5. “SENSOOR-MOTOORNE REAKTSIOON. BOKSERI MOOTORI VASTUS VÄLISIRRITIIVI VÄLJUNDELE Löögi kiiruse sooritamisel mängib olulist rolli see, kuidas poksija reageerib välise stiimuli (heli, signaal, pirn dünamomeetril enne) ilmumisele.

RZGA (RTGA)- väga spetsiifiline seroloogiline reaktsioon, mis võimaldab lahendada järgmisi ülesandeid: määrata hemaglutineeriva viiruse antikehade tiiter seerumis; tuvastada tundmatu hemaglutineeriv viirus teadaoleva seerumi järgi; määrata kahe hemaglutineeriva viiruse antigeense suhte määr. RZGA-d kasutatakse laialdaselt teatud viirusnakkuste (gripp, veiste paragripp, lammaste viirusabort jne) retrospektiivseks diagnoosimiseks. Selleks kasutatakse paarisseerumiproove, mis võetakse 2-3-nädalaste intervallidega ja haigus määratakse antikehade tiitri tõusuga 4 või enam korda.

RZGA eelised: seadistustehnika lihtsus, kiire reageerimine, steriilne töö pole vajalik, spetsiifilisus, madal hind. Puudus - RZGA on võimalik ainult hemaglutineerivate viirustega.

RZGA olemus seisneb selles, et kui viirusevastane immuunseerum interakteerub viiruse vastavate tüvedega, tekib viiruse hemaglutinatsioonivõime viivitus (inhibeerimine). RHA tulemust mõjutavad vereseerumis sisalduvad mittespetsiifilised hemaglutinatsiooni inhibiitorid. Neil on võime seostuda viirustega ja pärssida hemaglutinatsiooni. Selleks, et kõrvaldada inhibiitorite negatiivne mõju reaktsiooni kulgemisele, tuleb need hävitada (eemaldada). Selleks kasutatakse mitmeid meetodeid.

KomponendidRZGA : testitud viirust sisaldav materjal; diagnostiline immuunseerum; 1% erütrotsüütide suspensioon; 2. võimalus - uuritud vereseerum; standardantigeen (viiruse diagnostika); 1% erütrotsüütide suspensioon.

Lavastamisel reaktsioone, tuleb meeles pidada, et mõned kehavedelikud (vereseerum, uriin, sülg, piim jne) võivad sisaldada inhibiitoreid, mis võivad reaktsiooni pärssida ja hemaglutinatsiooni edasi lükata. Sellistel juhtudel võivad normaalsed seerumid, st tervete loomade seerumid, põhjustada hemaglutinatsiooni viivitust, mis toob kaasa ekslikud tulemused. Mõne seerumis terved inimesed ja loomadel ilmnesid kahte tüüpi inhibiitorid – termostabiilsed ja termolabiilsed. Termolabiilseid inhibiitoreid leidub (globuliini beetafraktsioonides ja neil on beetaglobuliini omadused, pärsivad hemaglutinatsiooni, neutraliseerivad viirust ja on viirusevastase immuunsuse oluline tegur. Häirivad RHA tootmist ja vabanevad neist inaktiveerides seerum 56-65 °C juures veevannis 30 minutit Termostabiilsed inhibiitorid (Francise inhibiitorid) sisalduvad globuliini a-fraktsioonides, need on resistentsed kõrged temperatuurid(isegi keemiseni) ja leelise toimel pärsivad nad hemaglutinatsiooni, kuid ei oma viirust neutraliseerivaid omadusi. Kuumusstabiilsed inhibiitorid eemaldatakse vereseerumist, töödeldes seerumeid süsinikdioksiidi, vibrio koolera kultuuri filtraadi või kaaliumperjodaadiga.
RHA määramiseks on vaja RHA-s sisalduvat viirust eelnevalt tiitrida, et määrata 1 AU. RHA määramisel võetakse viirust tiitriga 4 AU, see tähendab, et lahjendus on 4 korda väiksem kui viiruse tiiter RHA-s. Näiteks 1 AU-d sisaldava viiruse tiiter on 1:64, mis tähendab, et viiruse lahjenduses 1:16 on 4 AU-d.
Kõiki seerumeid kuumutatakse kuumuslabiilsete inhibiitorite eemaldamiseks 30 minutit temperatuuril 56–65 °C, olenevalt looma tüübist, enne RPHA seadistamist.
Reaktsiooni seadistamiseks ühes reas katseklaasides või süvendites valmistatakse seerumi lahjendused soolalahuses. Tavaliselt valmistatakse esimeses katseklaasis lahjendus 1:10 ja seejärel 2-kordsed lahjendused kuni 1:1280 ja mõnikord ka kõrgemad. Seejärel kantakse sellest reast 0,25 ml lahjendusele vastavat seerumit teise katseklaaside ritta ja sinna lisatakse 0,25 ml viirust, mis sisaldab 4 AÜ-d. Vedelik segatakse tuube loksutades ja segu hoitakse kontaktis 30-60 minutit toatemperatuuril või termostaadis, misjärel lisatakse igasse katsutisse 0,5 ml 1% erütrotsüütide suspensiooni, seejärel loksutatakse torusid ja segu hoitakse uuesti 30-60 minutit ruumis.

Hemadsorptsiooni viivitusreaktsioon (RZGAd).

Seda kasutatakse viiruste tuvastamiseks, tuvastamiseks ja tüpiseerimiseks nakatunud rakukultuuris.

Selle olemus on selles, et immuunseerumi antikehad, mis interakteeruvad rakukultuuris paljunevate hemaglutineerivate viiruste antigeeniga, sõeluvad neid ja selle tulemusena ei täheldata erütrotsüütide adsorptsiooni nakatunud rakkude pinnal.

Reaktsiooni komponendid: 1) nakatunud ja nakatumata hemaglutineeriva viiruse rakukultuuriga katseklaasides; 2) Diagnostiline viirusevastane seerum; 3) kana erütrotsüütide 0,4% suspensioon.

Seadistustehnika. Toitekeskkond tühjendatakse katseklaasidest rakukultuuriga, rakud pestakse selle valgukomponentidest, lisades katseklaasidesse 2-3 ml Hanki lahust. Pärast 1-2-minutilist kokkupuudet eemaldatakse Hanki lahus. Seejärel lisatakse igasse katse- ja kontrolltuubi 0,2 ml diagnostilist seerumit. Katseklaasid jäetakse kallutatud asendisse, riba ülespoole, ja hoitakse 15–20 minutit toatemperatuuril. Seejärel lisage 0,2 ml 0,4% erütrotsüütide suspensiooni ja jätke uuesti 3...5 minutiks toatemperatuurile kaldus asendisse. Seejärel pööratakse torusid ettevaatlikult 5-10 korda, et resuspendeerida settinud, kuid mitte adsorbeerunud erütrotsüüdid.

Hemaglutinatsiooni inhibeerimise test (HITA) on meetod viiruse tuvastamiseks või viirusevastaste antikehade tuvastamiseks patsiendi vereseerumis, mis põhineb viirust sisaldava ravimi poolt põhjustatud erütrotsüütide aglutinatsiooni puudumisel selle suhtes immuunse vereseerumi juuresolekul.

Hemaglutinatsiooni pärssimise reaktsioon (RTHA) põhineb viiruste antigeenide blokeerimisel, pärssimisel immuunseerumi antikehade poolt, mille tulemusena kaotavad viirused võime aglutineerida punaseid vereliblesid.

RTHA-d kasutatakse paljude viirushaiguste diagnoosimiseks, mille tekitajad (gripp, leetrid, punetised, puukentsefaliit jt) võivad aglutineerida erinevate loomade erütrotsüüte.

mehhanism. Viiruse tüpiseerimine viiakse läbi hemaglutinatsiooni inhibeerimise testis (HITA) tüübispetsiifiliste seerumite komplektiga. Reaktsiooni tulemusi võetakse arvesse hemaglutinatsiooni puudumise tõttu.

Viiruse A alatüüpe koos antigeenidega H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 jne saab RTGA-s eristada homoloogsete tüübispetsiifiliste seerumite komplektiga.

Komplemendi sidumise reaktsioon. mehhanism. Komponendid. Rakendus

Komplemendi sidumisreaktsioon (RCC) seisneb selles, et kui antigeenid ja antikehad vastavad üksteisele, moodustavad nad immuunkompleksi, mille külge kinnitub komplement (C) antikehade Fc fragmendi kaudu, st komplement on seotud antigeeniga. -antikehade kompleks. Kui antigeen-antikeha kompleksi ei moodustu, jääb komplement vabaks.

AG ja AT spetsiifilise interaktsiooniga kaasneb komplemendi adsorptsioon (seondumine). Kuna komplemendi sidumise protsess visuaalselt välja ei paista, tegid J. Bordet ja O. Zhangu ettepaneku kasutada indikaatorina hemolüütilist süsteemi (lamba erütrotsüüdid + hemolüütiline seerum), mis näitab, kas komplement on fikseeritud AG-AT kompleksiga. Kui AG ja AT vastavad üksteisele, st on tekkinud immuunkompleks, siis komplement seondub selle kompleksiga ja hemolüüsi ei toimu. Kui AT ei vasta AG-le, siis kompleks ei moodustu ja vabaks jääv komplement ühendub teise süsteemiga ja põhjustab hemolüüsi.

Komponendid. Komplemendi sidumise reaktsioon (CFR) on kompleks seroloogilised reaktsioonid. Selle rakendamiseks on vaja 5 koostisosa, nimelt: AG, AT ja komplement (esimene süsteem), lamba erütrotsüüdid ja hemolüütiline seerum (teine ​​süsteem).

CSC antigeeniks võivad olla erinevate tapetud mikroorganismide kultuurid, nende lüsaadid, bakterite komponendid, patoloogiliselt muutunud ja normaalsed elundid, kudede lipiidid, viirused ja viirust sisaldavad materjalid.

Täiendusena kasutatakse värsket või kuiva merisea seerumit.

mehhanism. RSK viiakse läbi kahes faasis: 1. faas - antigeeni + antikeha + komplementi kolme komponenti sisaldava segu inkubeerimine; 2. faas (indikaator) - vaba komplemendi tuvastamine segus, lisades sellele lamba erütrotsüütidest koosneva hemolüütilise süsteemi ja nende antikehi sisaldava hemolüütilise seerumi. Reaktsiooni 1. faasis toimub antigeen-antikeha kompleksi moodustumise ajal komplemendi sidumine ja seejärel 2. faasis antikehadega sensibiliseeritud erütrotsüütide hemolüüsi ei toimu; reaktsioon on positiivne. Kui antigeen ja antikeha ei ühti (uuritavas proovis ei ole antigeeni ega antikeha), jääb komplement vabaks ja 2. faasis liitub erütrotsüütide-antierütrotsüütide antikehade kompleksiga, põhjustades hemolüüsi; reaktsioon on negatiivne.

Rakendus. RSK-d kasutatakse paljude nakkushaiguste, eriti süüfilise (Wassermani reaktsioon) diagnoosimiseks.

Hemaglutinatsiooni pärssimise reaktsioon. mehhanism. Komponendid. Rakendus

(RTGA) - meetod viiruse tuvastamiseks või viirusevastaste antikehade tuvastamiseks patsiendi vereseerumis, mis põhineb viirust sisaldava ravimiga erütrotsüütide aglutinatsiooni puudumisel selle suhtes immuunse vereseerumi juuresolekul.

Hemaglutinatsiooni pärssimise reaktsioon (RTGA) põhineb blokaadil, viiruste antigeenide pärssimisel immuunseerumi antikehade poolt, mille tagajärjel kaotavad viirused võime aglutineerida punaseid vereliblesid.

Kasutatakse RTGA-d paljude viirushaiguste diagnoosimiseks, mille tekitajad (gripp, leetrid, punetised, puukentsefaliit jt) võivad aglutineerida erinevate loomade erütrotsüüte.

mehhanism. Viiruse tüpiseerimine viiakse läbi hemaglutinatsiooni inhibeerimise testis (HITA) tüübispetsiifiliste seerumite komplektiga. Reaktsiooni tulemusi võetakse arvesse hemaglutinatsiooni puudumise tõttu. Viiruse alatüüpe, millel on antigeenid H 0 N 1, H 1 N 1, H 2 N 2, H 3 N 2 ja teised, saab RTGA-s eristada homoloogsete tüübispetsiifiliste seerumite komplektiga.

sademete reaktsioon. mehhanism. Komponendid. Seadistamise viisid. Rakendus

Sadestumise reaktsioon (RP)- see on lahustuva molekulaarse antigeeni ja antikehade kompleksi moodustumine ja sadestumine hägususe kujul, mida nimetatakse sademeks. See moodustub antigeenide ja antikehade segamisel samaväärsetes kogustes; ühe neist liig vähendab immuunkompleksi moodustumise taset.

RP panna katseklaasides (ringsadestamise reaktsioon), geelides, toitekeskkonnas jne. Laialdaselt kasutatakse RP sorte poolvedelas agari- või agaroosigeelis: Ouchterlony topeltimmunodifusioon, radiaalne immunodifusioon, immunoelektroforees jne.

mehhanism. Seda tehakse läbipaistvate kolloidsete lahustuvate antigeenidega, mis on ekstraheeritud patoloogilisest materjalist, keskkonnaobjektidest või puhastest bakterikultuuridest. Reaktsioonis kasutatakse kõrge antikehatiitriga läbipaistvaid diagnostilisi sadestavaid seerumeid. Sadestava seerumi tiitrit võetakse kui antigeeni kõrgeimat lahjendust, mis immuunseerumiga interakteerudes põhjustab nähtava sademe – hägususe – moodustumist.

Rõngasadestamise reaktsioon asetatakse kitsastesse katseklaasidesse (läbimõõt 0,5 cm), millesse lisatakse 0,2-0,3 ml sadestavat seerumit. Seejärel kihistatakse Pasteuri pipetiga aeglaselt 0,1–0,2 ml antigeenilahust. Katseklaasid viiakse ettevaatlikult "vertikaalsesse asendisse. Reaktsioon registreeritakse 1-2 minuti pärast. Juhul positiivne reaktsioon seerumi ja uuritava antigeeni vahelisele piirile ilmub valge rõnga kujul sade. Kontrolltuubidesse sadet ei moodustunud.

Neutraliseerimisreaktsioon (PH)

See universaalne reaktsioon on võrdlusaluseks teiste seroloogiliste reaktsioonide hindamisel.

Selle põhimõte on, et kui antigeen (viirus) interakteerub homoloogsete antikehadega, moodustub antigeen + antikeha kompleks, mille tulemusena neutraliseeritakse viiruse nakkavus. Vaba (antikehadega mitteseotud) viiruse indikaator on viiruse suhtes tundlik elussüsteem: loomad, kanaembrüod või rakukultuur.

Reaktsiooni käivitamisel katseklaasis segatakse võrdsed kogused viirust ja seerumit, segu hoitakse sobival temperatuuril (4, 22 või 37 °C) üks tund või 16-18 tundi (olenevalt viirusest). ja katse tingimused). Seejärel kasutatakse seda segu viirustundliku elusüsteemi nakatamiseks, elusobjektide seisukorra jälgimiseks ja viiruse neutraliseerimise tulemusel pärast sobivat perioodi puudumist:

1) surm, areng kliiniline pilt haigus ja patoloogilised muutused laboriloomade elundites ja kudedes;

2) surm, patoloogilised muutused embrüo membraanides, kudedes ja hemaglutiniinide puudumine kanaembrüote õõnsuste vedelikes;

3) tsütopaatiline toime (CPE) või naastude moodustumine rakukultuuris.

Kuna teatud koguse viiruse neutraliseerimiseks on vaja teatud kogust antikehi ja üks neist komponentidest on veel teadmata, saab PH seada kahel viisil:

1) seerumi erinevatele annustele (lahjendustele) (tavaliselt 2-kordsete lahjenduste kujul) lisage samad viiruse annused (tavaliselt 100-1000 ED50). Selle variandi puhul määratakse viirust neutraliseerivate antikehade tiiter seerumis, mille indikaatoriks on seerumi lahjendus, mis kaitseb 50% nakatunutest viiruse toime eest. bioloogilised süsteemid;

2) viiruse erinevatele annustele (lahjendustele) (tavaliselt 10-kordsete jadalahjenduste kujul) lisage samad doosid seerumit (tavaliselt lahjendustes 1:10 või 1:20). Selle PH variandi määramisel kasutatakse lisaks uuritavale (või spetsiifilisele) seerumile ka normaalset (negatiivset) seerumit. Sel juhul määratakse neutraliseerimisindeks (IN), mis näitab, mitu korda vähendab immuunne (spetsiifiline) või testitav seerum viiruse tiitrit võrreldes normaalse seerumiga.

PH eelised on selle mitmekülgsus ja kõrge spetsiifilisus; puudused - kõrge töömahukus; vajadus rangelt järgida materjalide, riistade ja tööriistade steriilsust; bioloogiliste süsteemide kõrge elukallidus; biotesti suhteline kestus ja vajadus matemaatiliste arvutuste järele.

Hemaglutinatsiooni pärssimise reaktsioon (HITA)

Laialdaselt kasutatav hemaglutineerivate viiruste uurimisel.

See põhineb asjaolul, et homoloogse viirusega (antigeeniga) kohtudes neutraliseerivad antikehad mitte ainult selle nakkavat, vaid ka hemaglutineerivat aktiivsust, kuna need blokeerivad hemaglutinatsiooni eest vastutavad virioni retseptorid, moodustades nendega antigeeni + antikeha kompleksi.

RTGA põhimõte seisneb selles, et katseklaasis (süvendis) segatakse võrdsetes kogustes vereseerumit ja viirust ning peale kokkupuudet (30-40 minutit) lisatakse vastava loomaliigi erütrotsüüdid.

Punased verelibled näitavad viiruse olemasolu segus. Erütrotsüütide aglutinatsioon näitab viiruse olemasolu segus ja hemaglutinatsiooni puudumine näitab selle puudumist, kuna antikehad neutraliseerisid täielikult viiruse hemaglutineeriva aktiivsuse.

RTGA-d saab installida kahes versioonis:

1) seerumi erinevatele lahjendustele (tavaliselt 2-kordsele) lisage sama annus viirust (4-8 HAU);

2) viiruse erinevatele lahjendustele (tavaliselt 2-kordsele) lisage sama doos seerumit.

RTGA seadistamine vastavalt esimesele valikule viiakse läbi järgmiste sammude kohaselt:

Viirust tiitritakse RGA-s ja määratakse selle hemaglutinatsioonitiiter;

Valmistage ette ja kontrollige viiruse tööannust (4 või 8 HAU);

Nad panid RTGA põhikogemuse;

Tulemusi võetakse arvesse.

Hinnake hemaglutinatsiooni igas segus ja määrake antikehade tiiter. Seerumi antikehade tiitrit peetakse kõrgeimaks seerumi lahjenduseks, mis siiski täielikult pärsib hemaglutinatsiooni.

RGTA võimaldab teil lahendada järgmist diagnostilised ülesanded:

Tuntud viiruse abil tuvastada ja määrata antikehade tiiter vereseerumis;

Tuvastage tundmatu viirus, uurides seda erinevate teadaolevate seerumite (antikehadega).

RTGA eelisteks on seadistustehnika lihtsus ja kiire tulemus. Seda reaktsiooni saab aga kasutada ainult hemaglutineerivate viiruste puhul.