab diagnoosida neid viirusnakkusi, mille patogeenidel on hemaglutineerivad omadused.

Meetodi põhimõte seisneb selles, et teatud tüüpi viiruse antikehi sisaldav seerum surub alla selle hemaglutineeriva aktiivsuse ja erütrotsüüdid jäävad aglutineerimata.

Passiivse hemaglutinatsiooni (RTPGA) pärssimise (viivituse) reaktsioon.

RTGA-s osalevad kolm komponenti: immuunseerum, antigeen (testmaterjal) ja sensibiliseeritud erütrotsüüdid.

Kui uuritav materjal sisaldab antigeeni, mis reageerib spetsiifiliselt immuunstandardseerumi antikehadega, siis see seob neid ja sellele järgneval seerumile homoloogse antigeeniga sensibiliseeritud erütrotsüütide lisamisel hemaglutinatsiooni ei teki.

RTPHA-d kasutatakse mikroobsete antigeenide tuvastamiseks, nende kvantifitseerimiseks ja ka TPHA spetsiifilisuse kontrollimiseks.

Lateks aglutinatsioonireaktsioon (RLA)

Lateksosakesi kasutatakse antikehade (immunoglobuliinide) kandjatena. RLA on ekspressmeetod nakkushaiguste diagnoosimiseks, võttes arvesse sellele kuluvat aega (kuni 10 minutit) ja võimet tuvastada antigeeni väikeses koguses uuritavast materjalist.

RLA-d kasutatakse Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae b-tüüpi, Neisseria meningitidis'e antigeenide näitamiseks tserebrospinaalvedelikus, A-rühma streptokokkide tuvastamiseks kurgutampooniproovides, salmonelloosi, jersinioosi ja teiste haiguste diagnoosimiseks. Meetodi tundlikkus on 1-10 ng/ml ehk 10³ -106 bakterirakku 1 µl-s.

Koaglutinatsioonireaktsioon (RKoA)

Koaglutinatsioonireaktsioon (RKoA) põhineb stafülokokkide valgu A võimel siduda spetsiifilisi immunoglobuliine. RKA - ekspressdiagnostika meetod - on mõeldud lahustuvate termostabiilsete antigeenide tuvastamiseks inimese saladustes ja tsirkuleerivate immuunkomplekside (CIC) koostises. Spetsiifiliste antigeenide tuvastamine CEC koostises nõuab nende eelnevat sadestamist vereseerumist.

sademete reaktsioon

Sadestamisreaktsioonis (RP) moodustuvad antikehade interaktsiooni tulemusena väga dispergeeritud lahustuvate antigeenidega (valgud, polüsahhariidid) komplemendi osalusel kompleksid - sademed. See on tundlik test, mida kasutatakse mitmesuguste antigeenide ja antikehade tuvastamiseks ja iseloomustamiseks. Kvaliteetse RP lihtsaim näide on läbipaistmatu sadestumisriba moodustumine katseklaasis immuunseerumi antigeenikihistumise piiril – rõngassadestamise reaktsioon. Poolvedelagar- või agaroosgeelides kasutatakse laialdaselt erinevat tüüpi RP-d (topelt-immunodifusioonimeetod, radiaalne immunodifusioonimeetod, immunoelektroforees).

Komplemendi fikseerimise reaktsioon (CFR)

Komplemendi sidumise reaktsioon (CFR) põhineb hemolüüsi nähtusel, mis hõlmab komplementi, st. suudab tuvastada ainult komplementi fikseerivaid antikehi.

RSC-d kasutatakse laialdaselt paljude bakteriaalsete ja viirusnakkuste, riketsioosi, klamüüdia, nakkuslik mononukleoos, algloomade infektsioonid, helmintiaasid. RSK on kompleksne seroloogiline reaktsioon, milles osalevad kaks süsteemi: test (vereseerum), mida esindavad antigeen-antikeha ja komplemendi süsteem, ja hemolüütiline (lamba erütrotsüüdid + hemolüütiline seerum). Hemolüütiline seerum on jäära erütrotsüütidega immuniseeritud küüliku kuuminaktiveeritud vereseerum. See sisaldab lamba erütrotsüütide vastaseid antikehi.

RSK positiivset tulemust - hemolüüsi puudumist - täheldatakse, kui uuritav seerum sisaldab antigeeniga homoloogseid antikehi. Sel juhul seob tekkinud antigeen-antikeha kompleks komplemendi ja vaba komplemendi puudumisel ei kaasne hemolüütilise süsteemi lisamisega hemolüüsi. Antigeenile vastavate antikehade puudumisel seerumis ei toimu antigeen-antikeha kompleksi teket, komplement jääb vabaks ja seerum põhjustab erütrotsüütide hemolüüsi, s.o. hemolüüsi esinemine on reaktsiooni negatiivne tulemus.

Juštšuk N.D., Vengerov Yu.Ya.