Reacții serologice în diagnosticul bolilor infecțioase. Metodă serologică de diagnosticare a infecțiilor virale Teste serologice utilizate pentru diagnosticarea infecțiilor virale

Antigene- substanțe străine genetic care, introduse în organismul unui animal sau uman, provoacă un răspuns imun specific - sinteza de anticorpi, formarea de limfocite T sensibilizate, memoria imunologică sau toleranța. Substanțele străine sunt structuri chimice care nu sunt prezente în organism. Străine organismului uman sunt virușii, microorganismele, precum și celulele, țesuturile, organele animalelor și altor persoane. Antigenii au mai mulți receptori pentru legarea de anticorpi și sunt capabili să reacționeze cu aceștia atât în organismul animal sau uman (in vivo), cât și în afara organismului - in vitro (in vitro).

Anticorpi- proteine cu greutate moleculară mare ale fracției globulinice a serului sanguin. Anticorpii sunt sintetizați sub influența unui antigen și sunt capabili să reacționeze (se combina) în mod specific cu antigenul corespunzător. Toți anticorpii au o structură caracteristică de imunoglobuline; diferă în imunologic, biologic și proprietăți fizice; și sunt împărțite în 5 clase - IgG, IgA, IgM, IgD și IgE.

Reacții serologice

În practica de laborator, ei folosesc reacții serologice- reactii de laborator intre antigeni si anticorpi, care conduc la modificari inregistrate in sistemul studiat. Aceste reacții se numesc serologice, deoarece pentru producerea lor se utilizează ser (ser) care conține anticorpi.

Studii serologice efectuate pentru a detecta anticorpii specifici și antigenul patogen în bolile infecțioase sunt metode mai accesibile diagnostic de laborator decât detectarea bacteriologică a agentului patogen. În unele cazuri, studiile serologice rămân singura metodă de diagnosticare a bolilor infecțioase.

Câteva metode de depistare a anticorpilor utilizate în practica de laborator

Toate reacțiile serologice se bazează pe interacțiunea unui antigen și a unui anticorp cu formarea de complexe imune care pot fi detectate în testele in vitro (adică „in vitro” - în afara unui organism viu). Reacțiile antigen-anticorp în sistemul in vitro pot fi însoțite de mai multe fenomene - aglutinare, precipitare, liză și altele. Manifestările externe ale reacției depind de proprietățile fizico-chimice ale antigenului (dimensiunea particulelor, stare fizică), clasa și tipul de anticorpi, precum și condițiile experimentale (consistența mediului, concentrația de sare, pH, temperatură).

1. Reacția de legare a complementului

Completa este un sistem de proteine din plasma sanguină, care include 9 componente indicate prin litera C (C1, C2, C3, ... C9), factorul B, factorul D și o serie de proteine reglatoare. Unele dintre aceste componente constau din 2-3 proteine, de exemplu C1 este un complex de trei proteine. Aceste proteine circulă în sânge și sunt prezente pe membranele celulare. Complementul este cel mai important sistem al imunității înnăscute și dobândite. Acest sistem este conceput pentru a proteja organismul de acțiunea agenților străini și este implicat în implementarea răspunsului imun al organismului. Complementul a fost descoperit la sfârșitul secolului al XIX-lea de omul de știință belgian J. Borde.

Reacția de fixare a complementului (CFR)- un test serologic utilizat pentru cuantificarea anticorpilor și antigenelor fixatoare de complement. Descris pentru prima dată de Bordet și Zhangu (Bordet - Gengou) în 1901. RSK se bazează pe faptul că complexul antigen-anticorp este capabil să absoarbă complementul care este adăugat amestecului de reacție. Când antigenele și anticorpii corespund între ele, ele formează un complex imun, de care este atașat complementul. Complexul imun specific adsorb complementul adăugat în sistem, adică. legarea complementului de către complexul antigen-anticorp. Cu cât sunt mai mulți anticorpi, cu atât se fixează mai mult complement. Dacă nu se formează complexul antigen-anticorp, atunci complementul rămâne liber.

Complexitatea CSC este că reacția de formare a complexului „antigen – anticorp – complement” este invizibilă. Un sistem hemolitic indicator suplimentar este utilizat pentru a identifica componentele reacției. Folosind reacția de hemoliză, se efectuează o determinare cantitativă a restului de complement după terminarea reacției antigenului cu antiser.

Testul de fixare a complementului (RCT) este utilizat pentru a detecta anticorpi la un antigen specific sau pentru a determina tipul de antigen de către un anticorp cunoscut. Această reacție serologică complexă implică două sisteme și complement. Primul sistem - bacteriologic (principal), constă dintr-un antigen și un anticorp. Al doilea sistem este hemolitic (indicator). Include eritrocite de oaie (antigen) și serul hemolitic corespunzător (anticorp).

RSK este pus în două etape: în primul rând, antigenul este combinat cu serul de sânge de testat, în care sunt căutați anticorpi și apoi se adaugă complement. Dacă antigenul și anticorpul se potrivesc, atunci se formează un complex imun care leagă complementul. În absența anticorpilor în ser, complexul imun nu se formează și complementul rămâne liber. Deoarece procesul de adsorbție a complementului de către complex este invizibil vizual, se adaugă un sistem hem pentru a dezvălui acest proces.

Datorită sensibilității sale ridicate, reacția de fixare a complementului (CFR) este utilizată atât pentru diagnostic serologic bacteriene şi infecții virale, afecțiuni alergice și pentru identificarea antigenelor (cultură bacteriană izolată).

Reacția de precipitare (RP)(din latinescul praecipitatio - precipitare, cădere) se bazează pe precipitarea unui complex imun specific format dintr-un antigen solubil și un anticorp specific în prezența unui electrolit. Ca rezultat al reacției, se formează un inel tulbure sau un precipitat liber - un precipitat. Are loc o reacție de precipitare între un antigen solubil în apă și un anticorp, rezultând complexe mari care precipita

3. Reacția de floculare

Reacția de floculare (după Ramon)(din latină floccus - fulgi de lână, floculi - frânturi, fulgi; floculare - formarea de agregate floculente libere (floculi) din particule mici ale fazei dispersate) - apariția opalescenței sau a masei floculente (imunoprecipitare) într-o eprubetă în timpul reacția toxină - antitoxină sau anatoxină - antitoxină. Este utilizat pentru determinarea activității serului antitoxic sau a toxoidului.

Reacția de floculare se bazează pe detectarea floculării „inițiale” - turbiditate în timpul formării unui complex de exotoxină (anatoxină) + antitoxină în raporturile cantitative optime ale ingredientelor.

4. Reacția de aglutinare

Aglutinare(din latină agglutinatio - bonding) este reacția de interacțiune a unui antigen cu un anticorp specific, care se manifestă sub formă de legare. În acest caz, antigenii sub formă de particule-corpuscule (celule microbiene, eritrocite etc.) sunt lipiți împreună de anticorpi și precipită (aglutinat) sub formă de fulgi. Aglutinatele sunt de obicei vizibile cu ochiul liber. Pentru ca reacția să aibă loc, este necesară prezența electroliților (de exemplu, soluție izotonică de clorură de sodiu), accelerând procesul de aglutinare.

Cu ajutorul testului de aglutinare (RA), reactio agglutinationis (testul de aglutinare în limba engleză), sunt detectați anticorpi sau antigene corpusculare. În funcție de tipul de imunodiagnosticum utilizat, apar reacții de aglutinare microbiană, hemaglutinare, aglutinare latex, coaglutinare etc.

5. Denumirea anticorpilor implicați în reacțiile de precipitare

Anticorpii implicați în reacțiile sedimentare au primit denumirea tradițională pentru interacțiunea lor cu antigenul:

aglutinine - provoacă aglutinarea antigenului corpuscular - aglutinogen și precipitarea complexului antigen-anticorp (aglutinat);

precipitine - formează un precipitat cu un antigen solubil - precipitinogen.

Bacteriolizinele (determină liza bacteriilor) și hemolizinele (determină liza globulelor roșii) sunt implicate în reacțiile litice.

Diagnosticul serologic bazat pe reacția antigen-anticorp poate fi utilizat pentru a determina ambele și joacă un rol în determinarea etiologiei unei infecții virale chiar și cu rezultate negative ale izolării virusului.

Succesul diagnosticului serologic depinde de specificul reacției și de respectarea condițiilor temporare de prelevare a sângelui necesare sintezei de anticorpi de către organism.

În cele mai multe cazuri, se folosesc seruri de sânge pereche, luate la intervale de 2-3 săptămâni. O reacție pozitivă este considerată o creștere de cel puțin 4 ori a titrului de anticorpi. Se știe că majoritatea anticorpilor specifici aparțin claselor IgG și IgM, care sunt sintetizați în momente diferite ale procesului infecțios. în care anticorpi IgM sunt precoce, iar testele folosite pentru a le determina sunt folosite pentru diagnosticul precoce (este suficient să examinăm un ser). Anticorpii din clasa IgG sunt sintetizați mai târziu și stocați pentru o perioadă lungă de timp.

Pentru tiparea virusului, pH-ul este utilizat, pentru diagnosticarea specifică grupului, de exemplu, a infecției cu adenovirus, se utilizează reacție de fixare a complementului(RSK). Cele mai folosite sunt reacție de inhibare a hemaglutinării(RTGA), RSK, RIF, reacții pasiveȘi hemaglutinare pasivă inversă(RPGA, ROPGA), diverse variante ale ELISA, care aproape peste tot au înlocuit RIA, egale ca sensibilitate la acesta.

RTGA folosit pentru diagnosticarea bolilor cauzate de virusurile hemaglutinante. Se bazează pe legarea anticorpilor la serul pacientului a virusului standard adăugat. Indicatorul de reacție sunt eritrocitele aglutinate de virus (formarea unei „umbrele” caracteristice) în absența anticorpilor specifici și care se depun la fund, neaglutinate dacă sunt prezenți.

RSK este unul dintre testele serologice tradiționale și este folosit pentru a diagnostica multe infecții virale. Două sisteme iau parte la reacție: anticorpi din serul pacientului + virus standard și eritrocite de oaie + anticorpi la acestea, precum și un complement titrat. Dacă anticorpii și virusul se potrivesc, acest complex leagă complementul și nu are loc liza eritrocitelor de oaie ( reacție pozitivă). Cu un RSC negativ, complementul contribuie la liza eritrocitelor. Dezavantajul metodei este sensibilitatea insuficient de mare și dificultatea standardizării reactivilor.

Pentru a ține cont de semnificația RSK, precum și a RTGA, este necesar să se titraze serurile pereche, adică luate la debutul bolii și în timpul convalescenței.

RPGA- aglutinarea eritrocitelor (sau bilele de polistiren) sensibilizate de antigeni virali in prezenta anticorpilor. Orice virus poate fi absorbit pe eritrocite, indiferent de prezența sau absența activității hemaglutinante în ele. Datorită prezenței reacțiilor nespecifice, serurile sunt testate la o diluție de 1:10 sau mai mult.

RNGA- aglutinarea eritrocitelor sensibilizate de anticorpi specifici in prezenta antigenelor virale. ROPHA a primit cea mai mare distribuție în detectarea antigenului HBs atât la pacienți, cât și la donatorii de sânge.

DACĂ metoda de asemenea ELISA utilizat pentru detectarea anticorpilor în ser. ELISA în scopuri de diagnostic devine din ce în ce mai importantă și răspândită. Antigenul viral este absorbit pe faza solidă (fundul godeurilor plăcilor de polistiren sau granule de polistiren). Când se adaugă anticorpii corespunzători în ser, aceștia se leagă de antigenele adsorbite. Prezența anticorpilor doriti este detectată folosind anti-anticorpi (de exemplu, umani) conjugați cu o enzimă (peroxidază). Adăugarea substratului și reacția substrat-enzimă dau culoare. ELISA poate fi, de asemenea, utilizat pentru determinarea antigenelor. În acest caz, anticorpii sunt adsorbiți pe faza solidă.

Anticorpi monoclonali. Progrese mari în diagnosticarea infecţiilor virale s-au înregistrat în ultimul deceniu, când, odată cu dezvoltarea cercetării ingineriei genetice, a fost dezvoltat un sistem de obţinere a anticorpilor monoclonali. Acest lucru a crescut dramatic specificitatea și sensibilitatea metode de diagnostic determinarea antigenelor virale. Specificitatea îngustă a monoclonelor, reprezentând o proporție mică de proteine virale care ar putea să nu fie prezente în materialul clinic, este depășită cu succes prin utilizarea mai multor anticorpi monoclonali la diverși determinanți virali.

№ 1Reacții serologice folosit pentru diagnostic infecții virale.

Reacțiile imune sunt utilizate în studiile de diagnostic și imunologic la pacienți și oameni sanatosi. În acest scop, aplicați metode serologice, adică metode pentru studierea anticorpilor și antigenilor folosind reacții antigen-anticorp determinate în serul sanguin și alte fluide, precum și țesuturile corpului.

Detectarea anticorpilor împotriva antigenilor agentului patogen în serul sanguin al pacientului face posibilă diagnosticarea bolii. Studiile serologice sunt folosite și pentru identificarea antigenelor microbiene, a diferitelor substanțe biologic active, a grupelor sanguine, a antigenelor tisulare și tumorale, a complexelor imune, a receptorilor celulari etc.

Când un microb este izolat de la un pacient, agentul patogen este identificat prin studierea proprietăților sale antigenice folosind seruri de diagnostic imun, adică seruri de sânge ale animalelor hiperimunizate care conțin anticorpi specifici. Aceasta este așa-numita identificare serologică a microorganismelor.

În microbiologie și imunologie, reacțiile de aglutinare, precipitare, neutralizare, reacții care implică complement, folosind anticorpi și antigeni marcați (radioimunologic, imunotest enzimatic, metode imunofluorescente) sunt utilizate pe scară largă. Reacțiile enumerate diferă în ceea ce privește efectul înregistrat și tehnica de stadializare, cu toate acestea, toate se bazează pe reacția interacțiunii antigenului cu anticorpul și sunt utilizate pentru a detecta atât anticorpi, cât și antigene. Reacțiile imunitare se caracterizează prin sensibilitate și specificitate ridicate.

Caracteristicile interacțiunii unui anticorp cu un antigen stau la baza reacțiilor de diagnostic în laboratoare. Reacția in vitro dintre un antigen și un anticorp constă dintr-o fază specifică și una nespecifică. În faza specifică, există o legare specifică rapidă a situsului activ al anticorpului la determinantul antigenului. Urmează apoi faza nespecifică - mai lentă, care se manifestă prin fenomene fizice vizibile, precum formarea de fulgi (fenomen de aglutinare) sau precipitat sub formă de turbiditate. Această fază necesită anumite condiții (electroliți, pH optim al mediului).

Legarea unui determinant antigen (epitop) la locul activ al unui fragment Fab de anticorp se datorează forțelor van der Waals, legăturilor de hidrogen și interacțiunilor hidrofobe. Puterea și cantitatea de antigen legat de anticorpi depind de afinitatea, aviditatea anticorpilor și de valența acestora.

Nr. 2 Agenții cauzali ai leishmaniozei. Taxonomie. Caracteristică. Diagnosticul microbiologic. Tratament.

Taxonomie: tip Sarcomastigophorae, subtip Mastigophora - flageli, clasa Zoomastigophora, ordinul Kinetoplastida, genul Leishmania.

cultivare: Mediu de cultură NNN care conține agar cu sânge de iepure defibrinat. Leishmania creste si pe membrana corion-alantoica a embrionului de pui si in culturile celulare.

Epidemiologie: în ţările cu climă caldă. Mecanismul de transmitere al agenților patogeni este transmisibil, prin mușcătura de vectori - țânțari. Principalele surse de agenți patogeni: în leishmanioza antroponotică cutanată - oameni; cu leishmanioză zoonotică cutanată - rozătoare; cu leishmanioză viscerală - oameni; cu leishmanioză mucocutanată - rozătoare, animale sălbatice și domestice.

Patogenie și clinică. Există doi agenți patogeni leishmanioza cutanată: L. tropica - agentul cauzator al leishmaniozei antroponotice și L. major - agentul cauzal al leishmaniozei cutanate zoonotice.

Leishmanioza cutanată antroponotică se caracterizează printr-o perioadă lungă de incubație - câteva luni. La locul mușcăturii de țânțar, apare un tubercul, care crește și se ulcerează după 3 luni. Ulcerele sunt cel mai adesea localizate pe față și membrele superioare, cicatrizează până la sfârșitul anului. Leishmanioza cutanată zoonotică (leishmanioza ulcerativă precoce, ulcerul Pendinsky, formă rurală) este mai acută. Perioadă incubație este de 2-4 săptămâni. Ulcerele plângătoare sunt mai des localizate pe membrele inferioare. Leishmanioza mucocutanată este cauzată de leishmania complexului L. braziliensis; dezvoltă leziuni granulomatoase și ulcerative ale pielii nasului, mucoaselor gurii și laringelui. Leishmanioza viscerală antraponoasă este cauzată de leishmania complexului L. donovani; la pacienti sunt afectate ficatul, splina, ganglionii limfatici, maduva osoasa si tubul digestiv.

Imunitate: persistentă pe tot parcursul vieții

În frotiurile (de la tuberculi, conținut de ulcere, punctate din organe), colorate conform Romanovsky-Giemsa, se găsesc leishmanii mici, de formă ovală (amastigote), localizate intracelular. Pentru a izola o cultură pură a agentului patogen, inocularea se face pe mediu NNN: incubare timp de 3 săptămâni. Metodele serologice nu sunt suficient de specifice. Este posibil să utilizați RIF, ELISA.

Testul de alergie cutanată pentru HRT la leishmanină este utilizat în studiile epidemiologice ale leishmaniozei.

Tratament:În leishmanioza viscerală se folosesc preparate de antimoniu și diamidine (pentamidină). Cu leishmanioză cutanată - chinacrină, amfotericină.

Prevenire: distruge animalele bolnave, duce lupta împotriva rozătoarelor și țânțarilor. Imunoprofilaxia leishmaniozei cutanate se realizează prin inocularea unei culturi vii de L. major.

BILET#28

№ 1Imunoglobuline, structură și funcții.

natura imunoglobulinelor. Ca răspuns la introducerea unui antigen, sistemul imunitar produce anticorpi - proteine care se pot combina în mod specific cu antigenul care a determinat formarea lor și, astfel, participă la reacții imunologice. Anticorpii aparțin a-globulinelor, adică fracțiunii de proteine din serul sanguin care este cel mai puțin mobilă într-un câmp electric. În organism, a-globulinele sunt produse de celule speciale - celulele plasmatice. α-globulinele care poartă funcțiile anticorpilor se numesc imunoglobuline și sunt notate cu simbolul Ig. Prin urmare, anticorpii sunt imunoglobuline produse ca răspuns la introducerea unui antigen și capabile să interacționeze în mod specific cu același antigen.

Funcții. Funcția principală este interacțiunea centrelor lor activi cu determinanții complementari ai antigenelor. O funcție secundară este capacitatea lor de a:

Leagă antigenul pentru a-l neutraliza și a-l elimina din organism, adică a lua parte la formarea protecției împotriva antigenului;

Participa la recunoașterea unui antigen „străin”;

Asigurarea cooperării celulelor imunocompetente (macrofage, limfocite T și B);

Participa la diferite forme răspuns imun (fagocitoză, funcție ucigașă, GNT, HRT, toleranță imunologică, memorie imunologică).

Structura anticorpilor. Proteinele imunoglobulinelor compoziție chimică aparțin glicoproteinelor, deoarece constau din proteine și zaharuri; construit din 18 aminoacizi. Au diferențe de specii asociate în principal cu un set de aminoacizi. Moleculele lor au o formă cilindrică, sunt vizibile la microscopul electronic. Până la 80% dintre imunoglobuline au o constantă de sedimentare de 7S; rezistent la acizi slabi, alcaline, incalzire pana la 60 °C. Este posibilă izolarea imunoglobulinelor din serul sanguin prin metode fizice și chimice (electroforeză, precipitare izoelectrică cu alcool și acizi, sărare, cromatografia de afinitate etc.). Aceste metode sunt utilizate în producție în prepararea preparatelor imunobiologice.

Imunoglobulinele sunt împărțite în cinci clase în funcție de structura lor, proprietățile antigenice și imunobiologice: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Imunoglobulinele M, G, A au subclase. De exemplu, IgG are patru subclase (IgG, IgG2, IgG3, IgG4). Toate clasele și subclasele diferă în secvența de aminoacizi.

Moleculele de imunoglobuline din toate cele cinci clase constau din lanțuri polipeptidice: două lanțuri grele identice H și două lanțuri uşoare identice - L, conectate prin punți disulfurice. Conform fiecărei clase de imunoglobuline, i.e. M, G, A, E, D, disting cinci tipuri de lanțuri grele: ? (mu), ? (gama), ? (alfa), ? (epsilon) și? (delta), care diferă în antigenicitate. Lanțurile ușoare din toate cele cinci clase sunt comune și vin în două tipuri: ? (kappa) și? (lambda); Lanțurile L de imunoglobuline din diferite clase se pot uni (recombina) atât cu lanțuri H omoloage, cât și cu cele heterologe. Cu toate acestea, în aceeași moleculă pot exista doar lanțuri L identice (? sau?). Ambele lanțuri H și L au o regiune variabilă - V, în care secvența de aminoacizi este instabilă și o regiune constantă - C cu un set constant de aminoacizi. În lanțurile ușoare și grele, se disting grupările terminale NH2 și COOH.

În timpul procesării? -globulina mercaptoetanol distruge legăturile disulfurice iar molecula de imunoglobulină se descompune în lanțuri separate de polipeptide. Când este expusă la enzima proteolitică papaină, imunoglobulina este scindată în trei fragmente: două fragmente necristalizante care conțin grupări determinante la antigen și numite fragmente Fab I și II și un fragment Fc cristalizant. Fragmentele FabI și FabII sunt similare ca proprietăți și compoziție de aminoacizi și diferă de fragmentul Fc; Fragmentele Fab și Fc sunt formațiuni compacte interconectate prin secțiuni flexibile ale lanțului H, datorită cărora moleculele de imunoglobulină au o structură flexibilă.

Atât lanțurile H, cât și lanțurile L au regiuni compacte separate, conectate liniar numite domenii; sunt 4 în lanțul H și 2 în lanțul L.

Siturile active, sau determinanții, care se formează în regiunile V ocupă aproximativ 2% din suprafața moleculei de imunoglobulină. Fiecare moleculă are doi determinanți legați de hipervariabil secţiunile H-şi Lanțurile L, adică fiecare moleculă de imunoglobulină poate lega două molecule de antigen. Prin urmare, anticorpii sunt bivalenți.

Structura tipică a unei molecule de imunoglobulină este IgG. Clasele rămase de imunoglobuline diferă de IgG în elemente suplimentare ale organizării moleculelor lor.

Ca răspuns la introducerea oricărui antigen, pot fi produși anticorpi din toate cele cinci clase. De obicei, IgM este produs mai întâi, apoi IgG, restul - puțin mai târziu.

Nr. 2 Agentul cauzal al chlamidiei. Taxonomie. Caracteristică. Diagnosticul microbiologic. Tratament.

Taxonomie: ordinul Chlamydiales, familia Chlamydaceae, genul Chlamydia. Genul este reprezentat de speciile C.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae.

Bolile cauzate de chlamydia se numesc chlamydia. Bolile cauzate de C. trachomatis și C. pneumoniae sunt antroponoze. Ornitoza, al cărei agent cauzal este C. psittaci, este o infecție zooantroponotică.

Morfologia chlamydia: bacterii mici, gram "-", formă sferică. Nu formează spori, fără flageli și capsule. Peretele celular: membrana cu 2 straturi. Au glicolipide. Gram este roșu. Principala metodă de colorare este conform Romanovsky-Giemsa.

2 forme de existență: corpuri elementare (particule infecțioase inactive, în afara celulei); corpuri reticulare (în interiorul celulelor, formă vegetativă).

Cultivare: Poate fi propagat numai în celule vii. ÎN sacul vitelinîn curs de dezvoltare embrioni de pui, animale sensibile și în cultură celulară

Activitate enzimatică: mic. Fermentează acidul piruvic și sintetizează lipide. Nu este capabil să sintetizeze compuși cu energie înaltă.

Structura antigenică: Antigene de trei tipuri: lipopolizaharidă termostabilă specifică genului (în peretele celular). Identificat cu ajutorul RSK; antigen specific speciei de natură proteică (în membrana exterioară). Detectează folosind RIF; antigen specific variantei de natură proteică.

factori de patogenitate. Proteinele membranei exterioare a chlamidiei sunt asociate cu proprietățile lor adezive. Aceste adezine se găsesc numai în corpurile elementare. Chlamydia produce endotoxină. S-a descoperit că unele chlamydia au o proteină de șoc termic care poate provoca reacții autoimune.

rezistenţă. Factori de mediu ridicat la diverși. Rezistent la temperaturi scăzute, uscare. Sensibilă la căldură.

C. trachomatis este agentul cauzator al bolilor sistemului genito-urinar, ochilor și tractului respirator la om.

Trahomul este o boală infecțioasă cronică caracterizată prin afectarea conjunctivei și a corneei ochilor. Antroponoza. Transmis pe cale de contact-casnic.

Patogeneza: afectează membrana mucoasă a ochilor. Pătrunde în epiteliul conjunctivei și corneei, unde se înmulțește, distrugând celulele. Se dezvoltă keratoconjunctivită foliculară.

Diagnosticare: examinarea răzuirilor din conjunctivă. În celulele afectate, atunci când sunt colorate conform Romanovsky-Giemsa, se găsesc incluziuni citoplasmatice de culoare violet, situate în apropierea nucleului - corpul lui Provachek. RIF și ELISA sunt, de asemenea, utilizate pentru a detecta un antigen specific de chlamydia în celulele afectate. Uneori recurg la cultivarea chlamydia trachoma pe embrioni de pui sau culturi celulare.

Tratament: antibiotice (tetraciclina) si imunostimulante (interferon).

Prevenire: Nespecific.

Chlamydia urogenitală este o boală cu transmitere sexuală. Aceasta este o boală infecțioasă acută / cronică, care se caracterizează printr-o leziune predominantă a tractului genito-urinar.

Infecția umană are loc prin membranele mucoase ale tractului genital. Principalul mecanism de infectare este contactul, modul de transmitere este sexual.

Imunitate: celular, cu ser de anticorpi specifici infectati. După boala transferată - nu se formează.

Diagnosticare: În bolile oculare, se utilizează o metodă bacterioscopică - incluziunile intracelulare sunt detectate în răzuire din epiteliul conjunctivei. RIF este utilizat pentru a detecta antigenul chlamydia în celulele afectate. În caz de afectare a tractului genito-urinar se poate aplica o metodă biologică, bazată pe infecția cu materialul de testat (răzuire ale epiteliului din uretră, vagin) din cultura celulară.

Declarația RIF, ELISA vă permit să detectați antigenele chlamydia în materialul de testat. Metoda serologică – pentru depistarea IgM împotriva C. trachomatis în diagnosticul pneumoniei la nou-născuți.

Tratament. antibiotice (azitromicină din grupa macrolidelor), imunomodulatoare, eubiotice.

Prevenirea. Doar nespecific (tratamentul pacientilor), igiena personala.

Limfogranulomul veneric este o boală cu transmitere sexuală, caracterizată prin leziuni ale organelor genitale și ale ganglionilor limfatici regionali. Mecanismul infecției este contactul, calea de transmitere este sexuală.

Imunitate: imunitate persistentă, celulară și umorală.

Diagnosticare: Materialul pentru studiu este puroi, biopsie din ganglionii limfatici afectați, ser de sânge. Metoda bacterioscopică, metode biologice (cultivarea în sacul vitelin al unui embrion de pui), serologice (RCC cu seruri pereche este pozitiv) și alergologice (test intradermic cu alergen de chlamydia).

Tratament. Antibiotice - macrolide și tetracicline.

Prevenirea: Nespecific.

C. pneumoniae - agentul cauzal al chlamidiei respiratorii, provoacă bronșită și pneumonie acută și cronică. Antroponoza. Infecția este prin picături în aer. Ele intră în plămâni prin tractul respirator superior. Provoacă inflamație.

Diagnosticare: setarea RSK pentru detectarea anticorpilor specifici (metoda serologică). În infecția primară se ia în considerare detectarea IgM. RIF este, de asemenea, utilizat pentru a detecta antigenul chlamydia și PCR.

Tratament: Se efectuează cu ajutorul antibioticelor (tetracicline și macrolide).

Prevenirea: Nespecific.

C. psittaci - agentul cauzator al ornitozei - acută boală infecțioasă caracterizată prin afectarea plămânilor sistem nervosși organe parenchimatoase (ficat, splină) și intoxicație.

Zooantroponoza. Surse de infecție - păsări. Mecanismul de infecție este aerogen, calea de transmitere este aerogenă. Agentul cauzal este prin mucus. scoici respiră. căi, în epiteliul bronhiilor, alveole, se înmulțește, inflamație.

Diagnosticare: Materialul pentru studiu este sânge, sputa pacientului, ser de sânge pentru testarea serologică.

Se folosește o metodă biologică - cultivarea chlamydiei în sacul vitelin al unui embrion de pui, în cultură celulară. Metoda serologică. Aplicați RSK, RPHA, ELISA, folosind serul de sânge asociat pacientului. Test de alergie intradermică cu ornitină.

Tratament: antibiotice (tetracicline, macrolide).

BILET#29

Nr. 1 Agentul cauzal al difteriei. Taxonomie și caracteristici. Corinebacterii patogene condiționat. Diagnosticul microbiologic. Detectarea imunității anatoxice. Prevenție și tratament specific.

Difterie - acută boală infecțioasă, caracterizată prin inflamație fibrinoasă la nivelul faringelui, laringelui, mai rar în alte organe și fenomene de intoxicație. Agentul său cauzator este Corynebacterium diphtheriae.

Taxonomie. Corynebacterium aparține diviziunii Firmicutes, genul Corynebacterium.

Proprietăți morfologice și tinctoriale. Agentul cauzal al difteriei se caracterizează prin polimorfism: se găsesc tije subțiri, ușor curbate (cele mai frecvente), forme cocoide și ramificate. Bacteriile sunt adesea situate într-un unghi unul față de celălalt. Nu formează spori, nu au flageli, multe tulpini au microcapsulă. O trăsătură caracteristică este prezența boabelor de volutină la capetele bastonului (determină forma în formă de maciucă). Agentul cauzal al difteriei conform colorației Gram se colorează pozitiv.

proprietăți culturale. Anaerob facultativ, opt. temperatura. Microbul crește pe medii nutritive speciale, de exemplu, pe mediul Clauberg (agar sânge-telurit), pe care bacilul difteric dă colonii de 3 tipuri: a) mari, cenușii, cu margini zimțate, striate radiale, asemănătoare margaretelor; b) mici, negre, convexe, cu marginile netede; c) asemănător cu primul și al doilea.

În funcție de proprietățile culturale și enzimatice, se disting 3 variante biologice de C. diphtheriae: gravis, mitis și intermediar intermedius.

activitate enzimatică.Înalt. Fermentează glucoza și maltoza în formarea acidului, nu descompun zaharoza, lactoza și manitolul. Nu produc ureaza si nu formeaza indol. Produce enzima cistinază, care scindează cisteina la H 2 S. Formează catalaza, succinat dehidrogenază.

proprietăți antigenice. Antigenele O sunt polizaharide termostabile situate adânc în peretele celular. K-antigene - superficiale, termolabile, gri-specifice. Cu ajutorul serurilor la antigenul K C.diph. împărțit în serovare (58).

factori de patogenitate. O exotoxină care perturbă sinteza proteinelor și, ca rezultat, afectează celulele miocardului, glandelor suprarenale, rinichilor și ganglionilor nervoși. Capacitatea de a produce exotoxină se datorează prezenței în celulă a unui profag care poartă gena tox responsabilă de formarea toxinei. Enzime de agresiune - hialuronidază, neuraminidază. Microcapsula aparține și factorilor de patogenitate.

rezistenţă. Rezistent la uscare, actiune temperaturi scăzute, prin urmare, timp de câteva zile poate fi depozitat pe obiecte aflate în apă.

Epidemiologie. Sursa difteriei - bolnavi Infecția apare mai des pe calea respiratorie. Principala cale de transmitere este aeriană, iar calea de contact este, de asemenea, posibilă - prin lenjerie, vase.

Patogeneza. Poarta de intrare a infecției este membranele mucoase ale faringelui, nasului, tractului respirator, ochi, organe genitale, suprafața plăgii. La locul porții de intrare se observă o inflamație fibrinoasă, se formează un film caracteristic, care este greu separat de țesuturile subiacente. Bacteriile secretă exotoxină care intră în sânge - se dezvoltă toxinemia. Toxina afectează miocardul, rinichii, glandele suprarenale și sistemul nervos.

Clinica. Există diferite forme de localizare a difteriei: difterie a faringelui, care se observă în 85-90% din cazuri, difterie a nasului, laringelui, ochilor, vulvei, pielii, rănilor. Perioada de incubație este de la 2 la 10 zile. Boala începe cu o creștere a temperaturii corpului, durere la înghițire, apariția unui film pe amigdale, o creștere noduli limfatici. Umflarea laringelui, se dezvoltă crupa de difterie, ceea ce poate duce la asfixie și moarte. Alte complicații severe care pot provoca și moartea sunt miocardita toxică, paralizia mușchilor respiratori.

Imunitate. După boală - imunitate antitoxică persistentă, intensă. De o importanță deosebită este formarea de anticorpi față de fragmentul B. Aceștia neutralizează histotoxina difterică, împiedicând atașarea acesteia din urmă de celulă. Imunitatea antibacteriană - nestresată, specifică gri

Diagnosticul microbiologic. Cu ajutorul unui tampon, pacientului i se iau o peliculă și mucus din gât și nas. Pentru a face un diagnostic preliminar, este posibilă utilizarea unei metode bacterioscopice. Principala metodă de diagnosticare este bacteriologică: inoculare pe mediu Klauber II (agar sânge-telurit), pe un mediu seric dens pentru a detecta producerea de cistinază, pe mediu Hiss, pe un mediu pentru a determina toxicitatea agentului patogen. Identificarea intraspecifică constă în determinarea bio- și serovarului. Pentru detectarea accelerată a toxinei difterice se folosesc următoarele: RIGA (reacție de hemaglutinare indirectă) cu un diagnostic de eritrocite anticorpi, o reacție de neutralizare a anticorpilor (prezența unei toxine este judecată după efectul de prevenire a hemaglutinării); RIA (radioimun) și ELISA (imunotest enzimatic).

Tratament. Principala metodă de terapie este administrarea imediată a unui ser lichid ecvin antitoxic antidifteric specific. Imunoglobuline umane antidifterie pentru administrare intravenoasă.

Vaccinuri asociate: DTP (vaccin antipertussis-tetanos absorbit), DTP (anatoxina difterica-tetanica absorbita).

№ 2 Clase de imunoglobuline, caracteristicile lor.

Imunoglobulinele sunt împărțite în cinci clase în funcție de structura lor, proprietățile antigenice și imunobiologice: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.

Clasa de imunoglobuline G. Izotipul G este cea mai mare parte a serului Ig. Reprezintă 70-80% din toate Ig serice, în timp ce 50% se găsesc în lichidul tisular. Conținutul mediu de IgG în serul sanguin al unui adult sănătos este de 12 g/l. Timpul de înjumătățire al IgG este de 21 de zile.

IgG este un monomer care are 2 centri de legare a antigenului (poate lega simultan 2 molecule de antigen, prin urmare, valența sa este de 2), o greutate moleculară de aproximativ 160 kDa și o constantă de sedimentare de 7S. Există subtipuri Gl, G2, G3 și G4. Sintetizată de limfocitele B mature și plasmocite. Este bine definită în serul sanguin la vârful răspunsului imun primar și secundar.

Are afinitate mare. IgGl și IgG3 leagă complementul, iar G3 este mai activ decât Gl. IgG4, ca și IgE, are citofilitate (tropism sau afinitate pentru mastociteleși bazofile) și este implicat în dezvoltare reactie alergica Eu scriu. În reacțiile de imunodiagnostic, IgG se poate manifesta ca un anticorp incomplet.

Trece cu ușurință prin bariera placentară și oferă imunitate umorală nou-născutului în primele 3-4 luni de viață. De asemenea, poate fi secretat în secretul membranelor mucoase, inclusiv laptele prin difuzie.

IgG asigură neutralizarea, opsonizarea și marcarea antigenului, declanșează citoliza mediată de complement și citotoxicitatea mediată celulară dependentă de anticorpi.

Clasa de imunoglobuline M. Cea mai mare moleculă dintre toate Ig. Acesta este un pentamer care are 10 centri de legare a antigenului, adică valența sa este de 10. Greutatea sa moleculară este de aproximativ 900 kDa, constanta de sedimentare este 19S. Există subtipurile Ml și M2. Lanțurile grele ale moleculei IgM, spre deosebire de alte izotipuri, sunt construite din 5 domenii. Timpul de înjumătățire al IgM este de 5 zile.

Reprezintă aproximativ 5-10% din totalul Ig seric. Conținutul mediu de IgM în serul sanguin al unui adult sănătos este de aproximativ 1 g/l. Acest nivel la om este atins până la vârsta de 2-4 ani.

IgM este filogenetic cea mai veche imunoglobulina. Sintetizată de precursori și limfocitele B mature. Se formează la începutul răspunsului imun primar, este, de asemenea, primul care este sintetizat în corpul unui nou-născut - este determinat deja în a 20-a săptămână de dezvoltare intrauterină.

Are aviditate mare și este cel mai eficient activator al complementului din calea clasică. Participă la formarea imunității umorale serice și secretoare. Fiind o moleculă polimerică care conține un lanț J, poate forma o formă secretorie și poate fi secretată în secreția mucoaselor, inclusiv a laptelui. Majoritatea anticorpilor normali și izoaglutininelor sunt IgM.

Nu trece prin placenta. Detectarea anticorpilor specifici de izotip M în serul sanguin al unui nou-născut indică o infecție intrauterină anterioară sau un defect placentar.

IgM asigură neutralizarea, opsonizarea și marcarea antigenului, declanșează citoliza mediată de complement și citotoxicitatea mediată celulară dependentă de anticorpi.

Imunoglobuline clasa A. Există sub forme serice și secretoare. Aproximativ 60% din toate IgA se găsesc în secrețiile mucoasei.

IgA serică: Reprezintă aproximativ 10-15% din totalul Ig seric. Serul de sânge al unui adult sănătos conține aproximativ 2,5 g/l de IgA, maximul fiind atins până la vârsta de 10 ani. Timpul de înjumătățire al IgA este de 6 zile.

IgA este un monomer, are 2 centri de legare la antigen (adică 2-valent), o greutate moleculară de aproximativ 170 kDa și o constantă de sedimentare de 7S. Există subtipurile A1 și A2. Sintetizat de limfocitele B mature și plasmocite. Este bine definită în serul sanguin la vârful răspunsului imun primar și secundar.

Are afinitate mare. Poate fi un anticorp incomplet. Nu leagă complementul. Nu trece prin bariera placentară.

IgA asigură neutralizarea, opsonizarea și marcarea antigenului, declanșează citotoxicitatea mediată celular dependentă de anticorpi.

IgA secretorie: Spre deosebire de ser, sIgA secretorie există sub formă polimerică ca di- sau trimer (4- sau 6-valent) și conține peptide J și S. Greutate moleculară 350 kDa și peste, constantă de sedimentare 13S și mai mare.

Este sintetizat de limfocitele B mature și descendenții acestora - celulele plasmatice de specializarea corespunzătoare numai în interiorul membranelor mucoase și este eliberat în secretele lor. Volumul de producție poate ajunge la 5 g pe zi. Pool-ul slgA este considerat cel mai numeros din organism - numărul său depășește conținutul total de IgM și IgG. Nu se găsește în serul de sânge.

Forma secretorie a IgA este factorul principal în imunitatea locală umorală specifică a mucoaselor tractului gastrointestinal, sistemului genito-urinar și tractului respirator. Datorită lanțului S, este rezistent la proteaze. slgA nu activează complementul, dar se leagă eficient de antigene și îi neutralizează. Previne aderarea microbilor la celule epitelialeși generalizarea infecției în mucoasele.

Imunoglobuline clasa E. Denumită și reagină. Conținutul în serul de sânge este extrem de scăzut - aproximativ 0,00025 g / l. Detectarea necesită utilizarea unor metode speciale de diagnosticare extrem de sensibile. Greutate moleculară - aproximativ 190 kDa, constantă de sedimentare - aproximativ 8S, monomer. Reprezintă aproximativ 0,002% din toate Ig circulante. Acest nivel este atins la vârsta de 10-15 ani.

Este sintetizat de limfocitele B mature și celulele plasmatice în principal în țesutul limfoid al arborelui bronhopulmonar și tractul gastrointestinal.

Nu leagă complementul. Nu trece prin bariera placentară. Are o citofilie pronunțată - tropism pentru mastocite și bazofile. Implicat în dezvoltarea hipersensibilității tip imediat- reacție de tip I.

Clasa de imunoglobuline D. Nu există prea multe informații despre Ig din acest izotip. Aproape complet conținut în serul sanguin la o concentrație de aproximativ 0,03 g/l (aproximativ 0,2% din numărul total de Ig circulante). IgD are o greutate moleculară de 160 kDa și o constantă de sedimentare de 7S, un monomer.

Nu leagă complementul. Nu trece prin bariera placentară. Este un receptor pentru precursorii limfocitelor B.

BILET#30

Nr. 1 Agentul cauzal al amibiazei. Taxonomie. Caracteristică. Diagnosticul microbiologic. tratament specific.

Taxonomie: filul Sarcomastigophorae, subfilul Sarcodina, clasa Lobosia, ordinul Amoebida.

Morfologie: Există două etape de dezvoltare a agentului patogen: vegetativă și chistică. Stadiul vegetativ are mai multe forme: vegetativ mare (țesut), vegetativ mic; formă prechistică, asemănătoare cu cea translucidă, formând chisturi.

Chistul (etapa de repaus) are formă ovală. Un chist matur conține 4 nuclei. Forma translucidă este inactivă, trăiește în lumenul colonului superior ca un comensal inofensiv, hrănindu-se cu bacterii și detritus.

O formă vegetativă mare se formează, în anumite condiții, dintr-o formă vegetativă mică. Este cel mai mare, formează pseudopode și are mișcare. Poate fagocita eritrocitele. Se găsește în fecale proaspete în amebiază.

cultivare: pe medii bogate în nutrienți.

Rezistenţă:În afara corpului, formele vegetative ale agentului patogen mor rapid (în 30 de minute). Chisturile sunt rezistente la mediu inconjurator sunt conservate în fecale și apă. În alimente, pe legume și fructe, chisturile persistă câteva zile. Mor când sunt fierte.

Epidemiologie: Amebiaza - boală antroponotică; sursa invaziei este omul. Mecanismul de transmitere este fecal-oral. Infecția apare atunci când chisturile sunt introduse cu alimente, apă, prin obiecte de uz casnic.

Patogeneza si clinica: Chisturile care au intrat în intestin și apoi s-au format din ele, formele luminale de amebe pot trăi în intestinul gros fără a provoca boli. Odată cu scăderea rezistenței organismului, amiba pătrunde în peretele intestinal și se înmulțește. Se dezvoltă amebiaza intestinală.

Trofozoiții formei tisulare sunt mobili datorită formării pseudopodiilor. Ele pătrund în peretele colonului, provocând necroză; capabil de a fagocita eritrocitele; poate fi găsit în fecalele umane. Odată cu necroză, se formează ulcere. Clinic, amebiaza intestinală se manifestă sub formă de scaune lichide frecvente cu sânge, însoțite de febră și deshidratare. În fecale se găsesc puroi și mucus, uneori cu sânge.

Amoeba cu flux sanguin poate intra în ficat, plămâni, creier, ducând la dezvoltarea amoebiazei extraintestinale.

Imunitate: Instabil, în principal legătura celulară este activată.

Diagnosticul microbiologic. Metoda principală este examinarea microscopică a fecalelor pacientului, precum și a conținutului abceselor. organe interne. Frotiurile sunt colorate cu soluție Lugol sau hematoxilină. Studii serologice (RNGA, ELISA, RSK): cel mai mare titru de anticorpi din serul sanguin este detectat cu amebiaza extraintestinală.

Tratament: Aplicați metronidazol, furamid.

Prevenire: identificarea și tratarea excretorilor chistici și purtătorilor de amibe, măsuri sanitare generale.

nr. 2 interferoni. Natura, metode de obținere. Aplicație.

Interferonii sunt glicoproteine produse de celule ca răspuns la infecția virală și la alți stimuli. Blocați reproducerea virusului în alte celule și participați la interacțiunea celulelor sistem imunitar. Există două grupe serologice de interferoni: tip I - IFN-? şi IFN -?; II tip - IFN-.? Interferonii de tip I au efecte antivirale și antitumorale, în timp ce interferonii de tip II reglează răspunsul imun specific și rezistența nespecifică.

Interferonul (leucocitar) este produs de leucocitele tratate cu viruși și alți agenți. α-interferonul (fibroblastul) este produs de fibroblastele tratate cu virus.

IFN-ul de tip I se leagă de celulele sănătoase și le protejează de viruși. Efectul antiviral al IFN-ului de tip I se poate datora și faptului că este capabil să inhibe proliferarea celulară prin interferarea cu sinteza aminoacizilor.

IFN-? produs de limfocitele T și NK. Stimulează activitatea limfocitelor T și B, monocitelor / macrofagelor și neutrofilelor. Induce apoptoza macrofagelor activate, keratinocitelor, hepatocitelor, celulelor măduvă osoasă, endoteliocite și suprimă apoptoza monocitelor periferice și a neuronilor infectați cu herpes.

Interferonul leucocitar modificat genetic este produs în sistemele procariote (E. coli). Obținerea biotehnologiei interferonul leucocitar include următoarele etape: 1) tratamentul masei leucocitelor cu inductori de interferon; 2) izolarea amestecului de ARNm din celulele tratate; 3) obţinerea de ADN complementar total folosind transcriptază inversă; 4) inserarea cADN-ului în plasmidă coliși clonarea acesteia; 5) selecţia clonelor care conţin gene de interferon; 6) includerea în plasmidă a unui promotor puternic pentru transcrierea cu succes a genei; 7) expresia genei interferonului, i.e. sinteza proteinei corespunzătoare; 8) distrugerea celulelor procariote și purificarea interferonului folosind cromatografia de afinitate.

interferoni aplica pentru prevenirea și tratarea unui număr de infecții virale. Efectul lor este determinat de doza medicamentului, dar dozele mari de interferon au un efect toxic. Interferonii sunt utilizați pe scară largă pentru gripă și alte forme acute afectiuni respiratorii. Medicamentul este eficient asupra primele etape boală, aplicată local. Interferonii au un efect terapeutic în hepatita B, herpes și, de asemenea, în neoplasmele maligne.

Detectarea în serul sanguin anticorpii pacientului împotriva antigenelor agentului patogen vă permit să faceți un diagnostic al bolii. Studiile serologice sunt folosite și pentru identificarea antigenelor microbiene, a diferitelor substanțe biologic active, a grupelor sanguine, a antigenelor tisulare și tumorale, a complexelor imune, a receptorilor celulari etc.

La izolarea unui microb de la pacient, agentul patogen este identificat prin studierea proprietăților sale antigenice folosind seruri de diagnostic imun, adică seruri de sânge ale animalelor hiperimunizate care conțin anticorpi specifici. Acest așa-zis identificarea serologică microorganisme.

Folosit pe scară largă în microbiologie și imunologie reacții de aglutinare, precipitare, neutralizare, reacții care implică complement, folosind anticorpi și antigeni marcați (radioimunologic, imunotest enzimatic, metode imunofluorescente). Reacțiile enumerate diferă în ceea ce privește efectul înregistrat și tehnica de stadializare, cu toate acestea, toate se bazează pe reacția interacțiunii antigenului cu anticorpul și sunt utilizate pentru a detecta atât anticorpi, cât și antigene. Reacțiile imunitare se caracterizează prin sensibilitate și specificitate ridicate.

Caracteristicile interacțiunii unui anticorp cu un antigen stau la baza reactiilor de diagnostic in laboratoare. Reacţie in vitroîntre antigen și anticorp constă dintr-o fază specifică și nespecifică. ÎN faza specifica există o legare specifică rapidă a situsului activ al anticorpului de determinantul antigenului. Apoi vine faza nespecifica - mai lent, care se manifestă prin fenomene fizice vizibile, de exemplu, formarea de fulgi (fenomen de aglutinare) sau precipitat sub formă de turbiditate. Această fază necesită anumite condiții (electroliți, pH optim al mediului).

La întrebarea despre diagnosticarea expresă:

1. O cultură izolată în forma sa pură poate fi diagnosticată.
2. În laboratoare special echipate (trebuie să aibă permisiunea)
3. Respectarea unor reguli stricte precum: o cameră izolată, costumele speciale de protecție necesare, igienizarea completă obligatorie a spațiilor după lucrul cu agentul patogen, igienizarea cercetătorilor după muncă.

Metode de diagnosticare expresă.
1. Bacteriologie - medii nutritive politropice combinate pentru studiul rapid al morfelor, tinctorului, biochimiei. proprietăți. Utilizarea unei benzi indicatoare de enzime, metoda electrofizică, metoda discurilor de hârtie impregnate cu diverse substanțe (glucazo, lactoză etc.)
2. Diagnosticarea fagilor.
3. Serodiagnostic - metoda lui Mancini, reactie de precipitare in gel conform Ascoli, RA, RPGA.
4. Bacterioscopie – RIF direct și indirect.

Metode de diagnostic expres pentru:
Holera - M. Z. Ermolyeva, raion de imobilizare cu ser de diagnosticare a holerei, RIF.
Tularemie - RA pe sticlă, RPGA
Chume - tiparea fagilor, metoda discurilor de hârtie cu carbohidrați, RPHA.
Antrax - metoda Ascoli, RIF, RPGA.

Natura creșterii: există trei difuze (anaerobi facultativi), aproape de jos (anaerobi obligatorii) și de suprafață (aerobi obligatorii).

Izolarea culturii pure bacterii anaerobe

În practica de laborator, este adesea necesar să se lucreze cu microorganisme anaerobe. Sunt mai pretențioși cu mediile nutritive decât aerobii, au adesea nevoie de suplimente speciale de creștere, necesită oprirea aportului de oxigen în timpul cultivării lor, perioada lor de creștere este mai lungă. Prin urmare, lucrul cu ei este mai complicat și necesită o atenție considerabilă din partea bacteriologilor și a asistenților de laborator.

Este important să se protejeze materialul care conține agenți patogeni anaerobi de efectele toxice ale oxigenului atmosferic. Prin urmare, se recomandă luarea materialului din focarele de infecție purulentă în timpul puncției lor cu o seringă, timpul dintre luarea materialului și însămânțarea acestuia pe un mediu nutritiv trebuie să fie cât mai scurt posibil.

Deoarece mediile nutritive speciale sunt utilizate pentru cultivarea bacteriilor anaerobe, care nu ar trebui să conțină oxigen și să aibă un potențial redox scăzut (-20 -150 mV), în compoziția lor sunt introduși indicatori - resazurină, albastru de metilen și altele asemenea, care reacționează la o schimbare a acestui potential. Odată cu creșterea sa, formele incolore ale indicatorilor sunt reluate și își schimbă culoarea: resazurina colorează roz mediu și albastru de metilen - albastru. Astfel de modificări indică imposibilitatea utilizării mediilor pentru cultivarea microbilor anaerobi.

Ajută la reducerea potențialului redox al introducerii în mediu a cel puțin 0,05% agar, care, prin creșterea vâscozității acestuia, ajută la reducerea aportului de oxigen. Acest lucru, la rândul său, se realizează și prin utilizarea mediilor de cultură proaspete (nu mai târziu de două ore de la producție) și reduse.

Trebuie remarcat faptul că, datorită particularităților tipului fermentativ de metabolism al bacteriilor anaerobe, acestea necesită medii mai bogate în nutrienți și vitamine. Cele mai utilizate sunt infuziile cardio-creier și hepatice, extractele de soia și drojdie, digeratul hidrolitic de cazeină, peptona, triptona. Este obligatoriu adăugarea factorilor de creștere precum tween-80, hemină, menadionă, sânge integral sau hemolizat.

Izolarea unei culturi pure de microorganisme aerobe constă dintr-un număr de etape.
În prima zi (etapa 1 a studiului), materialul patologic este preluat într-un recipient steril (eprubetă, balon, flacon). Este studiat pentru aspect, consistență, culoare, miros și alte semne, se prepară un frotiu, se colorează și se examinează la microscop. În unele cazuri (gonoree acută, ciuma), în acest stadiu este posibil să se facă un diagnostic anterior și, în plus, să se selecteze mediul pe care va fi semănat materialul. Am luat-o cu ansa bacteriologica (folosita cel mai des), cu o spatula dupa metoda Drygalsky, cu un tampon de vata-tifon. Cupele se inchid, se intorc cu susul in jos, se semneaza cu un creion special si se pun intr-un termostat la temperatura optima (37°C) timp de 18-48 de ani. Scopul etapei este obținerea de colonii izolate de microorganisme.
Cu toate acestea, uneori, pentru a îngrămădi materialul, acesta este însămânțat pe medii nutritive lichide.

Frotiurile sunt preparate din colonii suspecte, colorate prin metoda Gram pentru a studia proprietățile morfologice și tinctoriale ale agenților patogeni, iar bacteriile mobile sunt examinate într-o picătură „atârnată” sau „zdrobită”. Aceste semne au o valoare diagnostică extrem de mare în caracterizarea anumitor tipuri de microorganisme.
Resturile coloniilor studiate sunt îndepărtate cu grijă de pe suprafața mediului fără a atinge celelalte și se inoculează pe un agar oblic sau pe sectoare ale unei plăci Petri cu mediu nutritiv pentru a obține o cultură pură. Tuburile de testare sau vasele cu recolte se pun într-un termostat la temperatura optimă timp de 18-24 de ore.

Pe mediile nutritive lichide, bacteriile pot crește și ele diferit, deși caracteristicile manifestărilor de creștere sunt mai sărace decât pe cele solide.

Bacteriile sunt capabile să provoace turbiditate difuză a mediului, în timp ce culoarea acestuia poate să nu se schimbe sau să dobândească culoarea pigmentului. Acest model de creștere este cel mai adesea observat la majoritatea microorganismelor anaerobe facultative.

Uneori se formează un precipitat în partea inferioară a tubului. Poate fi sfărâmicios, omogen, vâscos, vicios etc. Mediul de deasupra poate rămâne transparent sau deveni tulbure. Dacă microbii nu formează un pigment, precipitatul are o culoare lividă sau gălbuie. De regulă, bacteriile anaerobe cresc într-un rang similar.

Creșterea peretelui se manifestă prin formarea de fulgi, boabe atașate de pereții interiori ai eprubetei. Mediul rămâne transparent.

Bacteriile aerobe au tendința de a crește la suprafață. Adesea, pe suprafață se formează o peliculă delicată incoloră sau albăstruie sub forma unui strat abia vizibil, care dispare atunci când mediul este scuturat sau agitat. Pelicula poate fi umedă, groasă, să aibă o consistență tricotată, moale și să se lipească de buclă, întinzându-se pentru el. Cu toate acestea, există și o peliculă densă, uscată, fragilă, a cărei culoare depinde de pigmentul, care este produs de microorganisme.

Dacă este necesar, se face un frotiu, se colorează, se examinează la microscop, iar microorganismele sunt însămânțate cu o buclă pe suprafața unui mediu nutritiv dens pentru a obține colonii izolate.

În a treia zi (etapa 3 a studiului), se studiază natura creșterii unei culturi pure de microorganisme și se realizează identificarea acesteia.

În primul rând, se acordă atenție caracteristicilor de creștere a microorganismelor pe mediu și se face un frotiu, colorându-l prin metoda Gram, pentru a verifica puritatea culturii. Dacă la microscop sunt observate bacterii cu același tip de morfologie, dimensiune și proprietăți tinctoriale (capacitate de vopsire), se ajunge la concluzia că cultura este pură. În unele cazuri, deja prin aspectul și caracteristicile creșterii lor, se poate trage o concluzie despre tipul de agenți patogeni izolați. Determinarea tipului de bacterii pentru acestea caracteristici morfologice numită identificare morfologică. Determinarea tipului de agenți patogeni după caracteristicile lor culturale se numește identificare culturală.

Cu toate acestea, aceste studii nu sunt suficiente pentru a face o concluzie finală despre tipul de microbi izolați. Prin urmare, ei studiază proprietățile biochimice ale bacteriilor. Sunt destul de variate.

Cel mai adesea, sunt studiate proprietăți zaharolitice, proteolitice, peptolitice, hemolitice, formarea decarboxilazei, oxidazei, catalazei, plasmacoagulazei, DNază, enzimelor fibrinolizină, reducerea nitraților la nitriți și altele asemenea. Pentru aceasta, există medii nutritive speciale care sunt inoculate cu microorganisme (serie Hiss pestriță, MPB, zer coagulat, lapte etc.).

Determinarea tipului de agent patogen prin proprietățile sale biochimice se numește identificare biochimică.

METODE DE CULTURA
ȘI IZOLAREA CULTURII BACTERIILOR PURE

Pentru o cultivare de succes, pe lângă mediul selectat corespunzător și însămânțat corespunzător, sunt necesare condiții optime: temperatură, umiditate, aerare (alimentare cu aer). Cultivarea anaerobilor este mai dificilă decât aerobii; sunt folosite diferite metode pentru a elimina aerul din mediul nutritiv.
Izolarea anumitor tipuri de bacterii (cultură pură) din materialul de testat, care de obicei conține un amestec de diferite microorganisme, este una dintre etapele oricărui studiu bacteriologic. O cultură microbiană pură se obține dintr-o colonie microbiană izolată.
Când se izolează o cultură pură din sânge (hemocultură), este preliminar „creștere” într-un mediu lichid: 10–15 ml de sânge steril sunt inoculați în 100–150 ml de mediu lichid. Raportul dintre sângele semănat și mediul nutritiv 1:10 nu este întâmplător - așa se realizează diluarea sângelui (sângele nediluat are un efect dăunător asupra microorganismelor).
Etape pentru izolarea unei culturi pure de bacterii
Etapa I (material nativ)
Microscopie (idee generală a microflorei).
Semănat pe medii nutritive dense (obținerea coloniilor).
Stadiul II (colonii izolate)
Studiul coloniilor (proprietăți culturale ale bacteriilor).
Studiu microscopic al microbilor într-un frotiu colorat
(proprietățile morfologice ale bacteriilor).
Inoculare pe agar nutrient inclinat pentru a izola o cultura pura.
Stadiul III (cultură pură)
Determinarea culturilor, morfologice, biochimice
și alte proprietăți pentru identificarea culturilor bacteriene
IDENTIFICAREA BACTERIILOR

Identificarea culturilor bacteriene izolate se realizează prin studierea morfologiei bacteriilor, a caracteristicilor culturale, biochimice și a altor caracteristici inerente fiecărei specii.

Informații similare.

11621 0

Reacțiile serologice sunt desemnate în conformitate cu fenomenele care însoțesc formarea unui complex antigen-anticorp în timpul interacțiunii componentelor cu proprietăți diferite. Există reacții de aglutinare, precipitare și liză.

Reacția de aglutinare (RA)

Reacția de aglutinare (RA) se bazează pe utilizarea unui antigen corpuscular (suspensie de bacterii, eritrocite sensibilizate, particule de latex etc.) care interacționează cu anticorpi specifici, în urma căruia complexul antigen-anticorp rezultat precipită. Această reacție este utilizată pe scară largă în practica de laborator pentru diagnosticul serologic al infecțiilor bacteriene și pentru identificarea microorganismelor izolate.

RA este folosită pentru a diagnostica multe boli infecțioase: bruceloză (reacție Wright, Heddleson), tularemie, leptospiroză (RAL - reacție de aglutinare și liză a leptospirei), listerioză, tifos(PAP - reacție de aglutinare rickettsia), shigeloză, yersinioză, pseudotuberculoză etc.

Reacția de aglutinare indirectă sau pasivă (RIGA sau RPGA).

Pentru a stabili această reacție, eritrocitele animalelor (oi, maimuțe, porcușori de Guineea, unele păsări), sensibilizate prin anticorpi sau antigen, care se realizează prin incubarea unei suspensii de eritrocite și a unei soluții de antigen sau ser imun.

Se numesc diagnosticele obținute pe baza eritrocitelor sensibilizate cu antigene diagnosticul eritrocitar antigenic. Ele sunt concepute pentru a detecta anticorpi în diluții seriate de seruri de sânge, cum ar fi diagnosticul de shigellosis eritrocitar, O-diagnosticums de salmonella eritrocitară.

În consecință, se numesc diagnostice bazate pe eritrocite sensibilizate cu imunoglobuline specifice anticorp(imunoglobulina) diagnosticumsși servesc la detectarea antigenelor în material diferit, de exemplu, un diagnostic de difterie de imunoglobulină eritrocitară pentru RIGA, utilizat pentru a detecta exotoxina difterice a corinebacterii într-un mediu nutritiv lichid atunci când materialul din nas și orofaringe este inoculat în acesta.

Reacția de hemaglutinare este utilizată pentru a diagnostica atât infecțiile bacteriene (febră tifoidă, paratifoidă, dizenterie, bruceloză, ciuma, holeră etc.), cât și virale (gripa, infecții cu adenovirus, rujeolă etc.). RIGA este superior ca sensibilitate și specificitate față de RA.

Reacția de inhibare a hemaglutinării (HITA)

Testul de inhibare a hemaglutinării (HITA) este utilizat pentru titrarea anticorpilor antivirali din serurile sanguine, precum și pentru a stabili tipul de afiliere a culturilor virale izolate. RTHA poate fi utilizat pentru a diagnostica acele infecții virale ai căror agenți patogeni au proprietăți hemaglutinante.

Principiul metodei este că serul care conține anticorpi la un anumit tip de virus își suprimă activitatea hemaglutinantă și eritrocitele rămân neaglutinate.

Reacția de inhibiție (întârziere) a hemaglutinării pasive (RTPGA).

Trei componente sunt implicate în RTGA: serul imun, antigenul (materialul de testat) și eritrocitele sensibilizate.

Dacă materialul de testat conține un antigen care reacționează în mod specific cu anticorpii serului standard imunitar, atunci îi leagă și, odată cu adăugarea ulterioară de eritrocite sensibilizate cu un antigen omolog cu serul, nu are loc hemaglutinarea.

RTPHA este utilizat pentru a detecta antigenele microbiene, pentru a le cuantifica și, de asemenea, pentru a controla specificitatea TPHA.

Reacția de aglutinare a latexului (RLA)

Particulele de latex sunt folosite ca purtători de anticorpi (imunoglobuline). RLA este o metodă expresă de diagnosticare a bolilor infecțioase, ținând cont de timpul necesar (până la 10 minute) și de capacitatea de a detecta un antigen într-un volum mic al materialului de testat.

RLA este utilizat pentru a indica antigenele Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae tip b, Neisseria meningitidis în lichidul cefalorahidian, pentru a detecta streptococii de grup A în tampoane de gât, pentru a diagnostica salmoneloza, yersinioza și alte boli. Sensibilitatea metodei este de 1-10 ng/ml sau 10³ -10⁶ celule bacteriene în 1 µl.

Reacția de coaglutinare (RKoA)

Reacția de coaglutinare (RKoA) se bazează pe capacitatea proteinei A a stafilococilor de a atașa imunoglobuline specifice. RKA - o metodă de diagnosticare expresă - este utilizată pentru a identifica antigenele termostabile solubile în secretele umane și în compoziția complexelor imune circulante (CIC). Detectarea antigenelor specifice din compoziția CEC necesită precipitarea lor prealabilă din serul sanguin.

reacție de precipitare

În reacția de precipitare (RP), ca rezultat al interacțiunii anticorpilor cu antigeni solubili foarte dispersi (proteine, polizaharide), se formează complexe cu participarea complementului - precipitate. Este un test sensibil utilizat pentru a detecta și caracteriza o varietate de antigeni și anticorpi. Cel mai simplu exemplu de RP de înaltă calitate este formarea unei benzi opace de precipitare într-o eprubetă la marginea straturilor de antigen pe serul imunitar - o reacție de precipitare în inel. Diverse tipuri de RP sunt utilizate pe scară largă în agar semi-lichid sau geluri de agaroză (metoda imunodifuziei duble, metoda imunodifuziei radiale, imunoelectroforeză).

Reacția de fixare a complementului (CFR)

Reacția de fixare a complementului (CFR) se bazează pe fenomenul de hemoliză care implică complementul, adică. poate detecta doar anticorpii fixatori de complement.

RSC este utilizat pe scară largă pentru a diagnostica multe infecții bacteriene și virale, rickettsioză, chlamydia, mononucleoza infectioasa, infecții cu protozoare, helmintiază. RSC este o reacție serologică complexă în care sunt implicate două sisteme: sistemul de testare (ser sanguin), reprezentat de sistemul antigen-anticorp și complement, și cel hemolitic (eritrocite de oaie + ser hemolitic). Serul hemolitic este un ser de sânge inactivat termic al unui iepure imunizat cu eritrocite de berbec. Conține anticorpi împotriva eritrocitelor de oaie.

Un rezultat pozitiv al RSK - absența hemolizei - se observă dacă serul de testat conține anticorpi omologi cu antigenul. În acest caz, complexul antigen-anticorp rezultat leagă complementul, iar în absența complementului liber, adăugarea sistemului hemolitic nu este însoțită de hemoliză. În absența anticorpilor corespunzători antigenului din ser, nu are loc formarea complexului antigen-anticorp, complementul rămâne liber și serul determină hemoliza eritrocitelor, adică. prezența hemolizei este un rezultat negativ al reacției.

Yushchuk N.D., Vengerov Yu.Ya.