5. „REACȚIA SENSORIO-MOTORIE. RĂSPUNS MOTOR AL UNUI BOXER LA APARIȚIA IRITIVĂRII EXTERNE În executarea în viteză a unui pumn, un rol important îl joacă modul în care boxerul reacționează la apariția unui stimul extern (sunet, semnal, bec de pe dinamometru înainte

RZGA (RTGA)- reacție serologică foarte specifică, care permite rezolvarea următoarelor sarcini: determinarea titrului de anticorpi împotriva virusului hemaglutinant în ser; identificarea unui virus hemaglutinant necunoscut prin ser cunoscut; stabiliți gradul de relație antigenică a două virusuri hemaglutinante. RZGA este utilizat pe scară largă pentru diagnosticarea retrospectivă a anumitor infecții virale (gripa, paragripa la bovine, avortul viral la oi etc.). Pentru aceasta se folosesc probe de ser pereche, prelevate la intervale de 2-3 săptămâni, iar boala este determinată de o creștere a titrului de anticorpi de 4 sau mai multe ori.

Avantajele RZGA: simplitatea tehnicii de setare, răspuns rapid, nu este necesară munca sterilă, specificitate, cost redus. Dezavantaj - RZGA este posibil numai cu virusuri hemaglutinante.

Esența RZGA constă în faptul că atunci când serul imunitar antiviral interacționează cu tulpinile corespunzătoare ale virusului, apare o întârziere (inhibare) a capacității de hemaglutinare a virusului. Rezultatul RHA este afectat de inhibitorii nespecifici ai hemaglutinării conținuți în serurile sanguine. Au capacitatea de a se lega de viruși și de a inhiba hemaglutinarea. Pentru a elimina efectul negativ al inhibitorilor asupra cursului reacției, aceștia trebuie distruși (înlăturați). Pentru aceasta se folosesc mai multe metode.

ComponenteRZGA : material testat care conține viruși; ser imun diagnostic; 1% suspensie de eritrocite; a 2-a opțiune - serul de sânge studiat; antigen standard (diagnostic viral); 1% suspensie de eritrocite.

La punerea în scenă reactii, trebuie avut in vedere ca unele fluide corporale (ser sangvin, urina, saliva, lapte etc.) pot contine inhibitori care pot inhiba reactia si pot intarzia hemaglutinarea. În aceste cazuri, serurile normale, adică serurile de la animale sănătoase, pot întârzia hemaglutinarea, ducând la rezultate eronate. În serul unora oameni sanatosi iar animalele au dezvăluit două tipuri de inhibitori - termostabili și termolabili. Inhibitorii termolabili se găsesc în (fracțiunile beta ale globulinei și au proprietățile beta-globulinei, inhibă hemaglutinarea, neutralizează virusul și sunt un factor important în imunitatea antivirală. Interferează cu producerea de RHA și scapă de ele prin inactivare). serul la 56-65°C într-o baie de apă timp de 30 de minute. temperaturi mari(chiar până la fierbere) și acțiunea alcalinelor, suprimă hemaglutinarea, dar nu posedă proprietăți de neutralizare a virusului. Inhibitorii stabili la căldură sunt îndepărtați din serul sanguin prin tratarea serurilor cu dioxid de carbon, filtrat de cultură de vibrio holeră sau periodat de potasiu.
Pentru setarea RHA, este necesară titrarea preliminară a virusului în RHA pentru a determina 1 AU. La stadializarea RHA, virusul este luat într-un titru de 4 AU, adică diluția este de 4 ori mai mică decât titrul virusului în RHA. De exemplu, titrul unui virus care conține 1 UA este 1:64, ceea ce înseamnă că 4 UA vor fi conținute într-o diluție de 1:16 a virusului.
Toate serurile sunt încălzite pentru a elimina inhibitorii termolabili timp de 30 de minute la o temperatură de 56-65°C, în funcție de tipul de animal, înainte de a seta RPHA.
Pentru a stabili reacția într-un rând de eprubete sau godeuri, se prepară diluții de ser în soluție salină. De obicei, în prima eprubetă se prepară o diluție de 1:10, iar apoi se prepară din aceasta diluții de 2 ori până la 1:1280 și uneori mai mari. Apoi, din acest rând, se transferă 0,25 ml din serul corespunzător diluției în al doilea rând de eprubete și se adaugă acolo 0,25 ml din virusul care conține 4 AU. Lichidul se amestecă prin agitarea tuburilor și amestecul se ține în contact timp de 30-60 de minute la temperatura camerei sau într-un termostat, după care se adaugă în fiecare tub 0,5 ml suspensie 1% de eritrocite, tuburile se agită apoi și amestecul se pastreaza din nou intr-o camera de 30-60 minute.

Reacția de întârziere a hemadsorbției (RZGAd).

Este utilizat pentru detectarea, identificarea și tiparea virușilor în cultura de celule infectate.

Esența lui este prin aceea că anticorpii serului imunitar, care interacționează cu antigenul virusurilor hemaglutinante care se înmulțesc în cultura celulară, îi cernează și, ca urmare, nu se observă adsorbția eritrocitelor pe suprafața celulelor infectate.

Componente de reacție: 1) infectate și neinfectate cu cultura celulară a virusului hemaglutinant în eprubete; 2) Ser antiviral diagnostic; 3) 0,4% suspensie de eritrocite de pui.

Tehnica setarii. Mediul nutritiv este drenat din eprubete cu cultură celulară, celulele sunt spălate de componentele sale proteice prin adăugarea a 2-3 ml de soluție Hank în eprubete. După 1-2 minute de expunere, soluția Hank este îndepărtată. Apoi, se adaugă 0,2 ml de ser de diagnostic în fiecare tub experimental și control. Eprubetele sunt lăsate în poziție înclinată, cu banda în sus și ținute la temperatura camerei timp de 15-20 min. Se adaugă apoi 0,2 ml suspensie 0,4% de eritrocite și se lasă din nou timp de 3...5 min în poziție înclinată la temperatura camerei. Ulterior, tuburile sunt rotite ușor de 5-10 ori pentru a resuspenda eritrocitele sedimentate, dar neadsorbite.

Testul de inhibare a hemaglutinării (HITA) este o metodă de identificare a unui virus sau de detectare a anticorpilor antivirali în serul sanguin al pacientului, bazată pe fenomenul absenței aglutinării eritrocitelor de către un medicament care conține un virus în prezența serului sanguin imun la acesta.

Reacția de inhibare a hemaglutinării (RTHA) se bazează pe blocarea, suprimarea antigenelor virușilor de către anticorpii serului imunitar, drept urmare virușii își pierd capacitatea de a aglutina globulele roșii.

RTHA este utilizat pentru a diagnostica multe boli virale, ai căror agenți cauzali (gripa, rujeola, rubeola, encefalita transmisă de căpușe etc.) pot aglutina eritrocitele diferitelor animale.

Mecanism. Tiparea virusului se realizează în testul de inhibare a hemaglutinării (HITA) cu un set de seruri specifice tipului. Rezultatele reacției sunt luate în considerare de absența hemaglutinării.

Subtipurile de virus A cu antigene H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 etc. pot fi diferențiate în RTGA cu un set de seruri omoloage specifice tipului.

Reacția de legare a complementului. Mecanism. Componente. Aplicație

Reacția de fixare a complementului (RCC) constă în faptul că, atunci când antigenele și anticorpii corespund între ele, ele formează un complex imun, la care complementul (C) este atașat prin fragmentul Fc al anticorpilor, adică complementul este legat de antigen. -complex de anticorpi. Dacă nu se formează complexul antigen-anticorp, atunci complementul rămâne liber.

Interacțiunea specifică a AG și AT este însoțită de adsorbția (legarea) complementului. Întrucât procesul de fixare a complementului nu apare vizual, J. Bordet și O. Zhangu au propus să utilizeze sistemul hemolitic (eritrocite de oaie + ser hemolitic) ca indicator, care arată dacă complementul este fixat de complexul AG-AT. Dacă AG și AT corespund între ele, adică s-a format un complex imun, atunci complementul se leagă de acest complex și nu are loc hemoliza. Dacă AT nu corespunde cu AG, atunci complexul nu se formează și complementul, rămânând liber, se conectează cu cel de-al doilea sistem și provoacă hemoliză.

Componente. Reacția de fixare a complementului (CFR) este un complex reacții serologice. Pentru implementarea lui sunt necesare 5 ingrediente și anume: AG, AT și complement (primul sistem), eritrocite de oaie și ser hemolitic (al doilea sistem).

Antigenul pentru CSC poate fi culturi de diferite microorganisme ucise, lizatele acestora, componente ale bacteriilor, organe alterate patologic și normale, lipide tisulare, viruși și materiale care conțin virusuri.

Ca o completare se foloseste ser proaspat sau uscat de cobai.

Mecanism. RSK se efectuează în două faze: prima fază - incubarea unui amestec care conține trei componente ale antigenului + anticorpi + complement; Faza a 2-a (indicator) - detectarea complementului liber în amestec prin adăugarea acestuia a unui sistem hemolitic, format din eritrocite de oaie și ser hemolitic care conține anticorpi împotriva acestora. În prima fază a reacției, în timpul formării complexului antigen-anticorp, are loc legarea complementului, iar apoi în a 2-a fază nu va avea loc hemoliza eritrocitelor sensibilizate de anticorpi; reactia este pozitiva. Dacă antigenul și anticorpul nu corespund între ele (nu există antigen sau anticorp în proba de testat), complementul rămâne liber și în a 2-a fază se va alătura complexului eritrocit-anticorp antieritrocitar, determinând hemoliză; reactia este negativa.

Aplicație. RSK este utilizat pentru a diagnostica multe boli infecțioase, în special sifilisul (reacția Wasserman).

Reacția de inhibare a hemaglutinării. Mecanism. Componente. Aplicație

(RTGA) - o metodă pentru identificarea unui virus sau detectarea anticorpilor antivirali în serul sanguin al pacientului, bazată pe fenomenul absenței aglutinării eritrocitelor de către un medicament care conține un virus în prezența serului sanguin imun la acesta.

Reacția de inhibare a hemaglutinării (RTGA) pe baza blocării, suprimarea antigenelor virușilor de către anticorpii serului imunitar, drept urmare virușii își pierd capacitatea de a aglutina globulele roșii.

Se folosește RTGA pentru diagnosticul multor boli virale, ai căror agenți cauzali (gripa, rujeola, rubeola, encefalita transmisă de căpușe etc.) pot aglutina eritrocitele diferitelor animale.

Mecanism. Tiparea virusului se realizează în testul de inhibare a hemaglutinării (HITA) cu un set de seruri specifice tipului. Rezultatele reacției sunt luate în considerare de absența hemaglutinării. Subtipurile de virus A cu antigene H 0 N 1 , H 1 N 1 , H 2 N 2 , H 3 N 2 şi altele pot fi diferenţiate în RTGA cu un set de seruri omoloage specifice tipului.

reacție de precipitare. Mecanism. Componente. Modalități de setare. Aplicație

Reacția de precipitare (RP)- aceasta este formarea si precipitarea unui complex de antigen molecular solubil cu anticorpi sub forma de turbiditate, numit precipitat. Se formează prin amestecarea antigenelor și anticorpilor în cantități echivalente; un exces al unuia dintre ele reduce nivelul de formare a complexului imun.

RP puneîn eprubete (reacție de precipitare inelară), în geluri, medii nutritive etc. Sunt utilizate pe scară largă soiurile de RP într-un gel semilichid de agar sau agaroză: imunodifuzie dublă Ouchterlony, imunodifuzie radială, imunoelectroforeză etc.

Mecanism. Se efectuează cu antigene solubile coloidale transparente extrase din material patologic, obiecte de mediu sau culturi bacteriene pure. Reacția folosește seruri transparente de precipitare de diagnostic cu titruri mari de anticorpi. Titrul serului de precipitare este considerat cea mai mare diluție a antigenului, care, atunci când interacționează cu serul imunitar, determină formarea unui precipitat vizibil - turbiditate.

Reacția de precipitare inelară se pune în eprubete înguste (0,5 cm diametru), în care se adaugă 0,2-0,3 ml de ser precipitant. Apoi, cu o pipetă Pasteur, se stratifică încet 0,1-0,2 ml de soluție de antigen. Eprubetele sunt transferate cu grijă într-o „poziție verticală. Reacția se înregistrează după 1-2 minute. În cazul reacție pozitivă la limita dintre ser si antigenul de testat apare un precipitat sub forma unui inel alb. Nu sa format nici un precipitat în tuburile de control.

Reacția de neutralizare (PH)

Această reacție universală servește ca reper în evaluarea altor reacții serologice.

Principiul său este că atunci când un antigen (virus) interacționează cu anticorpi omologi, se formează un complex antigen + anticorp, ca urmare, infecțiozitatea virusului este neutralizată. Un indicator al unui virus liber (nelegat la anticorpi) este un sistem viu sensibil la virus: animale, embrioni de pui sau cultura celulara.

La instalarea reacției într-o eprubetă, se amestecă volume egale de virus și ser, amestecul se menține la temperatura corespunzătoare (4, 22 sau 37 ° C) timp de o oră sau 16-18 ore (în funcție de virus). și condițiile experimentului). Apoi, acest amestec este utilizat pentru a infecta un sistem viu sensibil la virus, pentru a monitoriza starea obiectelor vii și pentru a lua în considerare rezultatul neutralizării virusului prin absență după o perioadă adecvată:

1) moarte, dezvoltare tablou clinic boala si modificări patologiceîn organele și țesuturile animalelor de laborator;

2) moartea, modificări patologice ale membranelor, țesuturilor embrionului și absența hemaglutininelor în fluidele cavităților embrionilor de pui;

3) acțiune citopatică (CPE) sau formarea plăcii în cultura celulară.

Deoarece este necesară o anumită cantitate de anticorpi pentru a neutraliza o anumită cantitate de virus și una dintre aceste componente este încă necunoscută, PH-ul poate fi setat în două moduri:

1) la diferite doze (diluții) de ser (de obicei sub formă de diluții în serie de 2 ori) adăugați aceleași doze de virus (de obicei 100-1000 ED50). În această variantă se determină titrul de anticorpi de neutralizare a virusului din ser, al cărui indicator este diluția serului care protejează 50% dintre infectați de acțiunea virusului. sisteme biologice;

2) la diferite doze (diluții) de virus (de obicei sub formă de diluții în serie de 10 ori) adăugați aceleași doze de ser (de obicei în diluții de 1:10 sau 1:20). La setarea acestei variante de PH, pe lângă serul studiat (sau specific), se mai folosește și ser normal (negativ). În acest caz, se determină indicele de neutralizare (IN), care arată de câte ori serul imunitar (specific) sau testul reduce titrul virusului comparativ cu serul normal.

Avantajele PH sunt versatilitatea și specificitatea ridicată; dezavantaje - intensitate mare a muncii; necesitatea de a respecta cu strictețe sterilitatea materialelor, ustensilelor și instrumentelor; costul ridicat al sistemelor biologice de viață; durata relativă a biotestului și necesitatea calculelor matematice.

Reacția de inhibare a hemaglutinării (HITA)

Utilizat pe scară largă în studiul virusurilor hemaglutinante.

Se bazează pe faptul că anticorpii, la întâlnirea unui virus omolog (antigen), neutralizează nu numai activitatea sa infecțioasă, ci și hemaglutinantă, deoarece blochează receptorii virioni responsabili de hemaglutinare, formând cu aceștia un complex antigen + anticorp.

Principiul RTGA este că într-o eprubetă (godeu) se amestecă volume egale de ser sanguin și virus, iar după expunere (30-40 de minute) se adaugă eritrocite ale speciilor de animale corespunzătoare.

Celulele roșii din sânge sunt un indicator al prezenței virusului în amestec. Aglutinarea eritrocitelor indică prezența virusului în amestec, iar absența hemaglutinării indică absența acestuia, deoarece anticorpii au neutralizat complet activitatea hemaglutinantă a virusului.

RTGA poate fi instalat în două versiuni:

1) la diferite diluții de ser (de obicei de 2 ori) se adaugă aceeași doză de virus (4-8 HAU);

2) la diferite diluții ale virusului (de obicei de 2 ori) adăugați aceeași doză de ser.

Setarea RTGA conform primei opțiuni se efectuează în conformitate cu următorii pași:

Virusul este titrat în RGA și se determină titrul său de hemaglutinare;

Pregătiți și controlați doza de lucru a virusului (4 sau 8 HAU);

Ei au pus experiența principală a RTGA;

Rezultatele sunt luate în considerare.

Se evaluează hemaglutinarea în fiecare amestec în încrucișări și se determină titrul de anticorpi. Titrul de anticorpi seric este considerat cea mai mare diluție a serului care încă inhibă complet hemaglutinarea.

RGTA vă permite să rezolvați următoarele sarcini de diagnostic:

Detectați și determinați titrul de anticorpi în serul sanguin folosind un virus cunoscut;

Identificați un virus necunoscut examinându-l cu diferite seruri (anticorpi) cunoscute.

Avantajele RTGA sunt simplitatea tehnicii de setare și rezultatul rapid. Cu toate acestea, această reacție poate fi folosită numai pentru virusurile hemaglutinante.