Vereanalüüside seroloogilised meetodid haiguste diagnoosimiseks. Viirusevastaste antikehade (at) tuvastamine vereseerumis

Lihtsam ja soodsam lähenemine - viirusevastaste antikehade (AT) tuvastamine seerumis. Vereproove tuleb võtta kaks korda: kohe pärast haiguse algust kliinilised tunnused ja 2-3 nädala pärast. Äärmiselt oluline on uurida täpselt kahte seerumiproovi. Ühe uuringu tulemusi ei saa pidada lõplikuks, kuna AT ilmnemist ei ole võimalik käesoleva juhtumiga seostada. Võimalik, et need antikehad ringlevad pärast eelmist nakatumist. Sellises olukorras on raske taastumisperioodil saadud seerumi uuringu rolli üle hinnata. Haiguse esinemisele esimese proovi võtmise perioodil viitab AT tiitri vähemalt neljakordne tõus, mis tuvastati teise proovi uuringu käigus.

Allpool loetletud meetodid ei võimalda antikehade diferentseerumist(AT) moodustub haiguse ajal ja ringleb pärast paranemist (selle perioodi kestus on erinevate infektsioonide puhul erinev). Kuna adekvaatse diagnoosi jaoks on vaja kinnitada AT tiitrite olulist suurenemist kahes proovis, uuritakse esimest proovi ägedas faasis ja teist - taastumisperioodil (2-3 nädala pärast). Saadud tulemused on retrospektiivsed ja sobivad paremini epidemioloogilisteks uuringuteks.

RTGA tuvastab viiruste (näiteks gripiviiruse) hemaglutiniinide vastu sünteesitud AT. Meetod muudab selliste antikehade (AT) tuvastamise patsiendi seerumis lihtsaks.

RSK- põhiline serodiagnostika meetod viirusnakkused (olemasolevate hulgas). Reaktsioon tuvastab komplementi fikseerivad IgM ja IgG, kuid ei erista neid; saadud tulemuste optimeerimiseks nõuab reaktsiooni formuleerimine personali teatud oskusi.

REEF. Kui on olemas nakatunud koe biopsia ja kaubanduslikud fluorestseiiniga märgistatud AT komplektid, võib diagnoosi kinnitada otsene immunofluorestsents. Reaktsiooni formuleerimine hõlmab uuritud koe inkubeerimist AT-ga, nende järgnevat eemaldamist ja proovi fluorestsentsmikroskoopiat.

Immunosorptsioonimeetodid viirusevastaste antikehade tuvastamiseks

Immunosorptsiooni meetodid(näiteks ELISA ja RIA) on informatiivsemad, kuna need tuvastavad IgM ja IgG eraldi, mis võimaldab teha teatud järeldusi nakkusprotsessi dünaamika või taastumisseisundi kohta. AT tuvastamiseks adsorbeeritakse teadaolev Ag tahkele substraadile (näiteks katseklaaside seintele, plastikust mikroplaatidele, Petri tassidele) ja lisatakse patsiendi seerumi erinevaid lahjendusi. Pärast sobivat inkubeerimist eemaldatakse seondumata AT-d, lisatakse ensüümiga märgistatud inimese Ig vastane antiseerum, seondumata AT-de inkubeerimise ja pesemise protseduuri korratakse ning lisatakse mis tahes kromogeenne substraat (ensüümi toime suhtes tundlik). Kuna värvimuutus on võrdeline spetsiifiliste antikehade sisaldusega, on nende tiitrit võimalik spektrofotomeetrilise meetodiga määrata. HIV-nakkuse diagnoosimisel on enim levinud immunoblotanalüüs.

Seroloogiline uuring ehk teisisõnu seroloogiline analüüs on bioloogiliste materjalide uurimine laboris. See analüüs võimaldab teil kindlaks teha patogeensete bakterite olemasolu uuritavas organismis või toodetes, mis läbivad kontrollkontrolli.

Seroloogilised diagnostikameetodid

Seerumite või muude bioloogiliste objektide (piim, sapp, sülg, soole limaskesta tampoonid, aga ka kopromaterjalid) uurimine annab üsna usaldusväärse ettekujutuse organismi reaktsioonist nakkustekitaja sissetoomisele. Tuleb märkida, et seroloogiliste uurimismeetodite kasutamine ei ole mitte ainult diagnostilise väärtusega, vaid annab usaldusväärset teavet keha kaitse taseme, elanikkonna immuunsuse seisundi ja erinevat tüüpi rotaviiruste ringluse kohta uuritavas piirkonnas. Seroloogiliste uuringute tulemused võivad anda teavet ka profülaktiliste ravimite antigeense koostise optimeerimiseks ja kasutada vaktsiinide immunoloogilise efektiivsuse hindamiseks.

Siiski tuleb märkida, et vajadus uurida paarisvereseerumeid, mis võetakse 1,5-2-nädalaste intervallidega, ja ekspressdiagnostikameetodite kättesaadavus vähendavad seroloogiliste reaktsioonide diagnostilist väärtust.

Seetõttu leitakse traditsioonilised seroloogilised testid - komplemendi sidumise test (CFR) ja hemaglutinatsiooni pärssimise test (HIT) praegune aeg ainult piiratud rakendus. Nende meetodite lihtsus, reaktiivide kättesaadavus ja odavus muudavad need siiski laboripraktikas kasutatavaks. RSK ja RTGA seadistamine toimub vastavalt üldtunnustatud meetoditele.

Näide RSK kasutamisest vaktsineerimisjärgse immuunsuse uurimiseks on K. Midkhani töö (1989). 116 5-kuulise lapse seerumite uurimisel täheldati RSK andmetel usaldusväärseid serokonversioone 44% juhtudest ning neutralisatsioonitesti (PH) ja ensüümi immuunanalüüsi (ELISA) tulemuste põhjal 83 ja 96% juhtudest. vastavalt.

Immuunsuse uurimine

Rahvastiku immuunsuse uurimiseks CSC abil uurisime 1246 OKZ-ga patsiendi seerumit vanuses mitu kuud kuni 80 aastat ja vanemad. Selgus, et komplementi siduvate antikehade geomeetrilised keskmised tiitrid olid kõrgeimad vanuserühmades 2–4 ja vanemad kui 60 aastat, mis kinnitab meie varasemaid andmeid rotaviirusnakkuse kõrgeima levimuse kohta nendes vanuserühmades.

Rotaviiruse test

RTGA-d kasutatakse rotaviirusnakkuse uurimisel sagedamini kui RSK-d ja reeglina koos teiste laboratoorsete testidega. Seega Andrade J. P. jt. kasutas rotaviiruse VP2, VP4, VP6 ja VP7 struktuursete valkude antikehade uurimiseks RTGA-d, immunobloti, ELISA-blokki. Autorite sõnul leiti 2–4-aastastel lastel rotaviiruste vastaseid hemaglutineerivaid antikehi 70–80%.

Sõltuvalt teatud valkude antikehade tasemest tuvastasid autorid RTGA järgi 4 indiviidide rühma. I ja II rühma (60%) kuulusid lapsed, kellel oli kõrge VP4 ja VP7 vastaste antikehade tase, ja need klassifitseeriti "immuunseks". AT III rühm(4%) viidatud isikud madal tase VP7 ja VP6 vastased antikehad, nn "osaliselt immuunsed". IV rühma lapsed (36%), kellel RTGA järgi antikehi ei tuvastatud, määrati "mitteimmuunseks" ja moodustasid riskirühma, kuna nende hulgas on võimalik raske rotaviiruse infektsiooni teke. Tuleb märkida, et selles vaatluses olid RTGA ja ELISA ploki tundlikkusnäitajad üsna võrreldavad.

RTGA-d on korduvalt kasutatud struktuurse valgu VP4 uurimiseks. Uuringud on näidanud, et selle hemaglutinatsiooni aktiivsust inhibeerivad spetsiifiliselt antiseerumid, kinnitades seega, et VP4 on rotaviiruste hemaglutiniin. Sarnased andmed avaldas varem M. Ezekiel (1995).

Seega näitavad esitatud tööd, et RSK ja RTGA on endiselt kasutusel rotaviirusnakkuse uurimisel, kuid need meetodid on abistava iseloomuga ja neid tuleks teiste testidega dubleerida.

Neutraliseerimistestid

Neutraliseerimisreaktsioon põhineb inimese või looma immuunseerumi võimel neutraliseerida viiruse paljunemist ja seeläbi vältida selle nähtusega seotud ilminguid. Olenevalt bioloogilisest mudelist võivad need ilmingud olla: konkreetse kliinikuga haiguse tekkimine, viiruse paljunemine ja isoleerimine, spetsiifiliste antikehade teke, samuti tsütopaatilise toime ilmnemine või blobide teke kasutamisel. rakukultuur.

Makrobioloogilisi mudeleid kasutatakse praegu peamiselt veterinaarmeditsiinis, viiruste tuvastamine inimestel toimub enamasti rakukultuuril, nii esmasel kui ka transfusioonil. PH-meetodid on jagatud kahte rühma vastavalt põhilisele seadistusskeemile. Ühes meetodite rühmas kombineeritakse lahjendamata seerumit viiruse seerialahjendustega, teises testitakse seerumi lahjendusi viiruse konstantse annusega. Neutraliseerimisreaktsiooni käivitamiseks eelistatakse patogeeni, mis põhjustab tugevat tsütopaatilist toimet või paljuneb intensiivselt bioloogilises mudelis.

Rotaviirustel on aga kahjuks kerge tsütopaatiline toime, mida B. Weberi juhitud teadlased (1992) veenvalt tõestasid. Uuring, milles võeti 121 OKZ-ga laste väljaheiteproovi, kasutades klassikalist viiruse eraldamise meetodit MA-104 rakkudel CPP kontrolli all, näitas ainult 4 positiivset juhtumit (3,3%). kaasaegsed meetodid rotaviiruste tuvastamine (ELISA, PCR, EP PAAG-is) võimaldas selle näitaja tõsta 54,4%-ni. Seetõttu on PH tundlikkuse suurendamiseks vaja täiendavaid metoodilisi tehnikaid, mis aitavad visualiseerida viiruse vähenemist, mida kasutatakse radioaktiivse või immunofluorestsentsmärgisena, naastude moodustumisel, immunoperoksidaasi värvimisel jne. Viirust neutraliseerivate antikehade taseme määramine on identne klassikalise PH-meetodiga, erineb sellest ainult eraldusvõime poolest, st seerumi viirust neutraliseeriva aktiivsuse visualiseerimises. Sel juhul määrab seerumi aktiivsuse selle võime pärssida viiruse nakkavate omaduste ilminguid.

Praegu kasutatakse enamikus uuringutes kahte meetodit rotaviiruse vastaste viirust neutraliseerivate antikehade hulga mõõtmiseks. Üks neist põhineb üksikute viirusega nakatunud rakkude arvu loendamisel (Plaq meetod), mis seonduvad spetsiifiliselt fluorestsents-konjugeeritud antikehadega. Teises testis hinnatakse viiruse neutraliseerimise taset viiruse antigeeni tootmise vähenemise järgi ensüümi immuunanalüüsi abil. Mõlema meetodi võrdlev uuring näitas lineaarset seost ELISA indeksite ja naastude moodustavate ühikute arvu vahel rotaviiruse serotüübi iga prototüübi tüve puhul: Wa, DS-1, P, VA-70. Saadud andmete abil on lihtne määrata seerumi lahjendus, mis tagab 60% nakkusliku viiruse neutraliseerimise (neutraliseeriva antikeha tiiter). Selgus, et mõlema meetodiga materjalide testimisel on antikehade tiitrid samad ja tulemuste reprodutseeritavuse poolest ei erine mõlemad testid. Fluorestseiiniga märgistatud antikehi kasutava meetodi mõningane eelis seisneb autorite sõnul tulemuste suuremas objektiivsuses (automaatne registreerimine) ja väiksemas töömahukuses.

Viirust neutraliseerivate antikehade tiitrite mõõtmiseks kasutatakse ka modifitseeritud PH-d, blokeerides ELISA monoklonaalsete antikehadega.

• viirust neutraliseerivate antikehade (VNA) tootmise intensiivsuse uurimine loodusliku nakatumise ja vaktsineerimise ajal;
• VNA moodustumine rotaviiruste erinevateks struktuurvalkudeks;
• VNA vereseerumite ning sülje ja soole limaskesta sekretoorsete antikehade rolli hindamine kaitsmisel looduslike infektsioonide eest (Ward R. et al., 1990, 1992, 1993, 1995, 1997).

Kokkuvõtteks tuleb rõhutada, et neutraliseerimisreaktsiooni selle erinevates modifikatsioonides kasutatakse endiselt laialdaselt nii eksperimentaalsetes kui ka kliinilised uuringud ning oma kõrge tundlikkuse ja spetsiifilisusega on see võrdlusalus kõikidele teistele seroloogilistele meetoditele.

Sademete analüüs

Sadestamistestid põhinevad seerumi interaktsioonil viirusantigeenidega osmootsete protsesside abil või elektrivälja mõjul geelikeskkonnas või muud tüüpi kandjas. Üks neist meetoditest on vastuimmunoelektroforeesi (VIEF) reaktsioon. Autorid uurisid rotaviirusliku kõhulahtisusega tervete ja haigete täiskasvanute ja laste vereseerumeid, samuti spetsiifilisi immunoglobuliinipreparaate inimese rotaviiruse antikehade olemasolu tuvastamiseks VIEF-meetodil 7% agaroosis, millele oli lisatud 4% polüetüleenglükooli. Selgus, et RV-vastased antikehad ringlesid üsna laialdaselt ning neid leiti haigetel täiskasvanutel ja lastel vastavalt 90,2-87,7%, samuti 78,4% tervetest alla 1-aastastest lastest. Kõik 32 immunoglobuliini seeriat sisaldasid RV-vastaseid antikehi tiitrites 1:4-1:128. Autorite hinnangul sobib meetod populatsiooni immuunsuse uurimiseks.

radioimmunosadestamine

Teine sadestamise tehnika on radioimmunosadestamine. Autorid kasutasid seda meetodit, et uurida immuunvastust struktuursetele ja mittestruktuursetele valkudele primaarse rotaviirusnakkuse korral ja näitasid, et immuunvastus oli rohkem väljendunud VP4 kui VP7 suhtes.

Seerumi ja sekretoorse immunoloogilise vastuse uurimine tetravalentse reassortantvaktsiini kasutamisel vastsündinutel Selleks kasutati radioimmunoanalüüsi tehnikat koos ELISA ja PH-ga. Näidati, et immuunvastus seerumis sõltub süstitud antigeeni annusest; mis puudutab antikehade tuvastamist süljes, siis autorid selgitavad nende väljanägemist rinnapiima tarbimisega.

Radioimmunosadestamise reaktsiooni kasutatakse ka peenuuringutes. Seega kasutas J. Tosser seda meetodit VP6 valgu topoloogia uurimiseks genoomi struktuuris ja pakkus, et VP 6 osaleb sisemiste kapsiidikanalite moodustamises.

Ka teised teadlased kasutasid 1994. aastal radioimmunosadestamise meetodit rotaviirusnakkuse immunoloogiliste muutuste uurimiseks. Autorid näitasid, et ägedal perioodil registreeritakse peamiselt IgA VP2 ja VP6 suhtes, samas kui tervenemisperioodil vähenes sekretoorsete antikehade (IgA) tootmise intensiivsus mitte ainult VP2, vaid ka teiste struktuursete ja mittestruktuursete valkude suhtes. . Hiljem saadi sarnased andmed radioimmunosadestamise meetodil. Autorid näitasid, et lisaks VP4-le ja VP7-le osalevad immunoloogilises protsessis ka VP2, VP6 ja NSP2.

Seega on immunosadestamist kasutatud diagnostiliselt immuunvastuse uurimiseks loodusliku rotaviirusnakkuse korral.

AT viimased aastad Immunosadestamine on asendatud radioimmunosadestamisega, mida kasutatakse vaktsineerimis- ja infektsioonijärgse immuunsuse hindamiseks RV-nakkuse korral ning peeneteraliseks uurimis- ja arendustegevuseks.

hübridisatsiooni meetodid

Rotaviiruste antikehade määramiseks kasutatakse laialdaselt immunoblotmeetodit. Western-blot-meetodi kasutamise näide rotaviirusnakkuse diagnoosimisel on H. Ushijima (1989) töö, kes iseloomustas immunoblotanalüüsi abil RV struktuursete valkude vastaste antikehade spetsiifilisust 21 OKZ-ga lapsel, samuti IgA ja IgG klassi koproantikehade tase nende valkude suhtes.nakatamata lastel. Autorid püstitasid hüpoteesi, et immunoblotanalüüs võimaldab määrata haiguse diagnoosi ühe koproantikehade proovi põhjal ilma paarisvereseerumit uurimata. Pavlov I. jt (1991) demonstreerisid Western-bloti kasutamise võimalust VP1, VP2, VP4, VP6 ja VP7 vastaste antikehade taseme määramiseks. Autorid uurisid inimeste ja loomade vereseerumit rotaviiruse tüvede SA-11, DS-1, Wan Ito vastaste antikehade esinemise suhtes ja jõudsid järeldusele, et Western blot analüüsi saab edukalt kasutada immuunsuse hindamiseks kliinilises praktikas.

Arvatakse, et immunobloti saab kasutada rotaviirusnakkuse diagnoosi kinnitamiseks ilma paarisseerumit kasutamata ühe koproantikehade proovi jaoks.

Koos RTHA ja ELISA-ga kasutati karja immuunsuse uurimiseks immunoblotti. On leitud rühm indiviide, kes ei ole VP2, VP4, VP6 ja VP7 suhtes immuunsed, mis esindavad riskirühma, mis vajavad peamiselt aktiivse ja passiivse immuniseerimisega kaitset (Andrade J. P. et al., 1996).

Immunobloti kasutamist loodusliku RV-nakkuse protsessi seroloogiliste muutuste uurimisel märgivad ka Begue R. et al. (1998). Autorid kinnitasid, et VP2- ja VP6-vastased antikehad osalevad kõige sagedamini immuunvastuses infektsioonile ning VP7 ja VP4-vastased antikehad osalevad harvemini.

Immunofluorestsentsanalüüs

Rotaviirustega nakatatud rakkude testseerumite tiitrimiseks kasutatakse kaudset immunofluorestsentsmeetodit, milles kasutatakse fluorokroomiga märgistatud liigivastaseid seerumeid. Reaktsioon põhineb märgistatud antikehade ja homoloogse antigeeni spetsiifilisel interaktsioonil, samas kui antigeen-antikeha kompleks on kergesti tuvastatav fluorestsentsmikroskoobi abil.

Seda meetodit kasutades viisid autorid läbi seroloogilise uuringu kahes Lõuna-Ameerika indiaanlaste rühmas ja leidsid mõlemas rühmas suure seropositiivsete indiviidide protsendi: vastavalt 67,8 ja 77,4% ELISA ja 45,5 ja 56,7% IFM abil.

Teises uuringus, milles käsitleti nabaväädiveres IFM-i abil RV-rühma C vastaste antikehade taseme määramist, näidati, et 30% fertiilses eas naistest tuvastati need antikehad, mis viitab varasemale infektsioonile.

Seotud immunosorbentanalüüs Seda kasutatakse praegu koos PH-ga rotaviirusnakkuse seroloogilises diagnoosimises äärmiselt laialdaselt. See meetod, mis põhineb ensüümiga märgistatud antikehade või antigeenide kasutamisel, on selle rakendamise lihtsuse ja ökonoomsuse tõttu kõige sobivam ja paljulubavam rotaviirusnakkuse seroloogiliseks diagnoosimiseks. Meetod võimaldab läbi viia massilisi elanikkonna seroepideemilisi uuringuid, hinnata vaktsiinide immunoloogilist ja epidemioloogilist efektiivsust, uurida erinevate klasside antikehade kaitsvat rolli inimkeha erinevates bioloogilistes vedelikes ning samuti läbi viia rotaviiruse seroloogilist diagnoosi. infektsioon.

R. Azeredo (1989) viis ELISA abil läbi arvukalt uuringuid, mis näitasid, et kindlaksmääratud rotaviiruse etioloogiaga OKZ-ga patsientide arv oli seroloogilise uuringu tulemuste kohaselt oluliselt madalam nende nakatumise tasemest. Need andmed näitasid, et paljusid rotaviirusnakkuse kliinilisi juhtumeid ei diagnoosita RV väljaheites tuvastamisega. Täiendavad uuringud rotaviirusnakkuse levimuse kohta kinnitasid seda oletust. Seroepidemioloogiliste uuringute läbiviimisel selgus, et 50-70% elanikkonnast oli kõrge antikehade tase, mis viitab RV laialdasele levikule inimpopulatsioonis.

Veelgi suuremad võimalused avab ELISA erinevatesse immunoglobuliinide klassidesse kuuluvate antikehade taseme dünaamika määramisel. Niisiis väidavad 1989. aasta metoodika autorid, et vaktsineerimisprotsessi ajal täheldati RV-vastaste antikehade märkimisväärset suurenemist veres 83–96%. IgA- ja IgG-klassi rotaviirusevastased antikehad tuvastati võrdselt hästi ELISA ja PH-ga plasma vähenemise kaudu - vastavalt 67,6 ja 70,0%. IgM klassi antikehade serokonversioon tuvastati ELISA ja RSC abil vastavalt 53 ja 44% lastest. Erinevate klasside antikehade tootmise intensiivsuse analüüsi tulemuste põhjal järeldasid autorid, et kõige tõhusam, lihtsam ja kiireim meetod serokonversioonide tuvastamiseks pärast vaktsineerimist on IgA antikehade tuvastamise meetod ELISA abil.

Seda järeldust kinnitas ka R. Bishopi töö (1996), mis näitas, et 68 ema-lapse paari, kellel oli diagnoositud RV-nakkus, uuringu tulemuste põhjal näidati, et IgA antikehade tuvastamine ELISA abil väljaheite materjalid on kõige tundlikum marker.nii kliiniliselt väljendunud kui ka asümptomaatiline infektsioon. Sarnased tulemused raske RV kõhulahtisusega laste uurimisel sai J. Kolomina 1998. aastal.

Serokonversioonide intensiivsuse uurimiseks on aga vaja uurida paarisseerumit, mis pikendab oluliselt diagnostikaprotsessi. Samal ajal on hästi teada, et IgM klassi antikehade ilmumine annab tunnistust nakkusprotsessi algusest. Meie andmetel, mis saadi rotaviirusnakkusega patsientide ELISA ja RSK uuringul, selgus, et ELISA tulemuste kohaselt leidus kõigi uuritud isikute veres RV vastaseid IgM antikehi, RSK andmetel aga ainult 77% (R

Viimastel aastatel on ELISA-st saanud geeni- ja serotüübispetsiifiliste antikehade määramise võimaluse realiseerimisega tõeliselt universaalne meetod rotaviirusnakkuse uurimiseks, mida kasutatakse:

• uurides klasside IgA, M, G antikehade tootmist üksikute struktuursete ja mittestruktuursete RV valkude suhtes;
• immunoloogilise efektiivsuse hindamisel mitmesugused vaktsiinid: nõrgestatud, külmaga kohandatud, DNA, reassortant;
• kui uuritakse antikehade tootmist keha erinevates bioloogilistes vedelikes loodusliku infektsiooni tingimustes ja immuniseerimise ajal.

Seega, nagu esitatud andmetest järeldub, uuritakse rotaviirusnakkuse immunoloogilisi aspekte laias valikus laboratoorsed meetodid. Seetõttu on optimaalse uurimismeetodi valik, võttes arvesse selle resolutsiooni, majanduslikku ja ajakulu, üsna keerukas ning sõltub nii teadlaste ees seisvatest ülesannetest kui ka labori varustusest. Ja veel, meie arvates tuleks erinevate meetodite hulgast välja tuua kaks - neutraliseerimisreaktsioon rakukultuuris ja ensüümi immuunanalüüs -, mis pakuvad erinevate immunoglobuliinide klasside antikehade uurimist. Rotaviirusnakkuse ekspressdiagnostika võimalus määrab nende meetodite erilise lubaduse laialdaseks kasutamiseks.

Seroloogia(ladina keelest seerum - "seer", logos - "teadus") on immunoloogia haru, mis uurib seerumi antikehade ja antigeenide interaktsiooni spetsiifikat.

Diagnoosi aluseks on spetsiifiliste antikehade tuvastamine, mis moodustuvad reaktsioonina keha nakatumisele teatud antigeeniga. Sõltuvalt sellest, milliseid antikehi verest leitakse, tehakse järeldus nakkuse olemuse kohta ja nende antikehade hulk näitab aktiivsuse astet. nakkushaigus.

Uuritakse seroloogilise vereanalüüsi raames uurimistööks võetud materjali jt ohtlikud haigused- herpes, sooleinfektsioonid, punetised, toksoplasmoos, klamüüdia, leetrid, klamüüdia. Lisaks võimaldab see uuring kinnitada veregruppi, määrata valkude spetsiifilisust.

Seega viiakse läbi seroloogilised uuringud:

• kui on tehtud esialgne diagnoos ja nüüd on vaja selle kinnitust. Uuring põhineb vastava antigeeni lisamisel vereseerumis. Vastus võimaldab teil teha järelduse haiguse olemasolu või puudumise kohta;
• kui diagnoosi panna ei saa. Uuringu osana lisatakse verre antikehi ja määratakse antigeenide tüüp, mis võimaldab määrata konkreetse haiguse;
• kui seda vaja on.

Seega aitab diagnoosi panna või välja kirjutada kõige rohkem seroloogiline vereanalüüs tõhus ravi- minimaalsete aja- ja finantskuludega.

Seroloogiliste uuringute eelised hõlmavad järgmist:

• võime tuvastada patoloogilisi mikroorganisme varajased staadiumid infektsioonid;
• haiguse arengu kontroll ja teraapia efektiivsuse tase;
• enne biomaterjali võtmist pole vaja spetsiaalset ettevalmistust;
• tõhusust. Tulemus on saadaval kahe kuni kolme tunni pärast, mis on statsionaarses ravis väga oluline;
• reaktiivi taskukohasus, mis võimaldab proove võtta nii sageli kui vaja;
• pole vastunäidustusi.

Kuidas seroloogilist testi tehakse?

Vereproovid võetakse kubitaalveenist. Oluline punkt- verd ei võeta mitte süstlaga, vaid raskusjõu abil - veeni pistetakse nõel ilma süstlata ja katseklaasi kogutakse kuni viis ml verd. Protseduur viiakse läbi hommikul.

Sõltuvalt uuringu aluseks olevatest reaktsioonidest on mitut tüüpi protseduure:

1. neutraliseerimisreaktsioon. See põhineb immuunseerumi antikehade omadusel reageerida neutraliseeriva ainena mikroorganismidele või toksiinidele, vältides nende negatiivset mõju organismile;
2. aglutinatsiooni reaktsioon. Võib olla otsene või kaudne. Esimesel juhul räägime vereseerumi uurimisest antikehade olemasolu tuvastamiseks (surmatud mikroobid visatakse materjali sisse ja reaktsiooni hinnatakse - kui helveste kujul on sade, on reaktsioon positiivne) , põhineb kaudne reaktsioon erütrotsüütide ja neile adsorbeerunud antigeenidega materjali sisseviimisel ( kihiline sete näitab positiivset reaktsiooni);
3. sademete reaktsioon. Antigeenilahus kantakse kihiti immuunseerumile (toimib vedela keskkonnana). Kasutatakse lahustuvat antigeeni. Kui antigeen-antikeha kompleks sadestub, loetakse reaktsioon positiivseks;
4. komplemendi reaktsioon. Reguleerimisala — nakkushaiguste avastamine. Komplement aktiveeritakse ja reaktsioone uuritakse;
5. reaktsioon märgistatud antigeenide ja antikehadega. See põhineb asjaolul, et erilisel viisil töödeldud koe antigeenid või mikroobid hakkavad UV-kiirte mõjul valgust kiirgama. Meetodit kasutatakse laialdaselt mitte ainult antigeenide diagnoosimisel, vaid ka hormoonide, ensüümide ja ravimite määramisel.

Analüüsiks on vaja valmistuda: nelja päeva jooksul peab patsient keelduma südameravimite võtmisest, samuti tuleb välistada alkohol kõigis selle ilmingutes, vürtsikas ja rasvane toit, maiustused, piirata füüsilist pingutust ja vältida stressi.

Kui te neid reegleid ei järgi, on oht valeks positiivne tulemus. Enne teise analüüsi määramist peab arst välja selgitama, mida patsient tegi eelmisel päeval enne protseduuri, ja andma soovitusi, kuidas uuringuks õigesti valmistuda.

Seroloogiline analüüs: ärakiri

Seroloogiline vereanalüüs - analüüs, mis võimaldab määrata / kinnitada nakkusetekitaja tüüpi, aitab spetsialistil diagnoosi panna. See on asendamatu abi, kui arst ei leia ravimteraapia, kuna erinevate haiguste tekitajad erinevad erineva tundlikkuse poolest konkreetsete ravimite ja antibiootikumide toime suhtes.

Pärast materjali kogumise protseduuri lõpetamist jätkavad laborandid järgmisse etappi - nad dešifreerivad näitajad. Seega, kui patsiendi veres antikehi ei leitud, võib järeldada, et kehas pole infektsioone - analüüsi tulemus on sel juhul positiivne.

Kuid selline olukord on pigem erand reeglist: haiguse sümptomite ilmnemisel näitavad ja tõestavad seroloogilised uuringud tõsise patoloogia olemasolu kehas.

Esmalt leitakse analüüsi abil organismist haigustekitajad, seejärel hinnatakse antikehade hulka, mille põhjal tehakse järeldus, kui tõsiselt nakkus areneb.

Hepatiidi, HIV-i, süüfilise seroloogiline testimine: omadused

süüfilis . Süüfilise testimisel otsivad spetsialistid valke, mis vastutavad sisenemise eest Inimkeha nakkuse põhjustaja - me räägime kahvatust treponemast. Sel juhul toimib vereseerum bioloogilise materjalina.

. Viiruslik hepatiit- tõsised nakkushaigused, mille oht seisneb selles, et nad võivad elada kehas üsna pikka aega ilma end avaldamata. Haigust on võimalik tuvastada varases faasis, kui see on paremini ravitav, analüüsides markereid – markerid ilmuvad verre pärast haigestumist või vaktsiini sissetoomist.

Vaja aru saada et patogeeni tuvastamine on võimalik alles 1,5-2 kuud pärast nakatumist. Kui analüüsi teeb rase naine, on võimalik valepositiivne tulemus.

Soovitame vaadata meditsiinilist saiti https://tabletix.ru/. Saidilt leiate kasulikku teavet, meditsiinilisi arvamusi.
Kui märkate ühte või mitut allpool loetletud sümptomit, peaksite kaaluma seroloogilise testi tegemist:

• oksendada;
• halb isu või selle puudumine;
• keha põhjuseta impotentsus, ületöötamine;
• kollakas jume;
• väljaheidete ja uriini värvimuutus.

HIV. Kui see näitas positiivset tulemust, ei tähenda see, et patsient on AIDS-iga nakatunud. Kui infektsioon tekkis hiljuti (mitte rohkem kui kaks kuud tagasi), ei võimalda antikehade olemasolu kindlaks teha haiguse arengut. Plaanis on kordusuuring.

Seroloogiline vereanalüüs- kõige olulisem uurimismeetod, mille põhieesmärk on viiruste, infektsioonide, mikroobide kiire avastamine organismis.

See ainulaadne labori "tööriist" võimaldab teil tuvastada mis tahes haigusi, mis on immuunsupressiooni tagajärg, nii et ärge olge laisk, vaid tehke regulaarselt analüüsi, et haigus õigeaegselt tuvastada ja sellest kiiresti vabaneda.

8 057

Kaudsed meetodid süüfilise diagnoosimiseks.

Süüfilise diagnoosimiseks kasutatakse palju uurimismeetodeid, mis erinevad tehnika ja eesmärgi poolest. Otsesed meetodid on suunatud patogeeni tuvastamisele uuritavas materjalis, kasutades mikroskoopiat (tumevälja mikroskoopia jne) või PCR-i.

Lisaks kahvatu treponema (T. pallidum) otsese tuvastamise meetoditele on süüfilise uurimisel ka kaudne ( seroloogiline) uurimismeetodid, mis tuvastavad süüfilise tekitaja vastased antikehad vereseerumis ja tserebrospinaalvedelikus. Süüfilise diagnoosimise kaudsed meetodid hõlmavad ELISA, RPHA, CSR, RIF ja RIF-abs, RIBT, PCR, ekspressmeetodi, immunobloti ja teiste seroloogilisi teste.

Seroloogilised meetodid nakkushaiguste diagnoosimiseks.

Seroloogilised diagnostilised kriteeriumid põhineb spetsiifilistel antigeen-antikeha reaktsioonidel. Määramist vajavate mikroorganismide antigeenid (rakuseina komponendid, flagellad, kapslid, DNA ja toksiinid) reageerivad seerumis sisalduvate antikehadega. Antigeenide ja neile vastavate antikehade vahel toimub seos, mis on seroloogiliste diagnostikameetodite aluseks. Seroloogilisi teste kasutatakse tundmatu antigeeni (mille allikas on bakter, viirus, toksiin jne) tuvastamiseks tuntud antikeha abil või antikeha tuvastamiseks seerumis, kasutades teadaolevat antigeeni.

Seroloogilised reaktsioonid klassifitseeritakse sõltuvalt antigeeni seisundist ja keskkonna omadustest, milles antigeen ja antikeha interakteeruvad, samuti vastavalt läbiviimise meetodile.

Seroloogiliste reaktsioonide läbiviimiseks kasutatakse paljusid laboratoorseid meetodeid, nagu aglutinatsioon, sadestamine, komplemendi sidumine, immunofluorestsents, ensüümi immunoanalüüs ja radioimmunoanalüüs ja teised. Need reaktsioonid võimaldavad mikroorganismide tõhusat esialgset tuvastamist.

Seroloogiliste reaktsioonide tekitamiseks vajalikud seerumid saadakse eksperimentaalselt, eelkõige toodetakse neid vaktsiini- ja seerumiinstituutides ning neid pakutakse kaubanduslike diagnostikakomplektide osana.

Seroloogilised meetodid on inimeste ja loomade nakkushaiguste diagnoosimise ja ravi oluliseks vahendiks, kuna nende abil saab tuvastada mitte ainult haiguse tekitajat, vaid ka tuvastada vastavate patogeenide vastaseid spetsiifilisi antikehi patsientide ja paranenud patsientide veres. Seroloogilised meetodid on praegu kõige tõhusad meetodid diagnostika, kui patogeeni isoleerimine on võimatu või raske ning annab suhteliselt harva valepositiivseid ja valenegatiivseid tulemusi.

Seroloogiliste meetodite kasutamine süüfilise diagnoosimiseks

Süüfilise diagnoosimise seroloogiliste laboratoorsete meetodite aluseks on organismi võime anda immuunvastus patogeeni ilmnemisele. Vere (või tserebrospinaalvedeliku) seerumis (plasmas) esinevate seroloogiliste reaktsioonide abil tuvastatakse infektsiooni immuunvastuse jäljed, nimelt antikehad kahvatu treponema antigeenide või antigeenide endi vastu.

Selleks, et teha kindlaks olemasoleva eripära kliinilised ilmingud(st et need on süüfilise tagajärg) ja tulevikus tehti ettepanek patoloogilise protsessi dünaamika kontrollimiseks. suur hulk seroloogilised uurimismeetodid. Neid samu meetodeid kasutatakse laialdaselt ka elanikkonna sõeluuringul.

Vastavalt kehtivatele riiklikele juhistele ja kliinilistele juhised, paljudes maailma riikides kasutatakse kõrgetasemelisi seroloogilisi meetodeid elanikkonna uuringutes süüfilisega patsientide tuvastamiseks ja kliinilise diagnoosi seadmiseks. Neid kasutatakse nii haiguse kliiniliste tunnuste esinemisel patsientidel kui ka varjatud perioodidel.

Seroloogiliste reaktsioonide määramine on üks kõige usaldusväärsemaid meetodeid süüfilise diagnoosimiseks. Reguleeritud seadistusmeetodiga standardiseeritud seroloogilisi teste nimetatakse süüfilise seroloogilisteks testideks. Arvestades, et peaaegu kõik seroloogilised reaktsioonid süüfilisele võivad teatud tingimustel olla valepositiivsed või valenegatiivsed, tuleks need panna kompleksi ja vajadusel dünaamikasse.

Seroloogilised testid, mida kasutatakse antikehade määramiseks patsiendi vereseerumis, erinevad üksteisest tundlikkuse, spetsiifilisuse, seadmise keerukuse ja maksumuse poolest. Tõhusaks süüfilise serodiagnoosimiseks kasutatakse lisaks klassikalistele meetoditele immunoloogilisi teste ja tehnoloogiaid, mis on 21. sajandil saanud uue tõuke arengule.

Antikehi tuvastatakse erinevate immunokeemiliste (seroloogiliste) meetoditega, sealhulgas settereaktsioonide, ensüümi immunoanalüüsi, immunokemiluminestsentsi, immunokromatograafiliste testide, lineaarse immunoblotanalüüsi, voolufluoromeetria, immunokiibitehnoloogia ja teiste abil.

Serodiagnoosi (seroloogilisi meetodeid kasutav uuring) kasutatakse:

• süüfilise kliinilise diagnoosi kinnitamine,
• varjatud süüfilise diagnoosimine,
• ravi efektiivsuse jälgimine kui süüfilisega patsientide ravimise üks kriteerium,
• süüfilise ennetamine (teatud elanikkonna rühmade sõeluuring patoloogia tuvastamiseks).

Olulisemad omadused, mida seroloogilised testid nõuavad – tundlikkus, spetsiifilisus, reprodutseeritavus

Otsustav kriteerium meetodi valikul laboratoorne diagnostika on selle tõhusus – tundlikkus, spetsiifilisus ja reprodutseeritavus.

Tundlikkus on positiivsete tulemuste osakaal patsientidel. Meetodi tundlikkus määratakse nende proovide positiivsete tulemuste protsendi järgi, mis teadaolevalt sisaldavad patogeeni spetsiifilisi markereid (nt patogeeni antigeene või nende vastaseid antikehi).

Spetsiifilisus- negatiivsete testitulemuste osakaal aastal terved patsiendid. Meetodi spetsiifilisuse määrab nende proovide negatiivsete tulemuste protsent, mis ilmselgelt ei sisalda patogeeni spetsiifilisi markereid. Seega, mida suurem on tundlikkus ja spetsiifilisus, seda usaldusväärsem ja usaldusväärsem on uurimismeetod.

Oluliseks diagnostilised kriteeriumid kehtib ka reprodutseeritavus samade proovide korduvate uuringute tulemused. Tuleb märkida, et vaatamata olulistele kõrgtehnoloogia edusammudele ei ole kõigis uuritud biotestides 100% (absoluutset) tundlikkust ja spetsiifilisust tagavaid meetodeid.

Praegu on Venemaal ametlikult registreeritud testisüsteemid, komplektid ja koostisained, mille tundlikkus ja spetsiifilisus reaktsiooni seadistamisel on alla 95%. Seega on alati võimalus ebaadekvaatse tulemuse saamiseks.

Testide klassifikatsioon kasutatava antigeeni tüübi järgi. Treponemaalsed ja mittetreponemaalsed süüfilise testid

Kaasaegses venereoloogias kasutatakse diagnostilistel eesmärkidel enam kui tosinat süüfilise seroloogiliste reaktsioonide varianti, mida saab erinevate kriteeriumide järgi jagada erinevatesse kategooriatesse. Klassifitseerimine toimub vastavalt uurimismetoodikale, ulatusele, kiirusele, madalale maksumusele, nõuetele laboriseadmetele jne.

Treponemaalsed reaktsioonid on teoreetiliselt spetsiifilisemad, kuid annavad ka valepositiivseid tulemusi. Veelgi enam, need ei võimalda eristada ravimata ja väljaravitud süüfilist. Treponemaalsete reaktsioonide tulemused on mõlemal juhul positiivsed. Mitte-treponemaalsed reaktsioonid eristavad ravimata või hiljutisi ja ravitud infektsioone.

Uuringu käigus on soovitatav läbi viia nii treponemaalsed kui ka mittetreponemaalsed reaktsioonid. Süüfilise diagnoosi kindlakstegemiseks ja kinnitamiseks on vaja mõlemat tüüpi - treponemaalse ja mittetreponemaalse - testi positiivseid tulemusi. Seetõttu kasutatakse mittetreponemaalseid teste koos treponemaalsete testidega ning neid tehakse teatud ajavahemike järel enne ravi, ravi ajal ja pärast ravi lõppu.

1. Mittetreponemaalsed testid

Kõige kuulsamad mittetreponemaalsed testid, mille tulemuste visuaalne tõlgendamine on

• RW – Wassermanni reaktsioon lipiidantigeenidega (komplemendi fikseerimise reaktsioon kardiolipiini antigeeniga, RSKk)
• Kanni reaktsioon (praegu ei kasutata),
• Zaks-Vitebsky tsütokoolne reaktsioon (praegu ei kasutata),
• sademete mikroreaktsioon plasma või inaktiveeritud seerumiga (MRP või RMP),
• RPR (Rapid Plasma Reagin Test),
• TRUST (toluidiinipunase kuumutamata seerumi test).

Mitte-treponemaalsete testide hulgas on 2 testi reaktsioonitulemuste mikroskoopilise lugemisega:

1. VDRL - (suguhaiguste uurimislabor);

2. USR - test aktiivsete plasmareaginide (Unheated Serum Reagins) määramiseks.

Reaktiivsus mittetreponemaalsetes testides viitab tavaliselt koekahjustusele ega ole alati spetsiifiline süüfilise suhtes. Rakendamise lihtsus ja madalad kulud võimaldavad neid kasutada süüfilise esialgse diagnoosi seadmisel skriinimisreaktsioonidena.

2. Treponemaalsed testid

Treponemaalsed testid kasutavad spetsiifilisi treponemaalseid antigeene. Need testid on vajalikud diagnoosi kinnitamiseks (RPHA, RIT, RIF ja ELISA). Need on keerulisemad ja kallimad kui 1. rühma testid, kuid ka spetsiifilisemad ja tundlikumad. Antikehade tuvastamine tserebrospinaalvedelikus toimub ka treponemaalsete testide abil.

Traditsioonilised süüfilise diagnoosi kinnitavad treponemaalsed testid nõuavad kallist laborivarustust ja kogenud personali, mistõttu tehakse neid harva väljaspool spetsialiseeritud laboreid. Kuid neid saab nüüd asendada lihtsate ja kiirete treponemaalsete testidega, mida saab teha välitingimustes ja kasutada täisverd. Nende reaktsioonide läbiviimine ei nõua pikaajalist väljaõpet, eritingimusi reaktiivide ja seadmete säilitamiseks.

Treponemaalsete ekspressreaktsioonide võrdlev odavus, mugavus ja praktilisus juhivad neile tähelepanu mitte ainult kui diagnoosi kinnitamise meetoditele. Neid reaktsioone saab kasutada süüfilise skriinimiseks esmatasandi arstiabi osana. arstiabi(neid saab teha välitingimustes, samas tervishoiuasutuses) või piirkondades, kus laboreid ei ole. Kuna aga T. pallidum'i antikehad määratakse mitme aasta jooksul, olenemata sellest, kas patsienti raviti või mitte, ei saa ravi efektiivsuse hindamiseks kasutada treponemaalseid kiirreaktsioone ja diferentsiaaldiagnostika ravimata ja välja ravitud süüfilis.

Süüfilise diagnoosimise seroloogiliste meetodite klassifikatsioon vastavalt tuvastatud antikehade tüübile

Kaasaegses dermatovenereoloogias kasutatakse diagnoosimiseks erinevaid seroloogilisi reaktsioone süüfilisele. Mõningaid meetodeid, mis olid aktuaalsed kümme aastat tagasi, ei kasutata enam keerukuse või spetsiifilisuse puudumise tõttu. Sõltuvalt tuvastatud antikehadest jagatakse süüfilise seroloogilise diagnoosimise meetodid kolme rühma:

I. Lipiidide (reagin) reaktsioonid - määratakse lipiidantigeenide (reaginide) antikehad:

1) flokulatsioon: mikroreaktsioon klaasil lipiidantigeenidega - ekspressdiagnostika meetod (sadestamise mikroreaktsioonid - MRP), VDRL, CMF (kardiolipiini mikroflokulatsiooni test), RPR jne;

2) komplemendi sidumisreaktsioon (RSK) lipiidsete antigeenidega: Wassermani reaktsioon (RV), kvalitatiivne ja kvantitatiivne fikseerimismeetod, termostaatiline ja külmas (Colmeri reaktsioon);

3) settereaktsioonid, mida praegu ei kasutata: Cahni sadestamisreaktsioon, tsütokoolne Sachs-Vitebsky reaktsioon jne;

II. Grupi treponemaalsed reaktsioonid - määratakse antikehad rühma treponemaalsetele antigeenidele (mis on osa nii patogeensete kui ka saprofüütsete treponeemide mikroobirakkudest):

1) CSC Reiteri valgu antigeeniga;

2) immunofluorestsentsreaktsioon (RIF);

3) immuunadhesioonireaktsioon (RIP).

III. Liigispetsiifilised valgutreponemaalsed reaktsioonid - määratakse Treponema pallidum'i spetsiifiliste liikide antigeenide antikehad:

1) kahvatu treponeemide immobiliseerimise reaktsioon (RIT);

2) RIF-abs immunofluorestsentsreaktsioon ja selle variandid (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS jne);

3) kahvatu treponeemide (TPHA) kaudse hemaglutinatsiooni reaktsioon ja selle modifikatsioon TPPA.

4) ensüümi immuunanalüüs (ELISA);

5) immunoblotanalüüs.

Süüfilise seroloogiliste testide praktiline kasutamine

Erinevatel praktilistel eesmärkidel kasutatakse erinevaid seroloogilisi teste.

Välismaal kasutatakse massilistel elanikkonna küsitlustel ja vajadusel süüfilise erakorralisel avastamisel mittetreponemaalseid skriiningreaktsioone (VDRL, RPR jne). Diagnoos nõuab kinnitust treponemaalsete testidega FTA-ABS, TPHA või TPPA. Praegu on sõeltestides soovitatav kasutada ELISA-d VDRL-i asendajana. See on tingitud asjaolust, et ELISA testi eristab tundlikkus, spetsiifilisus, võime automatiseerida uuringuid, aga ka diagnostiliste testikomplektide väljatöötamine. Lisaks on põhjendatud süüfilise uurimise järjekorra vastupidine skeem, kui esmalt kasutatakse treponemaalseid teste.

Ravi efektiivsuse jälgimiseks ja infektsiooni aktiivsuse hindamiseks on soovitatav määrata kvantitatiivne VDRL. ELISA testi antitreponemaalsete IgM antikehade määramiseks kasutatakse kinnitava/täiendava testina.

Kodumaises praktikas kasutatakse seroloogiliste reaktsioonide kompleksi (CSR), sealhulgas mikrosadestamisreaktsiooni (RMP) kardiolipiini antigeeniga ja CSC-d kardiolipiini ja treponemaalsete antigeenidega. Hiljuti soovitatakse CSR-is asendada RSK ELISA või RPHA-ga. Kasutatakse ka RIF-i (ja selle modifikatsioone - RIF-Abs jt), RIBT-i.

RIBT-i kasutatakse uuringureaktsioonina treponemaalsete reaktsioonide lahknemise korral.

Süüfilise laboratoorse seroloogilise diagnoosimise lähenemisviisid Vene Föderatsioonis

Kliiniliste laboratoorsete uuringute ühtsete meetodite juurutamine praktikasse NSV Liidus ja Venemaa Föderatsioon lubatud progressiivsemaks diagnostilised meetodid, et tõhustada kliiniliste diagnostiliste laborite tööd, suurendada tööviljakust, vähendada laboratoorsete uuringute dubleerimist ja sai aluseks valmisreaktiivikomplektide ratsionaalsete vormide väljatöötamisele.

1985. aastal arvati NSV Liidus süüfilise diagnoosimise parandamiseks diagnostilisest kompleksist välja mittetreponemaalne CSC reaktsioon mittespetsiifilise (Wassermann) antigeeniga ja settereaktsioonid (tsütokoolne ja kaana) kui vähem tundlikud ega andnud täiendavat. teavet.

Selle asemel kasutati süüfilise (CSR) seroloogiliste testide kompleksi osana komplemendi sidumise reaktsiooni treponemaalse ja kardiolipiini antigeenidega (RSKt) ning mikrosadestamise reaktsiooni kardiolipiini antigeeniga (RMP). Selle reaktsioonide kompleksi suurem tundlikkus ja teabesisaldus tagas mitte ainult reagiinide, vaid ka antitreponemaalsete antikehade tuvastamise.

1985. aastal

1. RMP kardiolipiini antigeeniga vereplasma ja inaktiveeritud vereseerumiga. Valikutest isoleeritud rakenduse korral.

2. CSC treponemaalsete ja kardiolipiidsete antigeenidega; kvalitatiivsed ja kvantitatiivsed seadistusmeetodid, termostaadiga ja külmas;

3. Treponema pallidum immobilisatsioonireaktsioon (RIT); katseklaasi ja melange seadistusmeetodid;

4. Immunofluorestsentsreaktsioon (RIF) järgmistes modifikatsioonides: RIF absorptsiooniga (RIF-abs) vereseerumi ja kapillaarverega, RIF-200, RIF kogu tserebrospinaalvedelikuga (RIF-c); kvalitatiivsed ja kvantitatiivsed seadistusmeetodid. Süüfilise latentse ja hilise vormi diagnoosimine, otsustajate äratundmine (valepositiivsed tulemused)

5. Klassikaliste seroloogiliste reaktsioonide kompleks (CSR): RSC (Wassermani reaktsioon) kardiolipiini ja treponemaalsete antigeenidega + RMP. Elanikkonna ennetav uurimine süüfilise suhtes, süüfilise kõikide vormide diagnoosimine, ravi efektiivsuse jälgimine, süüfilisega kontaktis olevate isikute läbivaatus.

2001. aastal kiitis Vene Föderatsiooni tervishoiuministeerium heaks uue normatiivdokumendi, mis reguleerib diagnostiliste testide läbiviimise korda - Vene Föderatsiooni Tervishoiuministeeriumi 26. märtsi 2001. aasta korraldus nr 87 "Süüfilise seroloogilise diagnoosi parandamise kohta ".

Süüfilise laboratoorse diagnoosimise parandamiseks, töökvaliteedi parandamiseks ja ennetamiseks edasine levitamine süüfilise esinemissagedust, on soovitatav asendada RSK seroreaktsioonide kompleksis (CSR) süüfilise diagnoosimisel ELISA ja RPHA-ga sõel- ja kinnitavate testidena, t.to. need testimissüsteemid on väga tundlikud, spetsiifilised ja reprodutseeritavad.

26. märtsi 2001. aasta korraldus nr 87 "Süüfilise seroloogilise diagnoosi parandamise kohta" näeb ette järgmiste meetodite kasutamise süüfilise sero- ja tserebrospinaalvedeliku diagnoosimiseks Venemaal:

1. RMP ja välismaised analoogid (VDRL, RPR ja sarnased mikroreaktsioonid) sõeltestidena elanikkonna süüfilise uurimisel. RMP viiakse läbi plasma või inaktiveeritud vereseerumiga.
2. Ensüüm-immunoanalüüs (ELISA). Antigeen kultiveeritud või patogeensest treponema pallidum'ist. Diagnostilised reaktsioonid, sealhulgas likööri diagnostika jaoks. Seadistamise lihtsuse ja kaubanduslike testisüsteemide kättesaadavuse tõttu saab neid kasutada sõeltestidena.
3. Passiivse hemaglutinatsiooni (RPHA) reaktsioon. Antigeen kultiveeritud või patogeensest treponema pallidum'ist. Valiku- ja diagnostilised reaktsioonid.
4. RIF-i kvalitatiivsed ja kvantitatiivsed variandid (RIF-abs, RIF-c, RIF kapillaarverega sõrmest). Antigeen - Nicholsi tüve patogeenne kahvatu treponema.
5. Süüfilise seroloogiliste reaktsioonide (CSR) kompleks, mis koosneb komplemendi sidumise reaktsioonist (CFR) treponemaalsete ja kardiolipiini antigeenidega ning RMP-st. Komplemendi sidumise reaktsiooni on võimalik asendada ELISA või RPHA-ga ka kombinatsioonis RMP-ga. CSR viitab diagnostilistele testidele.
6. Kahvatu treponema immobilisatsioonireaktsioon (RIBT), mille puhul kasutatakse antigeenina Nicholsi tüve patogeenset kahvatut treponema. RIBT-d on diagnostilised kinnitavad testid.

Seega soovitatakse tervishoiuasutustes patsientide süüfilise uurimise järjekord kavandada järgmiselt:

1. Esmase läbivaatuse käigus viiakse läbi mikrosadestamise (RMP) või selle modifikatsiooni (RPR, TRUST, VDRL) selektsiooni (sõeluuringu) reaktsioon kvantitatiivses ja kvalitatiivses versioonis ning positiivse tulemuse korral mistahes spetsiifiline kinnitav treponemaalne test ( RPHA, ELISA, CSR, RIF, RIT);

2. Pärast ravi lõppu paigaldatakse RMP või selle modifikatsioon ning tiitri languse järgi hinnatakse nakkusprotsessi dünaamikat ja ravi efektiivsust. Teraapia efektiivsuse kinnituseks on tiitri langus 4 või enama korda 1 aasta jooksul.

Vastuvõtt kokkuleppel! Laupäev pühapäev.

Mis on seroloogilised testid, miks neid tehakse, millised on seroloogilise diagnostika peamised meetodid?

Seroloogilised uuringud on meetodid antigeenide või antikehade uurimiseks patsientide bioloogilises materjalis, mis põhinevad teatud immuunreaktsioonidel. Nakkuse tekitaja antikehade või antigeenide tuvastamine bioloogilises materjalis võimaldab kindlaks teha haiguse põhjuse.

ei oma 100% spetsiifilisust ja tundlikkust nakkushaiguste diagnoosimisel. Seetõttu tuleks nende tulemusi hinnata, võttes arvesse kliiniline pilt haigused. See nõuab infektsiooni diagnoosimiseks mitmete testide kasutamist, samuti meetodite kasutamist western blot sõelumismeetodite tulemuste kinnitamine.

„Immunoblotanalüüs (Western blot, Western-blot) on tegelikult lõpliku kontrollimise (kinnitav) meetod immunoloogiliste uuringute ahelas, mis võimaldab teha lõpliku laboratoorse järelduse. See test on eriti oluline nakkushaiguse (näiteks läkaköha, borrelioos jne) kinnitamiseks või ümberlükkamiseks. Western blot on tavaliselt vajalik pärast tuvastamist positiivsed antikehad klassi IgG nakkusprotsess, tk. just selles kombinatsioonis tekib tulemuste korrektsem laboratoorselt tõlgendamine ja edasine patsiendi ravitaktika. Western blot analüüsiks kasutatakse spetsiaalseid nitrotselluloosi ribasid, millele kantakse molekulmassi suurendamise järjekorras valgud horisontaalse ja seejärel vertikaalse immunoforeesi teel. Patsiendi seerumi antikehad interakteeruvad valkudega teatud riba piirkondades ja seejärel on reaktsiooni kulg sarnane ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsile (ELISA)”.- selgitab Meditsiiniteaduste kandidaat, Ukraina SYNEVO labori meditsiinidirektor Oksana Vladislavovna Nebyltsova.

Seroloogilisteks testideks kasutatav bioloogiline materjal

• Seerum
• Sülg
• Fekaalne aine

Milliseid haigusseisundeid kasutatakse diagnoosimiseks seroloogilisi teste?

Seroloogiliste uuringute eesmärk on kindlaks teha ravi efektiivsus pärast patsiendi paranemist, samuti tuvastada haiguse retsidiiv. Lisaks võivad seroloogilised meetodid tuvastada selliseid haigusi nagu:

• Amööbias
• Giardiaas
• Opisthorchiaas
• Trihhinoos
• Toksokariaas
• Tsüstitserkoosi
• Ehhinokokoos

Peamised seroloogilises diagnoosimises kasutatavad meetodid

Immunofluorestsentsreaktsioon (RIF, Koonsi meetod)

Meetodi sordid:

Otsene: mikroobe või koe antigeene või mikroobe töödeldakse spetsiaalsete antikehadega seerumitega, samuti märgistatud fluorokroomidega, mis helendavad UV-valguses. Seega helendavad bakterid raku perifeeria ümber rohelise piiri kujul. vaadeldakse fluorestsentsmikroskoobi all.

Kaudne: tampooniproove töödeldakse antimikroobsete küüliku seerumi antikehadega. Seejärel pestakse ära need antikehad, mis pole mikroobide antigeenidega seondunud. Seega tuvastatakse mikroobidele jäänud antikehad. Selle tulemusena moodustub mikroobide + küülikuvastaste antikehade + fluorokroomiga märgistatud antimikroobsete küüliku antikehade kompleks. Seda kompleksi jälgitakse fluorestsentsmikroskoobi all.

Tulemuste hindamiseks on neljapunktiline skaala, mida iseloomustab antigeenrakkude pinna kollakasrohelise sära intensiivsus:

Väga nõrk raku sära

Raku perifeeria nõrk sära

+++/++++ ere raku sära

Reaktsiooni tiitriks loetakse seerumi lahjendus, mille reaktsioonitulemus on +++ või ++++.

Kaudse hemaglutinatsiooni (RNG) reaktsioon

Passiivse või kaudse hemaglutinatsiooni reaktsiooni kasutatakse siis, kui infektsioonide diagnoosimine põhjustatud algloomade, bakterite ja riketsiate poolt.

Tehnika koosneb mitmest etapist. Esmalt töödeldakse erütrotsüüte, "pestakse" isotoonilise naatriumkloriidi lahusega, seejärel vajadusel 1:20 000 tanniinilahusega, seejärel sensibiliseeritakse lahustuvate antigeenidega. Pärast töötlemist puhverdatud isotoonilise naatriumkloriidi lahusega on antigeen kasutamiseks valmis. Seerum lahjendatakse katseklaasides isotoonilise naatriumkloriidi lahusega, misjärel lisatakse igale lahjendatud seerumile erütrotsüütide diagnostika.

Tulemusi hinnatakse erütrotsüütide sette olemuse järgi:

Nõrk intensiivsus

Keskmine intensiivsus

intensiivne reaktsioon

Äärmiselt intensiivne reaktsioon

Positiivne tulemus on reaktsioon intensiivse reaktsiooniga +++ või järsult intensiivse reaktsiooniga ++++, mille puhul erütrotsüüdid katavad kogu katseklaasi põhja.

Ensüüm-immunoanalüüs (ELISA)

Meetod on kõrge spetsiifilisuse ja tundlikkusega, üle 90%. Peamine eelis on võimalus infektsiooni avastamine ja protsessi dünaamika jälgimine, mis näitab antikehade taset.

Seda analüüsi kasutatakse mitmesuguste infektsioonide diagnoosimiseks, sealhulgas:

• HIV-nakkus
• Viiruslik hepatiit
• Tsütomegaloviiruse infektsioon
• herpese infektsioon
• Toksoplasma infektsioon

Uued soovitused tervislikuks toitumiseks, mis põhinevad uutel uuringutel

Antigeen või antikeha fikseeritakse tahketele plaatidele, seejärel tuvastatakse ensüümmärgise abil antigeeni-antikeha kompleksid.

ELISA-l on teiste ees mitmeid eeliseid seroloogilised meetodid. Reaktsioon on kõige tundlikum ja testides kasutatakse universaalseid reaktiive. Analüüs on kiire, võime uurida erinevate klasside immunoglobuliine. Praegu on ELISA üks peamisi laboridiagnostika meetodeid.

ELISA tulemuste hindamine toimub spetsiaalsete seadmete abil automaatselt. Mõnel juhul on lubatud ka reaktsiooni tulemuste visuaalne ülevaade. Seroloogilise diagnoosi usaldusväärsus sõltub laborikontrolli korraldusest, mis koosneb mitmest protseduurist, mille eesmärk on hinnata tulemuste kvaliteeti.