Metode serologice de analize de sânge pentru diagnosticarea bolilor. Detectarea anticorpilor antivirali (at) în serul sanguin

O abordare mai simplă și mai accesibilă - detectarea anticorpilor antivirali (AT) în ser. Probele de sânge trebuie luate de două ori: imediat după debutul semne clinice si dupa 2~3 saptamani. Este extrem de important să examinăm exact două probe de ser. Rezultatele unui singur studiu nu pot fi considerate concludente din cauza incapacității de a lega apariția AT cu cazul de față. Este posibil ca acești anticorpi să circule după o infecție anterioară. Într-o asemenea situație, rolul studiului serului obținut în perioada de convalescență poate fi cu greu supraestimat. Prezența bolii în perioada de prelevare a primei probe este indicată de o creștere de cel puțin patru ori a titrului AT, care a fost detectată în timpul studiului celei de-a doua probe.

Metodele enumerate mai jos nu permit diferențierea anticorpilor(AT) formată în timpul bolii și care circulă după recuperare (durata acestei perioade este variabilă pentru diferite infecții). Deoarece pentru un diagnostic adecvat este necesar să se confirme o creștere semnificativă a titrurilor AT în două probe, prima probă este examinată în faza acută, iar a doua - în perioada de recuperare (după 2-3 săptămâni). Rezultatele obţinute sunt retrospective şi mai potrivite pentru anchetele epidemiologice.

RTGA detectează AT sintetizat împotriva hemaglutininelor virusurilor (de exemplu, virusul gripal). Metoda facilitează detectarea unor astfel de anticorpi (AT) în serul pacientului.

RSK- de bază metoda de serodiagnostic infecții virale (dintre disponibile). Reacția detectează IgM și IgG care fixează complementul, dar nu le diferențiază; pentru optimizarea rezultatelor obţinute, formularea reacţiei necesită anumite aptitudini ale personalului.

RECIF. Dacă este disponibilă o biopsie a țesutului infectat și sunt disponibile truse AT comerciale marcate cu fluoresceină, imunofluorescența directă poate confirma diagnosticul. Formularea reacției include incubarea țesutului studiat cu AT, îndepărtarea ulterioară a acestora și microscopia fluorescentă a probei.

Metode de imunosorbție pentru detectarea anticorpilor antivirali

Metode de imunosorbție(de exemplu, ELISA și RIA) sunt mai informative, deoarece detectează IgM și IgG separat, ceea ce vă permite să trageți anumite concluzii despre dinamica procesului infecțios sau starea de convalescență. Pentru a detecta AT, Ag cunoscut este adsorbit pe un substrat solid (de exemplu, pe pereții eprubetelor, microplăci de plastic, vase Petri) și se adaugă diferite diluții ale serului pacientului. După incubarea corespunzătoare, AT nelegate sunt îndepărtate, se adaugă antiser marcat cu enzimă împotriva Ig-ului uman, se repetă procedura de incubare și spălarea AT nelegate și se adaugă orice substrat cromogen (sensibil la acțiunea enzimei). Deoarece schimbarea culorii este proporțională cu conținutul de anticorpi specifici, este foarte posibil să se determine titrul acestora prin metoda spectrofotometrică. În diagnosticul infecției cu HIV, metoda imunoblotting a găsit cea mai răspândită utilizare.

Examenul serologic, sau, cu alte cuvinte, analiza serologică, este studiul materialelor biologice în laborator. Această analiză vă permite să stabiliți prezența bacteriilor patogene în organismul studiat sau în produsele care sunt supuse unui control de control.

Metode de diagnostic serologic

Studiul serurilor sau al altor obiecte biologice (lapte, bilă, salivă, spălări ale mucoasei intestinale, precum și copromateriale) oferă o idee destul de fiabilă a răspunsului organismului la introducerea unui agent infecțios. Trebuie remarcat faptul că utilizarea metodelor de cercetare serologică nu are doar valoare diagnostică, ci oferă informații fiabile despre nivelul de protecție a organismului, starea imunității populației și circulația diferitelor tipuri de rotavirusuri în regiunea studiată. Rezultatele anchetelor serologice pot oferi, de asemenea, informații pentru optimizarea compoziției antigenice a medicamentelor profilactice și pot fi utilizate pentru evaluarea eficacității imunologice a vaccinurilor.

Cu toate acestea, trebuie remarcat faptul că necesitatea studierii serurilor de sânge pereche luate la intervale de 1,5-2 săptămâni și disponibilitatea metodelor de diagnostic expres reduc valoarea diagnostică a reacțiilor serologice.

Prin urmare, testele serologice tradiționale - testul de fixare a complementului (CFR) și testul de inhibiție a hemaglutinării (HIT) se găsesc în timp prezent numai aplicare limitată. Cu toate acestea, simplitatea acestor metode, disponibilitatea și ieftinitatea reactivilor le fac să fie încă aplicabile în practica de laborator. Setarea RSK și RTGA se efectuează conform metodelor general acceptate.

Un exemplu de utilizare a RSK pentru studiul imunității post-vaccinare este lucrarea lui K. Midkhan (1989). La examinarea serurilor de la 116 copii cu vârsta de 5 luni, s-au observat seroconversii fiabile, conform RSK, în 44% din cazuri, iar conform rezultatelor testului de neutralizare (PH) și imunotestului enzimatic (ELISA) - în 83 și 96%, respectiv.

Cercetarea imunității

Pentru a studia imunitatea populației cu ajutorul CSC, am examinat 1246 de seruri de pacienți cu OKZ cu vârsta cuprinsă între câteva luni și 80 de ani și mai mult. S-a arătat că titrurile medii geometrice ale anticorpilor de fixare a complementului au fost cele mai mari la grupele de vârstă de 2-4 ani și peste 60 de ani, ceea ce confirmă datele noastre anterioare privind cea mai mare prevalență a infecției cu rotavirus în rândul persoanelor din aceste grupe de vârstă.

Testul rotavirusului

RTGA este utilizat în studiul infecției cu rotavirus mai des decât RSK și, de regulă, în combinație cu alte teste de laborator. Astfel, Andrade J. P. et al. a folosit RTGA, imunoblot, bloc ELISA pentru a studia anticorpii la proteinele structurale ale rotavirusului VP2, VP4, VP6 și VP7. Potrivit autorilor, la copiii cu vârste cuprinse între 2 și 4 ani, anticorpii antihemaglutinanți împotriva rotavirusurilor s-au găsit în proporție de 70-80%.

În funcție de nivelul de anticorpi la anumite proteine, conform RTGA, autorii au identificat 4 grupuri de indivizi. Grupele I și II (60%) au inclus copii cu niveluri ridicate de anticorpi împotriva VP4 și VP7 și au fost clasificați drept „imuni”. LA grupa III(4%) persoane recomandate cu nivel scăzut anticorpi la VP7 și VP6, așa-numitul „parțial imunitar”. Copiii din grupul IV (36%), la care, conform RTGA, nu au fost detectați anticorpi, au fost desemnați ca „nonimuni” și au constituit un grup de risc, deoarece printre ei este posibilă dezvoltarea infecției severe cu rotavirus. Trebuie remarcat faptul că, în această observație, indicatorii de sensibilitate ai blocului RTGA și ELISA au fost destul de comparabili.

RTGA a fost utilizat în mod repetat pentru a studia proteina structurală VP4. Studiile au arătat că activitatea sa de hemaglutinare este inhibată în mod specific de antiseruri, confirmând astfel că VP4 este hemaglutinina rotavirusurilor. Date similare au fost publicate anterior de M. Ezekiel (1995).

Astfel, lucrările prezentate arată că RSK și RTGA sunt încă utilizate în studiul infecției cu rotavirus, totuși aceste metode sunt de natură auxiliară și ar trebui duplicate prin alte teste.

Teste de neutralizare

Reacția de neutralizare se bazează pe capacitatea serurilor imune umane sau animale de a neutraliza reproducerea virusului și de a preveni astfel manifestările asociate acestui fenomen. În funcție de modelul biologic, aceste manifestări pot fi: dezvoltarea unei boli cu o clinică specifică, reproducerea și izolarea virusului, producerea de anticorpi specifici, precum și apariția unui efect citopatic sau formarea de bule atunci când folosind cultura celulară.

Modelele macrobiologice sunt utilizate în prezent cu precădere în medicina veterinară, depistarea virusurilor la om în majoritatea cazurilor se realizează pe cultură celulară, atât primară, cât și transfuzată. Metodele PH sunt împărțite în două grupe conform schemei principale de setare. Într-un grup de metode, serul nediluat este combinat cu diluții în serie ale virusului, în celălalt, diluțiile de ser sunt testate cu o doză constantă de virus. Pentru a stabili o reacție de neutralizare, este de preferat un agent patogen care provoacă un efect citopatic pronunțat sau care este reprodus intens într-un model biologic.

Cu toate acestea, rotavirusurile au, din păcate, un efect citopatic ușor, lucru demonstrat în mod convingător de cercetătorii conduși de B. Weber (1992). Un studiu pe 121 de probe de scaun de la copii cu OKI folosind metoda clasică de izolare a virusului pe celule MA-104 sub controlul CPP a evidențiat doar 4 cazuri pozitive (3,3%), în timp ce utilizarea metode moderne detectarea rotavirusurilor (ELISA, PCR, EP în PAAG) a permis creșterea acestei cifre la 54,4%. Prin urmare, pentru a crește sensibilitatea PH, sunt necesare tehnici metodologice suplimentare pentru a ajuta la vizualizarea reducerii virusului, care sunt utilizate ca: o etichetă radioactivă sau imunofluorescentă, formarea plăcii, colorarea cu imunoperoxidază etc. Trebuie remarcat faptul că însuși principiul de determinare a nivelului de anticorpi de neutralizare a virusului este identică cu metoda PH clasică, deosebindu-se de aceasta doar prin modul de rezoluție, adică prin vizualizarea activității de neutralizare a virusului a serului. În acest caz, activitatea serului este determinată de capacitatea sa de a suprima manifestările proprietăților infecțioase ale virusului.

În prezent, majoritatea studiilor folosesc două metode pentru a măsura cantitatea de anticorpi de neutralizare a virusului împotriva rotavirusului. Una dintre ele se bazează pe numărarea numărului de celule individuale infectate cu virus (metoda Plaq) care se leagă în mod specific la anticorpii fluorescenți conjugați. Într-un alt test, nivelul de neutralizare a virusului este judecat prin scăderea producției de antigen viral prin imunotestul enzimatic. Un studiu comparativ al ambelor metode a arătat o relație liniară între indicii ELISA și numărul de unități formatoare de placă pentru fiecare tulpină prototip a serotipului de rotavirus: Wa, DS-1, P, VA-70. Datele obținute facilitează determinarea diluției serului care asigură neutralizarea a 60% din virusul infecțios (titrul de anticorpi de neutralizare). S-a dovedit că titrurile de anticorpi la testarea materialelor prin ambele metode sunt aceleași și ambele teste nu diferă în ceea ce privește reproductibilitatea rezultatelor. Un avantaj al metodei care utilizează anticorpi marcați cu fluoresceină, conform autorilor, constă în obiectivitatea mai mare a rezultatelor (înregistrare automată) și mai puțină laboriozitate.

Pentru a măsura titrurile anticorpilor de neutralizare a virusului, PH-ul modificat este utilizat și prin blocarea ELISA cu anticorpi monoclonali.

• studiul intensității producției de anticorpi de neutralizare a virusului (VNA) în timpul infecției naturale și vaccinării;
• formarea de VNA la diferite proteine ​​structurale ale rotavirusurilor;
• evaluarea rolului serurilor sanguine VNA și al anticorpilor secretori ai salivei și mucoasei intestinale în protejarea împotriva infecțiilor naturale (Ward R. și colab., 1990, 1992, 1993, 1995, 1997).

În concluzie, trebuie subliniat că reacția de neutralizare în diferitele sale modificări este încă utilizată pe scară largă atât în ​​plan experimental, cât și cercetare clinicași, cu sensibilitatea și specificitatea sa ridicată, servește drept referință pentru toate celelalte metode serologice.

Analiza precipitațiilor

Testele de precipitare se bazează pe interacțiunea serului cu antigenele virale folosind procese osmotice sau sub influența unui câmp electric într-un mediu de gel sau alt tip de purtător. Una dintre aceste metode este reacția de contra imunoelectroforeză (VIEF). Autorii au examinat serurile de sânge ale adulților sănătoși și bolnavi și copiilor cu diaree cu rotavirus, precum și preparate specifice de imunoglobuline pentru prezența anticorpilor împotriva rotavirusului uman prin metoda VIEF în agaroză 7% cu adaos de polietilen glicol 4%. S-a dovedit că anticorpii împotriva RV au circulat destul de larg și au fost găsiți la adulții și copiii bolnavi la 90,2-87,7%, respectiv, precum și la 78,4% dintre copiii sănătoși sub vârsta de 1 an. Toate cele 32 de serii de imunoglobuline au conținut anticorpi la RV în titruri 1:4-1:128. Potrivit autorilor, metoda este potrivită pentru studiul imunității populației.

radioimunoprecipitare

O altă tehnică de precipitare este radioimunoprecipitarea. Autorii au folosit această metodă pentru a studia răspunsul imun la proteinele structurale și nestructurale în infecția primară cu rotavirus și au arătat că răspunsul imun a fost mai pronunțat la VP4 decât la VP7.

La studierea răspunsului imunologic seric și secretor la utilizarea unui vaccin reasortant tetravalent la nou-născuți În acest scop, a fost utilizată o tehnică de radioimunotest împreună cu ELISA și PH. S-a demonstrat că răspunsul imun în ser depinde de doza de antigen administrat; în ceea ce privește depistarea anticorpilor în salivă, autorii explică apariția acestora odată cu consumul de lapte matern.

Reacția de radioimunoprecipitare este, de asemenea, utilizată în lucrările de cercetare fine. Astfel, J. Tosser a folosit această metodă pentru a studia topologia proteinei VP6 în structura genomului și a sugerat că VP 6 este implicată în formarea canalelor interne de capside.

Alți cercetători în 1994 au folosit și metoda radioimunoprecipitării pentru a studia modificările imunologice ale infecției cu rotavirus. Autorii au arătat că în perioada acută se înregistrează în principal IgA la VP2 și VP6, în timp ce în perioada de convalescență, intensitatea producției de anticorpi secretori (IgA) nu numai la VP2, ci și la alte proteine ​​structurale și nestructurale a scăzut. . Ulterior, date similare au fost obținute folosind metoda radioimunoprecipitației. Autorii au arătat că, pe lângă VP4 și VP7, VP2, VP6 și NSP2 sunt de asemenea implicate în procesul imunologic.

Astfel, imunoprecipitarea a fost utilizată diagnostic pentru a studia răspunsul imun în infecția naturală cu rotavirus.

LA anul trecut Imunoprecipitarea a fost înlocuită cu radioimunoprecipitarea, care este utilizată pentru a evalua imunitatea post-vaccinare și post-infecție în infecția RV și pentru cercetare și dezvoltare fină.

metode de hibridizare

Metoda imunoblot este utilizată pe scară largă pentru determinarea anticorpilor la rotavirusuri. Un exemplu de utilizare a Western-blot în diagnosticul infecției cu rotavirus este lucrarea lui H. Ushijima (1989), care, folosind imunoblotting, a caracterizat specificitatea anticorpilor la proteinele structurale RV la 21 de copii cu OKZ, precum și nivelul de coproanticorpi din clasele IgA si IgG la aceste proteine.la copiii neinfectati. Autorii au emis ipoteza că imunoblotting ar putea face posibilă stabilirea diagnosticului bolii pe o singură probă de coproanticorpi fără a examina serurile de sânge pereche. Posibilitatea utilizării Western-blot pentru a determina nivelul de anticorpi la VP1, VP2, VP4, VP6 și VP7 a fost demonstrată de Pavlov I. și colab. (1991). Autorii au examinat serurile din sânge uman și animal pentru prezența anticorpilor la tulpinile de rotavirus SA-11, DS-1, Wan Ito și au concluzionat că Western blot poate fi utilizat cu succes pentru a evalua imunitatea în practica clinică.

Se crede că imunoblotul poate fi utilizat pentru a confirma diagnosticul de infecție cu rotavirus fără utilizarea serurilor pereche pentru o probă de coproanticorpi.

Împreună cu RTHA și ELISA, imunoblotul a fost folosit pentru a studia imunitatea turmei. S-a găsit un grup de indivizi neimuni la VP2, VP4, VP6 și VP7, care reprezintă un grup de risc, care necesită în primul rând protecție prin imunizare activă și pasivă (Andrade J. P. și colab., 1996).

Utilizarea imunoblot în studiul modificărilor serologice în procesul de infecție naturală cu RV este remarcată și de Begue R. și colab. (1998). Autorii au confirmat că anticorpii la VP2 și VP6 sunt cel mai adesea implicați în răspunsul imun la infecție, iar anticorpii la VP7 și VP4 sunt mai rar implicați.

Analiza imunofluorescenței

O metodă imunofluorescentă indirectă folosind seruri antispecie marcate cu fluorocrom este utilizată pentru a titra serurile de testare pe celulele infectate cu rotavirusuri. Reacția se bazează pe interacțiunea specifică a anticorpilor marcați și a unui antigen omolog, în timp ce complexul antigen-anticorp este ușor de detectat folosind un microscop fluorescent.

Folosind această metodă, autorii au efectuat un sondaj serologic pe două grupuri de indieni din America de Sud și au găsit un procent ridicat de indivizi seropozitivi în ambele grupuri: 67,8 și 77,4% prin ELISA și 45,5 și, respectiv, 56,7% prin IFM.

Într-un alt studiu privind determinarea nivelului de anticorpi împotriva grupului C RV în sângele din cordonul ombilical folosind IFM, s-a arătat că 30% dintre femeile aflate la vârsta fertilă au fost detectate cu acești anticorpi, indicând o infecție trecută.

Test imunosorbent legat Este utilizat în prezent, alături de PH, în diagnosticul serologic al infecției cu rotavirus extrem de larg. Această metodă, bazată pe utilizarea anticorpilor sau antigenilor marcați cu enzime, este cea mai potrivită și promițătoare metodă de diagnostic serologic al infecției cu rotavirus datorită ușurinței de implementare și economiei sale. Metoda face posibilă efectuarea de anchete seroepidemice în masă ale populației, evaluarea eficacității imunologice și epidemiologice a vaccinurilor, studierea rolului protector al anticorpilor de diferite clase în diferite fluide biologice ale corpului uman și, de asemenea, efectuarea diagnosticului serologic al rotavirusului. infecţie.

Numeroase studii folosind ELISA au fost efectuate de R. Azeredo (1989), care au arătat că numărul de pacienți cu OKZ cu etiologie stabilită de rotavirus a fost semnificativ mai mic decât nivelul lor de infecție conform rezultatelor unui examen serologic. Aceste date au constatat că multe cazuri clinice de infecție cu rotavirus nu sunt diagnosticate prin detectarea RV în fecale. Studii suplimentare privind prevalența infecției cu rotavirus au confirmat această presupunere. La efectuarea anchetelor seroepidemiologice, s-a constatat că 50-70% din populație avea un nivel ridicat de anticorpi, ceea ce indică circulația pe scară largă a RV în populația umană.

Oportunități și mai mari sunt deschise prin ELISA în determinarea dinamicii nivelului de anticorpi aparținând diferitelor clase de imunoglobuline. Deci, conform autorilor metodologiei din 1989, ei susțin că, în timpul procesului de vaccinare, a fost observată o creștere semnificativă a anticorpilor împotriva RV în sânge la 83-96%. Anticorpii antirotavirus din clasele IgA și IgG au fost la fel de bine detectați prin ELISA și PH prin reducerea plasmei - 67,6 și, respectiv, 70,0%. Seroconversia anticorpilor din clasa IgM a fost detectată la 53 și, respectiv, 44% dintre copii prin ELISA și, respectiv, RSC. Pe baza analizei intensității producției de anticorpi de diferite clase, autorii au concluzionat că cea mai eficientă, simplă și rapidă metodă de depistare a seroconversiilor după vaccinare este metoda de detectare a anticorpilor IgA folosind ELISA.

Această concluzie a fost confirmată și în lucrarea lui R. Bishop (1996), care a indicat că, pe baza rezultatelor unui sondaj a 68 de perechi mamă-copil diagnosticate cu infecție RV, s-a demonstrat că detectarea anticorpilor IgA folosind ELISA în materialele de scaun este cel mai sensibil marker.atât infecția exprimată clinic cât și asimptomatică. Rezultate similare la examinarea copiilor cu diaree RV severă au fost obținute de J. Kolomina în 1998.

Cu toate acestea, pentru a studia intensitatea seroconversiilor, este necesar să se studieze serurile pereche, ceea ce prelungește semnificativ procesul de diagnosticare. În același timp, este bine cunoscut faptul că apariția anticorpilor din clasa IgM este o dovadă a declanșării procesului infecțios. Conform datelor noastre, obținute în timpul examinării pacienților cu infecție cu rotavirus prin ELISA și RSK, s-a dovedit că, conform rezultatelor ELISA, toate persoanele examinate conțineau anticorpi IgM la RV în sânge, în timp ce conform RSK, doar 77% (R

În ultimii ani, odată cu realizarea posibilității de a determina anticorpi specifici genelor și serotipului, ELISA a devenit o metodă cu adevărat universală pentru studierea infecției cu rotavirus, care este utilizată:

• când se studiază producția de anticorpi din clasele IgA, M, G la proteine ​​individuale structurale și nestructurale RV;
• în evaluarea eficacităţii imunologice diferite feluri vaccinuri: atenuate, adaptate la rece, ADN, reasortant;
• la studierea producerii de anticorpi în diferite fluide biologice ale organismului în condiții de infecție naturală și în timpul imunizării.

Astfel, după cum reiese din datele prezentate, aspectele imunologice ale infecției cu rotavirus sunt studiate folosind o gamă largă de metode de laborator. Ca urmare, alegerea metodei optime de cercetare, ținând cont de rezoluția acesteia, de costurile economice și de timp, este destul de complicată și depinde de sarcinile cu care se confruntă cercetătorii, precum și de echipamentele laboratorului. Și totuși, din varietatea de metode, în opinia noastră, ar trebui evidențiate două - reacția de neutralizare în cultura celulară și imunotestul enzimatic - care oferă studiul anticorpilor la diferite clase de imunoglobuline. Posibilitatea de diagnosticare expresă a infecției cu rotavirus determină promisiunea specială a acestor metode pentru utilizare în practică largă.

Serologie(din latină ser - „ser”, logos – „știință”) este o ramură a imunologiei care studiază specificul interacțiunii anticorpilor serici cu antigenele.

Baza diagnosticului este detectarea anticorpilor specifici care se formează ca reacție la infecția organismului cu un anumit antigen. În funcție de ce anticorpi se găsesc în sânge, se face o concluzie despre natura infecției, iar cantitatea acestor anticorpi indică gradul de activitate. boală infecțioasă.

Materialul luat pentru cercetare ca parte a unui test de sânge serologic este studiat pentru și altele boli periculoase-herpes, infectii intestinale, rubeola, toxoplasmoza, chlamydia, rujeola, chlamydia. În plus, acest studiu vă permite să aprobați tipul de sânge, să determinați specificul proteinelor.

Deci, se efectuează studii serologice:

• dacă s-a pus un diagnostic preliminar și acum este necesară confirmarea acestuia. Studiul se bazează pe adăugarea antigenului adecvat în serul sanguin. Răspunsul vă permite să faceți o concluzie despre prezența sau absența bolii;
• dacă nu se poate pune un diagnostic. Ca parte a studiului, se adaugă anticorpi în sânge și se determină tipul de antigene, ceea ce face posibilă determinarea unei anumite boli;
• daca este nevoie.

Astfel, un test de sânge serologic ajută la stabilirea unui diagnostic sau prescrierea cel mai mult tratament eficient- cu timp și costuri financiare minime.

Avantajele studiilor serologice includ:

• capacitatea de a detecta microorganisme patologice în primele etape infecții;
• controlul dezvoltării bolii și al nivelului de eficacitate al terapiei;
• nu este nevoie de o pregătire specială înainte de a lua biomaterialul;
• eficienţă. Rezultatul va fi disponibil în două-trei ore, ceea ce este foarte important în tratamentul în spital;
• accesibilitatea reactivului, care permite prelevarea de probe ori de câte ori este necesar;
• fara contraindicatii.

Cum se efectuează un test serologic?

Prelevarea de sânge se efectuează din vena cubitală. Punct important- sângele nu se ia cu o seringă, ci prin gravitație - se introduce un ac într-o venă fără o seringă și se colectează până la cinci ml de sânge într-o eprubetă. Procedura se efectuează dimineața.

În funcție de reacțiile care stau la baza studiului, există mai multe tipuri de proceduri:

1. reacție de neutralizare. Se bazează pe proprietatea anticorpilor serici imunitari de a reacționa ca agent de neutralizare la microorganisme sau toxine, prevenind efectele negative ale acestora asupra organismului;
2. reacție de aglutinare. Poate fi direct sau indirect. În primul caz, vorbim despre studiul serului de sânge pentru prezența anticorpilor (microbii uciși sunt aruncați în material, iar reacția este evaluată - dacă există un precipitat sub formă de fulgi, reacția este pozitivă) , o reacție indirectă se bazează pe introducerea în material a eritrocitelor cu antigene adsorbite pe acestea (sedimentul festonat indică o reacție pozitivă);
3. reacție de precipitare. Soluția de antigen este stratificată pe serul imunitar (acționează ca un mediu lichid). Se folosește antigenul solubil. Dacă complexul antigen-anticorp precipită, reacția este considerată pozitivă;
4. reacție de complement. Domeniul de aplicare — detectarea bolilor infecțioase. Se activează complementul și se examinează reacțiile;
5. reacție cu antigeni și anticorpi marcați. Se bazează pe faptul că antigenele tisulare sau microbii, prelucrați într-un mod special, încep să emită lumină sub influența razelor UV. Metoda este utilizată pe scară largă nu numai în diagnosticarea antigenelor, ci și pentru determinarea hormonilor, enzimelor și medicamentelor.

Este necesar să vă pregătiți pentru test: în patru zile pacientul trebuie să refuze să ia medicamente pentru inimă, trebuie, de asemenea, să excludeți alcoolul în oricare dintre manifestările sale, alimentele picante și grase, dulciurile, să limitați efortul fizic și să evitați stresul.

Dacă nu respectați aceste reguli, există riscul de fals rezultat pozitiv. Înainte de a prescrie un al doilea test, medicul trebuie să afle ce a făcut pacientul cu o zi înainte de procedură și să ofere recomandări cu privire la modul de pregătire adecvată pentru examinare.

Analiza serologică: transcriere

Test de sânge serologic - o analiză care vă permite să determinați / confirmați tipul de agent infecțios, ajută specialistul să pună un diagnostic. Acesta este un ajutor indispensabil dacă medicul nu poate găsi terapie medicamentoasă, deoarece agenții cauzali ai diferitelor boli diferă în sensibilitate diferită la acțiunea anumitor medicamente și antibiotice.

După finalizarea procedurii de colectare a materialului, asistenții de laborator trec la următoarea etapă - descifrează indicatorii. Deci, dacă nu se găsesc anticorpi în sângele pacientului, se poate concluziona că nu există infecții în organism - rezultatul analizei în acest caz este pozitiv.

Dar această stare de fapt este mai degrabă o excepție de la regulă: dacă există simptome ale bolii, studiile serologice dezvăluie și dovedesc prezența unei patologii grave în organism.

În primul rând, agenții patogeni sunt găsiți în organism folosind o analiză, apoi se estimează cantitatea de anticorpi, pe baza cărora se face o concluzie despre cât de serios este dezvoltată infecția.

Testarea serologică pentru hepatită, HIV, sifilis: caracteristici

Sifilis . Atunci când testează pentru sifilis, specialiștii caută proteinele care sunt responsabile de intrare corpul uman agentul cauzal al infecției - vorbim despre treponem palid. În acest caz, serul de sânge acționează ca un material biologic.

. Hepatita virala- boli infecțioase grave, al căror pericol constă în faptul că pot trăi în organism destul de mult timp fără a se manifesta. Este posibil să se identifice boala în faza incipientă, când este mai tratabilă, prin analiza pentru markeri - markeri apar în sânge după îmbolnăvire sau introducerea vaccinului.

Trebuie să înțelegi că identificarea agentului patogen este posibilă la numai 1,5-2 luni de la infectare. Dacă analiza este efectuată de o femeie însărcinată, este posibil un rezultat fals pozitiv.

Vă recomandăm să vizualizați site-ul medical https://tabletix.ru/. Pe site veti gasi informatii utile, pareri medicale.
Dacă observați unul sau mai multe dintre simptomele enumerate mai jos, ar trebui să luați în considerare efectuarea unui test serologic:

• vărsături;
• pofta de mancare sau lipsa acestuia;
• impotenta fara cauza a organismului, surmenaj;
• ten gălbui;
• decolorarea fecalelor și a urinei.

HIV. Dacă a arătat un rezultat pozitiv, aceasta nu înseamnă că pacientul este infectat cu SIDA. Dacă infecția a avut loc recent (nu mai mult de două luni în urmă), prezența anticorpilor nu permite determinarea faptului de dezvoltare a bolii. Este programată un nou studiu.

Test de sânge serologic- cea mai importantă metodă de cercetare, al cărei scop principal este detectarea rapidă a virușilor, infecțiilor, microbilor din organism.

Acest „instrument” unic de laborator vă permite să identificați orice boală care este o consecință a suprimării imune, așa că nu fi leneș, ci faceți în mod regulat o analiză pentru a putea identifica boala la timp și a scăpa rapid de ea.

8 057

Metode indirecte de diagnosticare a sifilisului.

Pentru diagnosticul sifilisului se folosesc multe metode de cercetare, care diferă în tehnică și scop. Metodele directe au ca scop detectarea agentului patogen din materialul de testat folosind microscopie (microscopie în câmp întunecat etc.) sau PCR.

În plus față de metodele de detectare directă a treponemului palid (T. pallidum), atunci când se examinează pentru sifilis, indirect ( serologic) metode de cercetare care depistează anticorpii la agentul cauzal al sifilisului în serul sanguin și lichidul cefalorahidian. Metodele indirecte de diagnosticare a sifilisului includ teste serologice ELISA, RPHA, CSR, RIF și RIF-abs, RIBT, PCR, metoda expres, imunoblot și altele.

Metode serologice de diagnosticare a bolilor infecțioase.

Criterii de diagnostic serologic pe baza reacţiilor antigen-anticorp specifice. Antigenele (componente ale pereților celulari, flageli, capsule, ADN și toxine) acelor microorganisme care trebuie determinate reacţionează cu anticorpii conţinuţi în ser. Legarea are loc între antigeni și anticorpii corespunzători acestora, care stă la baza metodelor de diagnostic serologic. Testele serologice sunt utilizate pentru a detecta un antigen necunoscut (sursa căruia este o bacterie, virus, toxină etc.) folosind un anticorp cunoscut sau pentru a detecta un anticorp în ser folosind un antigen cunoscut.

Reacțiile serologice sunt clasificate în funcție de starea antigenului și de caracteristicile mediului în care antigenul și anticorpul interacționează, precum și în funcție de metoda de efectuare.

Pentru a efectua reacții serologice, se folosesc multe metode de laborator, cum ar fi aglutinarea, precipitarea, fixarea complementului, imunofluorescența, imunotestul enzimatic și radioimunotestul și altele. Aceste reacții permit identificarea preliminară eficientă a microorganismelor.

Serurile necesare pentru stabilirea reacțiilor serologice sunt obținute experimental, în special, sunt produse de institutele de vaccinuri și seruri și sunt oferite ca parte a truselor de diagnosticare comerciale.

Metodele serologice sunt un instrument important în diagnosticarea și tratamentul bolilor infecțioase la oameni și animale, deoarece nu numai că pot identifica agentul cauzal al bolii, ci și pot detecta anticorpi specifici la agenții patogeni corespunzători din sângele pacienților și pacienților recuperați. Metodele serologice sunt în prezent cele mai multe metode eficiente diagnostice atunci când este imposibil sau dificil să izolați agentul patogen și, relativ rar, dau rezultate fals pozitive și fals negative.

Utilizarea metodelor serologice pentru a diagnostica sifilisul

Baza metodelor serologice de laborator pentru diagnosticarea sifilisului este capacitatea organismului de a da un răspuns imun la apariția agentului patogen. Cu ajutorul reacțiilor serologice din serul (plasma) sângelui (sau lichidul cefalorahidian), sunt detectate urme ale răspunsului imun la infecție, și anume anticorpi la antigenele treponeme palide, sau antigenele înșiși.

Pentru a stabili caracterul specific al disponibilului manifestari clinice(adică că sunt o consecință a sifilisului) și, în viitor, pentru a controla dinamica procesului patologic, s-a propus un numar mare de metode de cercetare serologică. Aceste metode sunt, de asemenea, utilizate pe scară largă pentru screeningul populației.

În conformitate cu ghidurile naționale actuale și clinice instrucțiuni, în multe țări ale lumii, metode serologice avansate sunt utilizate în anchetele populației pentru identificarea pacienților cu sifilis și în stabilirea unui diagnostic clinic. Ele sunt utilizate atât în ​​prezența semnelor clinice ale bolii la pacienți, cât și în perioadele latente.

Stabilirea reacțiilor serologice este una dintre cele mai fiabile metode de diagnosticare a sifilisului. Testele serologice standardizate cu o metodă reglementată de stabilire se numesc teste serologice pentru sifilis. Având în vedere că aproape toate reacțiile serologice la sifilis în anumite condiții pot fi fals pozitive sau fals negative, acestea ar trebui puse într-un complex și, dacă este necesar, în dinamică.

Testele serologice, care sunt utilizate pentru determinarea anticorpilor din serul de sânge al pacientului, diferă unele de altele prin sensibilitate, specificitate, complexitate a setării și cost. Pe lângă metodele clasice, testele și tehnologiile imunologice sunt utilizate pentru serodiagnosticul eficient al sifilisului, care au primit un nou impuls pentru dezvoltare în secolul XXI.

Anticorpii sunt detectați prin diferite metode imunochimice (serologice), inclusiv reacții sedimentare, imunotest enzimatic, imunochimiluminiscență, teste imunocromatografice, imunoblot liniar, fluorometrie în flux, tehnologie imunocip și altele.

Serodiagnostica (un studiu care utilizează metode serologice) este utilizată pentru:

• confirmarea diagnosticului clinic de sifilis,
• diagnosticul de sifilis latent,
• monitorizarea eficacității tratamentului, ca unul dintre criteriile de vindecare a pacienților cu sifilis,
• prevenirea sifilisului (examinarea de screening a anumitor grupuri de populație în vederea identificării patologiei).

Cele mai importante proprietăți cerute de testele serologice - sensibilitate, specificitate, reproductibilitate

Criteriul decisiv pentru alegerea unei metode diagnostic de laborator este eficacitatea sa - sensibilitate, specificitate și reproductibilitate.

Sensibilitate este proporția rezultatelor pozitive la pacienți. Sensibilitatea metodei este determinată de procentul de rezultate pozitive ale studiului probelor despre care se știe că conțin markeri specifici ai agentului patogen (de exemplu, antigeni patogeni sau anticorpi împotriva acestora).

Specificitate- proporția rezultatelor negative ale testelor în pacienti sanatosi. Specificitatea metodei este determinată de procentul de rezultate negative ale studiului probelor care evident nu conțin markeri specifici ai agentului patogen. Astfel, cu cât sensibilitatea și specificitatea sunt mai mari, cu atât metoda de cercetare este mai fiabilă și fiabilă.

La important criterii de diagnostic se aplica si reproductibilitatea rezultate din examinări repetate ale acelorași probe. Trebuie remarcat faptul că, în ciuda progreselor semnificative ale tehnologiei înalte, nu există metode care să ofere sensibilitate și specificitate de 100% (absolută) în toate biotestele studiate.

În prezent, sistemele de testare, trusele și ingredientele care au mai puțin de 95% sensibilitate și specificitate la stabilirea unei reacții sunt înregistrate oficial în Rusia. Astfel, există întotdeauna posibilitatea de a obține un rezultat inadecvat.

Clasificarea testelor în funcție de tipul de antigen utilizat. Teste treponemice și non-treponemale pentru sifilis

În venerologia modernă, mai mult de o duzină de variante de reacții serologice la sifilis sunt utilizate în scopuri de diagnostic, care pot fi împărțite în diferite categorii în funcție de diferite criterii. Clasificarea se realizează în funcție de metodologia cercetării, sfera de aplicare, viteza, costul redus, cerințele pentru echipamente de laborator etc.

Reacțiile treponemale sunt teoretic mai specifice, dar dau și rezultate fals pozitive. Mai mult, ele nu permit să se facă diferența între sifilisul netratat și cel vindecat. Rezultatele reacțiilor treponemale vor fi pozitive în ambele cazuri. Reacțiile non-treponemice disting între infecțiile netratate sau recente și vindecate.

În timpul examinării, se recomandă efectuarea atât a reacțiilor treponemale, cât și a celor non-treponemale. Pentru a stabili și a confirma diagnosticul de sifilis, sunt necesare rezultate pozitive pentru ambele tipuri de teste - treponemic și non-treponemal. Prin urmare, testele non-treponemale sunt utilizate în combinație cu testele treponemale și sunt efectuate înainte, în timpul și după încheierea tratamentului la anumite intervale de timp.

1. Teste non-treponemice

Cele mai cunoscute dintre testele non-treponemice cu o interpretare vizuală a rezultatelor sunt

• RW - Reacția Wassermann cu antigene lipidice (reacție de fixare a complementului cu antigen cardiolipin, RSKk)
• Reacția Kann (nu este utilizată în prezent),
• reacția citocolică a lui Zaks-Vitebsky (nu este utilizată în prezent),
• microreacție de precipitare cu plasmă sau ser inactivat (MRP sau RMP),
• RPR (test rapid de reagină cu plasmă),
• TRUST (Test de ser neîncălzit de roșu Toluidin).

Printre testele non-treponemale, există 2 teste cu citirea microscopică a rezultatelor reacției:

1. VDRL - (Laboratorul de cercetare a bolilor venerice);

2. USR - test pentru determinarea reaginelor plasmatice active (Unheated Serum Reagins).

Reactivitatea în testele nontreponemice indică de obicei leziuni tisulare și nu este întotdeauna specifică pentru sifilis. Ușurința de implementare și costul redus le permite să fie utilizate ca reacții de screening în stabilirea unui diagnostic preliminar de sifilis.

2. Teste treponemale

Testele treponemale folosesc antigene treponemale specifice. Aceste teste sunt necesare pentru confirmarea diagnosticului (RPHA, RIT, RIF și ELISA). Sunt mai complexe și mai scumpe decât testele din Grupa 1, dar și mai specifice și mai sensibile. Detectarea anticorpilor în lichidul cefalorahidian se realizează și prin teste treponemale.

Testele tradiționale treponemale care confirmă diagnosticul de sifilis necesită echipament de laborator scump și personal cu experiență, astfel încât acestea sunt rareori efectuate în afara laboratoarelor specializate. Cu toate acestea, ele pot fi acum înlocuite cu teste treponemale simple și rapide care pot fi efectuate pe teren și folosesc sânge integral. Efectuarea acestor reacții nu necesită pregătire pe termen lung, condiții speciale pentru depozitarea reactivilor și echipamentelor.

Ieftinitatea comparativă, comoditatea și caracterul practic al reacțiilor expres treponemale atrag atenția asupra lor nu numai ca metode de confirmare a diagnosticului. Aceste reacții pot fi utilizate pentru a detecta sifilisul ca parte a îngrijirii primare. îngrijire medicală(se pot face pe teren, în aceeași unitate sanitară) sau în zone în care nu sunt disponibile laboratoare. Cu toate acestea, deoarece anticorpii la T. pallidum sunt determinați pe un număr de ani, indiferent dacă pacientul a fost tratat sau nu, reacțiile rapide treponemale nu pot fi utilizate pentru a evalua eficacitatea tratamentului și diagnostic diferentiat sifilis netratat și vindecat.

Clasificarea metodelor serologice de diagnosticare a sifilisului în funcție de tipul de anticorpi detectați

În dermatovenerologia modernă, diferite reacții serologice la sifilis sunt utilizate pentru diagnostic. Unele dintre metodele care erau relevante acum zece ani nu mai sunt folosite din cauza complexității sau lipsei de specificitate. În funcție de anticorpii detectați, metodele de diagnostic serologic al sifilisului sunt împărțite în trei grupe:

I. Reacții lipidice (reagin) - se determină anticorpi la antigenele lipidice (reagin):

1) floculare: microreacție pe sticlă cu antigene lipidice - o metodă de diagnosticare expresă (microreacții de precipitare - MRP), VDRL, CMF (test de microfloculare cu cardioolipină), RPR etc.;

2) reacția de fixare a complementului (RSK) cu antigene lipidice: reacția Wasserman (RV), metodă calitativă și cantitativă de priză, termostatică și la rece (reacția Colmer);

3) reacții sedimentare care nu sunt utilizate în prezent: reacția de precipitare Cahn, reacția citocolică Sachs-Vitebsky etc.;

II. Reacții treponemale de grup - se determină anticorpi la antigenele treponemale de grup (care fac parte din celula microbiană a treponeamelor patogene și saprofite):

1) CSC cu antigenul proteic Reiter;

2) reacție de imunofluorescență (RIF);

3) reacție de adeziune imună (RIP).

III. Reacții treponemale proteice specifice speciei - se determină anticorpi la antigenele specifice ale speciilor Treponema pallidum:

1) reacție de imobilizare a treponeamelor palide (RIT);

2) Reacția de imunofluorescență RIF-abs și variantele acesteia (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS etc.);

3) reacția de hemaglutinare indirectă a treponeamelor palide (TPHA) și modificarea acesteia TPPA.

4) imunotestul enzimatic (ELISA);

5) imunoblotting.

Utilizarea practică a testelor serologice pentru sifilis

Diferite teste serologice sunt utilizate în diferite scopuri practice.

În străinătate, în anchetele în masă ale populației și, dacă este necesar, depistarea de urgență a sifilisului, se folosesc reacții de screening non-treponemic (VDRL, RPR etc.). Diagnosticul necesită confirmare prin teste treponemale FTA-ABS, TPHA sau TPPA. În prezent, se recomandă utilizarea ELISA ca înlocuitor pentru VDRL în testele de screening. Acest lucru se datorează faptului că testul ELISA se distinge prin sensibilitate, specificitate, capacitatea de a automatiza cercetarea, precum și dezvoltarea truselor de teste de diagnostic. În plus, este fundamentată o schemă inversă a ordinii examinării pentru sifilis, atunci când sunt utilizate mai întâi testele treponemale.

Pentru a monitoriza eficacitatea terapiei și pentru a evalua activitatea infecției, se recomandă VDRL cantitativ. Un test ELISA pentru anticorpii IgM antitreponemici este utilizat ca test de confirmare/suplimentar.

În practica casnică, se utilizează un complex de reacții serologice (CSR), inclusiv o reacție de microprecipitare (RMP) cu antigen cardiolipin și CSC cu antigene cardiolipină și treponemale. Recent, în CSR se recomandă înlocuirea RSK cu ELISA sau RPHA. RIF (și modificările sale - RIF-Abs și altele), RIBT sunt de asemenea utilizate.

RIBT este utilizat ca reacție de examinare în cazurile de divergență a reacțiilor treponemale.

Abordări ale diagnosticului serologic de laborator al sifilisului în Federația Rusă

Introducerea în practică a metodelor unificate de cercetare clinică de laborator în URSS și Federația Rusă a permis mai mult progres metode de diagnostic, pentru a eficientiza activitatea laboratoarelor de diagnostic clinic, a crește productivitatea muncii, a reduce dublarea testelor de laborator și a devenit baza pentru dezvoltarea unor forme raționale de truse de reactivi gata făcute.

În 1985, în URSS, pentru a îmbunătăți diagnosticul de sifilis, reacția CSC non-treponemică cu un antigen nespecific (Wassermann) și reacțiile sedimentare (citocolice și Cana) au fost excluse din complexul de diagnostic ca fiind mai puțin sensibile și neasigurând suplimentar informație.

În schimb, ca parte a complexului de teste serologice pentru sifilis (CSR), a fost prevăzută utilizarea reacției de fixare a complementului cu antigene treponemice și cardiolipine (RSKt) și a reacției de microprecipitare cu antigen cardiolipin (RMP). Sensibilitatea mai mare și conținutul de informații al acestui complex de reacții au asigurat detectarea nu numai a reaginelor, ci și a anticorpilor antitreponemici.

1985

1. RMP cu antigen cardiolipin cu plasma sanguina si ser sanguin inactivat. Test de selecție în cazul aplicării izolate.

2. CSC cu antigene treponemale și cardiolipidice; metode calitative și cantitative de priză, termostatice și la rece;

3. Reacția de imobilizare a Treponema pallidum (RIT); metode de fixare în eprubetă și amestec;

4. Reacție de imunofluorescență (RIF) în următoarele modificări: RIF cu absorbție (RIF-abs) cu ser sanguin și sânge capilar, RIF-200, RIF cu lichid cefalorahidian întreg (RIF-c); metode calitative și cantitative de stabilire. Diagnosticul formelor latente și tardive de sifilis, recunoașterea factorilor de decizie (rezultate fals pozitive)

5. Complex de reacții serologice clasice (CSR): RSC (reacție Wasserman) cu antigene cardiolipină și treponemale + RMP. Examinarea preventivă a populației pentru sifilis, diagnosticarea tuturor formelor de sifilis, monitorizarea eficacității tratamentului, examinarea persoanelor care sunt contacte pentru sifilis.

În 2001, Ministerul Sănătății al Federației Ruse a aprobat un nou document de reglementare care reglementează procedura de efectuare a testelor diagnostice - Ordinul Ministerului Sănătății al Federației Ruse nr. 87 din 26 martie 2001 „Cu privire la îmbunătățirea diagnosticului serologic al sifilisului ".

Pentru a îmbunătăți diagnosticul de laborator al sifilisului, îmbunătățirea calității muncii și prevenirea diseminare ulterioară incidența sifilisului, se recomandă înlocuirea RSK în complexul de seroreacții (CSR) în diagnosticul sifilisului prin ELISA și TPHA ca teste de screening și confirmare, deoarece. aceste sisteme de testare sunt foarte sensibile, specifice și reproductibile.

Ordinul nr. 87 din 26 martie 2001 „Cu privire la îmbunătățirea diagnosticului serologic al sifilisului” prevede utilizarea următoarelor metode pentru diagnosticul sero-și lichidului cefalorahidian al sifilisului în Rusia:

1. RMP și analogi străini (VDRL, RPR și microreacții similare) ca teste de screening atunci când se examinează populația pentru sifilis. RMP se efectuează cu plasmă sau cu ser sanguin inactivat.
2. Imunotestul enzimatic (ELISA). Antigenul din treponema pallidum cultivată sau patogenă. Reacții de diagnosticare, inclusiv pentru diagnosticarea alcoolului. Datorită ușurinței de setare și a disponibilității sistemelor de testare comerciale, acestea pot fi utilizate ca teste de screening.
3. Reacția de hemaglutinare pasivă (RPHA). Antigenul din treponema pallidum cultivată sau patogenă. Reacții de selecție și diagnosticare.
4. Variante calitative și cantitative ale RIF (RIF-abs, RIF-c, RIF cu sânge capilar de la un deget). Antigen - treponem pal patogen al tulpinii Nichols.
5. Un complex de reacții serologice (CSR) pentru sifilis, constând dintr-o reacție de fixare a complementului (CFR) cu antigene treponemale și cardiolipine și RMP. Este posibil să înlocuiți reacția de fixare a complementului cu ELISA sau RPHA și în combinație cu RMP. CSR se referă la teste de diagnostic.
6. Reacția de imobilizare a treponemului palid (RIBT), în care treponemul patogen al tulpinii Nichols este utilizat ca antigen. RIBT-urile sunt teste diagnostice de confirmare.

Astfel, secvența examinării pacienților pentru sifilis în unitățile de asistență medicală se recomandă să fie planificată după cum urmează:

1. În timpul examinării inițiale se efectuează o reacție de selecție (screening) de microprecipitare (RMP) sau modificarea acesteia (RPR, TRUST, VDRL) în versiuni cantitative și calitative și, în cazul unui rezultat pozitiv, orice test specific treponemic de confirmare ( RPHA, ELISA, CSR, RIF, RIT);

2. După încheierea terapiei, se plasează RMP sau modificarea acestuia, iar dinamica procesului infecțios și eficacitatea terapiei sunt judecate de scăderea titrului. O confirmare a eficacității terapiei este o scădere a titrului de 4 sau mai multe ori în decurs de 1 an.

Recepție cu programare! Sâmbătă duminică.

Ce sunt testele serologice, de ce sunt efectuate, care sunt principalele metode de diagnostic serologic?

Studiile serologice sunt metode de studiere a antigenelor sau anticorpilor din materialul biologic al pacienților, pe baza anumitor reacții imune. Detectarea anticorpilor la agentul cauzal al infecției sau a antigenelor din materialul biologic face posibilă stabilirea cauzei bolii.

nu au specificitate și sensibilitate 100% în diagnosticul bolilor infecțioase. Prin urmare, rezultatele lor trebuie evaluate ținând cont tablou clinic boli. Acest lucru necesită utilizarea mai multor teste pentru a diagnostica infecția, precum și utilizarea metodelor western blot confirmarea rezultatelor metodelor de screening.

„Imunoblotting (Western blot, Western-blot) este de fapt metoda finală de verificare (confirmatoare) în lanțul de studii imunologice care vă permit să faceți o concluzie finală de laborator. Acest test este deosebit de important pentru confirmarea sau infirmarea unei boli infecțioase (de exemplu, tuse convulsivă, borelioză etc.). Western blot este de obicei necesar după detectare anticorpi pozitivi proces infecțios clasa IgG, tk. în această combinație apare o interpretare de laborator mai corectă a rezultatelor și tactici ulterioare de tratare a pacientului. Pentru Western blot se folosesc benzi speciale de nitroceluloză, pe care proteinele sunt transferate prin imunoforeză orizontală și apoi verticală, în ordinea creșterii greutății moleculare. Anticorpii serici ai pacientului interacționează cu proteinele din anumite zone ale benzii, iar apoi cursul reacției este similar cu testul imunosorbent legat de enzime (ELISA)”,- explică Candidată la științe medicale, director medical al Laboratorului SYNEVO Ucraina, Oksana Vladislavovna Nebyltsova.

Material biologic utilizat pentru testarea serologică

• Ser
• Salivă
• Materie fecale

Ce condiții sunt folosite pentru a diagnostica testele serologice?

Scopul studiilor serologice este de a stabili eficacitatea tratamentului după recuperarea pacientului, precum și de a detecta o recidivă a bolii. În plus, metodele serologice pot detecta boli precum:

• Amebiaza
• Giardioza
• Opistorhiază
• Trichineloza
• Toxocaroza
• Cisticercoza
• Echinococoza

Principalele metode utilizate în diagnosticul serologic

Reacție de imunofluorescență (RIF, metoda Koons)

Varietăți ale metodei:

Direct: microbii sau antigenele tisulare sau microbii sunt tratați cu seruri speciale cu anticorpi, precum și fluorocromi marcați care strălucesc sub lumina UV. Bacteriile strălucesc astfel sub forma unui chenar verde în jurul periferiei celulei. observate la microscop fluorescent.

Indirect: tampoanele sunt tratate cu anticorpi antimicrobieni din ser de iepure. Apoi, anticorpii care nu s-au legat de antigenele microbilor sunt spălați. Astfel, anticorpii care rămân pe microbi sunt detectați. Ca rezultat, se formează un complex de microbi + anticorpi anti-iepure + anticorpi antimicrobieni de iepure marcați cu fluorocrom. Acest complex este observat la microscop fluorescent.

Pentru a evalua rezultatele, există o scară în patru puncte, care se caracterizează prin intensitatea strălucirii de suprafață galben-verde a celulelor antigene:

Strălucire celulară foarte slabă

Strălucire slabă a periferiei celulei

+++/++++ strălucire celulară strălucitoare

Titrul de reacție este considerat a fi o diluție a serului cu un rezultat al reacției de +++ sau ++++.

Reacția de hemaglutinare indirectă (RNG)

Reacţia de hemaglutinare pasivă sau indirectă se foloseşte când diagnosticul infecțiilor cauzate de protozoare, bacterii și rickettsiae.

Tehnica constă din mai multe etape. Mai întâi, eritrocitele sunt procesate, „spălate” cu o soluție izotonică de clorură de sodiu, apoi, dacă este necesar, cu o soluție de tanin 1: 20.000, apoi sunt sensibilizate cu antigene solubile. După tratamentul cu o soluție tamponată de clorură de sodiu izotonică, antigenul este gata de utilizare. Serul se diluează în eprubete cu soluție izotonă de clorură de sodiu, după care se adaugă câte un diagnostic de eritrocite la fiecare ser diluat.

Rezultatele sunt evaluate după natura sedimentului eritrocitar:

Intensitate slabă

Intensitate medie

reacție intensă

O reacție puternic intensă

Un rezultat pozitiv este o reacție cu o reacție intensă +++ sau o reacție puternic intensă ++++, în care eritrocitele acoperă întreg fundul eprubetei.

Imunotestul enzimatic (ELISA)

Metoda are specificitate și sensibilitate ridicate, peste 90%. Principalul avantaj este posibilitatea depistarea infectieiși urmărirea dinamicii procesului, care indică nivelul de anticorpi.

Testul este utilizat pentru a diagnostica o gamă largă de infecții, inclusiv:

• infecție cu HIV
• Hepatita virala
• Infecția cu citomegalovirus
• infecție cu herpes
• Infecția cu toxoplasmă

Noi recomandări pentru o alimentație sănătoasă bazate pe noi cercetări

Antigenul sau anticorpul este fixat pe plăci solide, apoi, folosind o etichetă enzimatică, sunt detectate complexe antigen-anticorp.

ELISA are o serie de avantaje față de altele metode serologice. Reacția este cea mai sensibilă, iar în teste se folosesc reactivi universali. Analiza este rapidă, capacitatea de a studia imunoglobulinele de diferite clase. În prezent, ELISA este una dintre principalele metode de diagnostic de laborator.

Evaluarea rezultatelor ELISA se realizează automat folosind dispozitive speciale. În unele cazuri, este permisă și o prezentare vizuală a rezultatelor reacției. Fiabilitatea diagnosticului serologic depinde de organizarea controlului de laborator, constând din mai multe proceduri menite să evalueze calitatea rezultatelor.