Imunotestul enzimatic sau analiza ELISA: ce este și ce boli determină? Luis ifa ce este Anti luis ce.

ELISA sau imunotestul enzimatic se referă la cercetare serologicăși este destinat depistarii și diagnosticării microorganismelor patologice din serul sanguin.

Prin analiză, diverse clase de imunoglobuline la bacterii: IgM- în proces patologic acut, și IgGîn stadiul de recuperare, care în unele cazuri persistă pe tot parcursul vieții.

Prin imunotestul enzimatic sunt detectate boli de diferite etiologii:

De asemenea, ELISA este indicat pentru diagnosticarea sifilisului atunci când rezultatele pozitive sunt confirmate prin metoda RV și vă permite să monitorizați eficacitatea tratamentului într-un proces patologic.

Imunotestul enzimatic este prescris conform indicațiilor (dacă se suspectează infecția cu microorganisme), este obligatoriu în timpul sarcinii și înainte de operații chirurgicale pentru a detecta transportul diferitelor bacterii.

ELISA pozitiv

Un rezultat ELISA pozitiv este confirmat de prezența imunoglobulinelor IgG și IgM. Titruri detectate în sânge IgM indică întotdeauna o boalăîn stadiul progresiv, la o persoană sănătoasă, acești anticorpi sunt absenți.

Iar IgG indică o infecție anterioară sau transportul de microorganisme patogene, dintre care unele sunt considerate în cantități mici ca fiind normale. De exemplu, bacteriile streptococii și stafilococii sunt prezente în fiecare organism uman.

Sifilis

Anticorpii IgM în sifilis sunt detectați de la 2 săptămâni de la infecție și indică prezența unui episod primar, secundar sau congenital, cu tratament ei dispar după aproximativ șase luni, fără terapie - după 18 luni. Dacă ambele tipuri de imunoglobuline sunt detectate în același timp, se confirmă sifilisul în faza acută. La oamenii bolnavi Anticorpi IgG împotriva sifilisului rămâne în ser toată viața.

Hepatita virala

IgM până la hepatita virală sunt adesea detectate în perioadă de incubație bolile, înainte de apariția primelor manifestări și persistă în cursul bolii, după tratament - nu sunt determinate. Excepția este hepatita virala C, în care IgM este detectată atât în ​​stadiul activ, cât și latent sau cronic

Anticorpii IgG pentru hepatita A pot fi prezenți chiar și în oameni sanatosi, care este cauzată de o infecție sau de o scădere a imunității, iar prezența IgG la hepatita B, C și D la persoanele sănătoase nu este observată.

CMVI

CMVI este distribuit aproape peste tot și nu reprezintă o amenințare pentru sănătatea publică. Cu toate acestea, poartă un mortal pericol pentru nou-născutși făt în timpul infecției intrauterine.

Detectarea anticorpilor IgM la citomegalovirus indică infecția primară sau activarea fazei latente. Titrurile de IgG persistă la persoanele recuperate timp de 10 ani.

Herpes

Anticorpii împotriva virusului herpes la persoanele sănătoase sunt în mod normal absenți. Conținutul de IgM indică faza acută a bolii, IgG indică faza latentă (în acest caz, persoana este purtătoarea infecției). Cu conținutul de IgG la herpes, trebuie să știți că virusul poate fi activat în orice moment de la o etapă latentă la una progresivă.

Varicelă

La varicelă iar în termen de 2 ani după tratament, imunoglobulinele din clasa IgM rămân în sânge. În mod normal, la oamenii sănătoși, anticorpii împotriva varicelei nu sunt detectați.

Boli cauzate de stafilococi și streptococi

Toți oamenii au imunoglobuline la stafilococi și streptococi. Prin urmare, este posibil să se diagnosticheze un proces patologic cauzat de aceste grupuri de bacterii prin efectuarea unui imunotest cu dublu enzimă. Dacă există o creștere a titrurilor cu ELISA repetat (la o săptămână după prima), atunci analiza este considerată confirmată.

Chlamydia

Un rezultat pozitiv pentru chlamydia este indicat de detectare Titruri IgM 1:8 si mai sus si clasa IgG - 1:64și mai sus, care cresc în cursul bolii și ating valori ridicate. De exemplu, la copiii cu pneumonie cu chlamydia, titrurile cresc la 1:2000 - 1:4000. Prezența IgM indică activitatea chlamydia, la ceva timp după infecție, globulinele IgG sunt detectate în sânge.

Un imunotest enzimatic negativ este indicat de fara anticorpi IgM. IgG determinate nu sunt în toate cazurile considerate ca confirmarea unui studiu de diagnostic, ele persistă adesea câțiva ani după infecție, uneori pe viață.

după sifilis, mononucleoza infectioasa imunoglobuline IgG persistă toată viațași sunt determinate în serul sanguin. Timp de 10 ani, microorganismele CMVI, rujeola, rubeola, toxoplasmoza raman.

Titlurile la amebiază persistă de la câteva luni până la câțiva ani. Anticorpii împotriva bacteriilor de stafilococ și streptococ sunt determinați la absolut toți oamenii într-o cantitate mică.

În cazurile de mai sus, detectarea imunoglobulinelor IgG după boli anterioare ne permite să considerăm rezultatele ELISA ca negative.

Normă în timpul sarcinii

În primul trimestru de sarcină, fiecare femeie trece prin asta examen complet organism, care include imunotestul enzimatic.

Studiile privind toxoplasmoza, CMVI, chlamydia, herpesul tip 2 (genital), rubeola, ureaplasma și micoplasma sunt obligatorii, deoarece aceste boli reprezintă o amenințare serioasă pentru dezvoltarea fătului. Ele sunt capabile să pătrundă în corpul copilului, ocolind bariera placentară.

Și reprezintă un pericol deosebit în timpul primul trimestru de sarcinăși aproape întotdeauna duce la moarte fetală intrauterină și avort spontan.

Problema bolilor de mai sus este că acestea apar adesea într-un stadiu asimptomatic, fără simptome vizibile. manifestari cliniceși este posibil să le dezvăluiți numai prin imunotest enzimatic.

Detectarea titlului IgG pentru rubeolă indică o boală anterioară și este norma în timpul sarcinii. IgG la CMVI de asemenea, nu reprezintă o amenințare specială pentru făt, cu toate acestea, posibilitatea de exacerbare nu este exclusă (frecvența manifestării, aproximativ 1-2%).

O amenințare specială este prezența IgG pentru virusul herpes tip 2 sau genital (HSV2), deoarece riscul de exacerbare crește semnificativ în timpul nașterii. În perioada gestațională, incidența fazei acute apare în 0,9% din cazuri. Înfrângerea fătului de către virusul herpetic în timpul trecerii tractului genital are loc în 40% din cazuri și duce la moarte în 50%.

Cu toxoplasmoza trecută, IgM poate persista până la 2 ani după tratament. Riscul de infectare a fătului în acest caz este de 17% în primul trimestru și crește la 60% în al treilea, deoarece calea principală de infecție este transplacentară. Dezvăluit IgG la toxoplasmoză mulți experți tind să o evalueze ca pe un rezultat negativ, care practic nu reprezintă o amenințare pentru cursul sarcinii.

Este foarte important să alegeți exact acele teste, metode sau metode de diagnosticare care vor ajuta cu adevărat la stabilirea unui diagnostic precis și să nu încurce și mai mult medicul. Un test imunosorbant legat de enzime s-a impus de mult timp ca o metodă care permite nu numai să obțineți un răspuns pozitiv sau negativ la întrebare - este o persoană bolnavă de orice infecție sexuală, ci și să determine în ce stadiu de dezvoltare se află boala, și de asemenea pentru a înțelege dacă pacientul a avut o problemă similară în anamneză. ELISA pentru sifilis este astăzi unul dintre cele mai sensibile și specifice teste, în timp ce acuratețea sa este de aproximativ 90%.

Sistemele de testare care folosesc metoda imunoenzimatică sunt concepute pentru a detecta nu numai sifilisul, ci și multe alte infecții: hepatită, HIV, CMV, herpes, toxoplasmoză etc. Un test ELISA pentru sifilis vă permite să determinați anticorpii (IgG, IgA, IgM) la treponemul palid conținut în sângele unei persoane bolnave. Această metodă vă permite să vedeți interacțiunea anticorpilor cu preparate speciale care conțin antigeni care, în combinație cu anticorpi, pot forma un semn al bolii, care este clar vizibil în diferite metode de diagnostic.

Testul imunosorbant legat de enzime pentru sifilis se bazează pe metoda de interacțiune a anticorpilor detectați în sânge cu antigenul agentului infecțios. Diagnosticul va depinde de ce anticorpi au fost utilizați: pot fi detectați fie anticorpi dintr-o anumită clasă, fie în general. Pentru a diagnostica această metodă, sângele este luat pe stomacul gol dintr-o venă.

Testul de sânge ELISA pentru sifilis implică utilizarea a trei clase de imunoglobuline: G, M, A. Aceste imunoglobuline au o proprietate importantă pentru diagnosticarea sifilisului prin ELISA: sunt produse într-o secvență strict definită, datorită căreia ELISA vă permite să determinați în ce stadiu se află procesul și ce dinamică a dezvoltării acestuia:

• Imunoglobulina M din sânge arată cât timp a trecut de la infecție. Cu toate acestea, rezultatele pozitive ale prezenței sale nu înseamnă întotdeauna prezența unei boli cu transmitere sexuală: este posibil ca o persoană să fi experimentat o exacerbare a unora. boala cronica care a provocat o asemenea reacție.
• Prezența anticorpilor IgA înseamnă că a trecut cel puțin o lună de la infecție.
• Deoarece imunitatea la această boală nu este dezvoltată, un rezultat pozitiv al testului IgG poate arăta atât vârful bolii, cât și perioada de după tratament.

Ce înseamnă ELISA pentru sifilis pozitiv?

Trebuie remarcat faptul că un ELISA pozitiv pentru sifilis nu este un motiv de panică. Faptul este că această metodă vă permite să determinați numai prezența anticorpilor, dar nu și a agentului patogen. Prin urmare, dacă rezultatul ELISA pentru sifilis este pozitiv, aceasta nu este încă o bază pentru stabilirea unui diagnostic. Cu toate acestea, în lumea științifică, sistemele de testare sunt îmbunătățite zilnic, iar astăzi acest lucru înseamnă că, în majoritatea cazurilor, rezultatele analizelor pot fi încă de încredere.

Există doar două rezultate de diagnostic: „pozitiv” și „negativ”. În primul caz, datele pozitive înseamnă că pacientul are o boală într-una dintre etape sau că a finalizat recent un curs de tratament. Un rezultat negativ al unui test imunosorbent legat de enzime înseamnă fie absența bolii, fie o etapă foarte timpurie a dezvoltării acesteia.

Tabloul clinic al primului stadiu al sifilisului este reprezentat de detectarea unui șancru dur în diferite zone.

Primele simptome ale sifilisului apar la 3-5 săptămâni după infectare. Până în acest moment, boala continuă fără manifestări externe.

Foarte des, după actul sexual neprotejat, o persoană care suspectează sifilis, HIV sau hepatită.

Recenzii și comentarii

Soțul a fost testat pentru sifilis, ELISA pentru sifilis - pozitiv, RMP pentru sifilis - negativ. Și ce înseamnă asta?

În timpul sarcinii (perioada a fost de 37 de săptămâni), scorul ELISA a fost pozitiv 2,1. Dupa nastere am facut analize de 2 ori - totul a iesit negativ. După 6 luni, a trecut din nou, ELISA - pozitiv, CP=1,9 (IgM+IgG). Ce înseamnă.

Salut! Ce înseamnă: un test de sânge pentru sifilis ELISA (total at.) este pozitiv?

Vă rog să-mi spuneți ce înseamnă rmp1+, rpga 1+ dacă în total este negativ! Mulțumesc anticipat.

ELISA este fals pozitiv!

Lasă o recenzie sau un comentariu

ULTIMELE PUBLICAȚII

ȘTIRI VENEROLOGICE

Balanopostita

Sifilis

Herpes

Contracepția

Test de sânge ELISA

Pentru o evaluare cuprinzătoare a stării corpului (în special, a funcțiilor sale de protecție), este prescris un test imunosorbent legat de enzime (ELISA). Testul de sânge ELISA se efectuează pentru a diagnostica patologiile infecțioase, autoimune, hematologice, imunodeficiențe primare și secundare. În acest articol, ne propunem să luăm în considerare mai detaliat ce este un test de sânge ELISA, precum și ce indicații există pentru implementarea acestuia.

Indicații pentru numirea unui test de sânge prin ELISA și principiul acțiunii sale

După cum am observat deja, un test de sânge ELISA este un test de laborator prin care se determină antigenele sau anticorpii într-o probă de sânge. Această analiză este utilizată pentru a detecta nivelul de hormoni, complexe imunologice și imunoglobuline. Există următoarele indicații pentru livrarea unei analize ELISA:

• Diagnosticul alergiei.
• Diagnosticul bolilor de origine virală - virusul Epstein-Barr, herpesul, hepatita, citomegalovirusul.
• Diagnosticul infecțiilor cu transmitere sexuală - micoplasmă, ureaplasmă, sifilis, trichomonas, chlamydia.
• Definiţia immunodeficiency.
• Diagnosticarea patologiilor oncologice.
• Evaluarea eficacității terapiei.
• Determinarea nivelului hormonal.
• Examen preoperator complet.

Principiul de acțiune al unui imunotest enzimatic se bazează pe un test de sânge pentru prezența imunoglobulinelor (anticorpi proteici specifici). Imunoglobulinele sunt produse de sistemul imunitar atunci când antigenele (microorganisme străine) pătrund în corpul uman. Aceste molecule imune se leagă de diverși agenți infecțioși și îi neutralizează. O caracteristică distinctivă importantă pe care o posedă imunoglobulinele este specificitatea lor. Datorită acestor caracteristici, ei pot forma un complex antigen-anticorp prin legarea la un antigen specific. În timpul testului de sânge ELISA, acest complex este determinat cantitativ și calitativ.

Pentru acest studiu folosit adesea sânge uman. Cu toate acestea, ca material pentru analiză, puteți lua conținutul corpului vitros, lichidul amniotic, lichidul cefalorahidian. Proba de sânge este de obicei luată din vena cubitală a pacientului. Se recomanda donarea sangelui pe stomacul gol (trebuie sa treaca cel putin 12 ore de la ultima masa). Dacă pacientul ia medicamente trebuie raportate medicului, deoarece unele dintre ele pot afecta rezultatul analizei. De asemenea, fiabilitatea rezultatelor testelor este afectată de consumul de droguri și alcool.

Descifrarea unui test de sânge pentru ELISA

Forma acestei analize indică de obicei un rezultat negativ (-) sau pozitiv (+) al calculului fiecărei clase de imunoglobuline.

Ne propunem să luăm în considerare interpretarea decodării probabile a unui test de sânge pentru ELISA.

• IgG, IgA nu sunt detectate și rezultatul IgM este negativ - recuperare completă.
• Rezultatul IgM, IgA, IgG este negativ - nu există imunitate la infecție.
• Rezultatul IgG, IgA pozitiv și negativ, precum și rezultatul IgM pozitiv- prezența infecției acute.
• Rezultat IgG pozitiv și rezultat IgA și IgM negativ - imunitate post-vaccinare sau post-infecție.
• Un rezultat pozitiv sau negativ IgG, IgA și IgM negativ este o infecție cronică.
• Rezultatul IgG, IgM, IgA este pozitiv - exacerbarea patologiei infecțioase cronice.

În imunotestul enzimatic, pe lângă clarificarea claselor de anticorpi, indicatorii lor cantitativi sunt indicați în transcriere. Cu toate acestea, doar medicul curant oferă o explicație extinsă a acestora.

Avantajele și dezavantajele acestui studiu

• Cost relativ mic.
• Ușurință în utilizare.
• Posibilitate de diagnosticare stadiu timpuriu boala suspectata.
• Precizie relativ mare a datelor obținute.
• O perioadă scurtă de timp necesară pentru a obține rezultatul studiului.
• Capacitatea de a urmări dinamica dezvoltării procesului infecțios în organism.
• Nivel ridicat de unificare, ceea ce face posibilă efectuarea de anchete în masă.
• Automatizarea tuturor etapelor cercetării.

Dezavantajul unui test de sânge ELISA este că poate, în cazuri rare, să dea rezultate fals pozitive sau fals negative. De asemenea, în timpul studiului, pe lângă erorile tehnice, cauza rezultatelor false la un pacient poate fi un factor reumatoid, prezența boli cronice(în care se produc anticorpi), anumite medicamente preparate medicale, tulburări metabolice.

• Giardioza.
• ascariaza.
• Cisticercoza.
• Amebiaza.
• Trichineloza - studiul se efectuează de mai multe ori, la 4-12 săptămâni după infectare, se determină nivelul maxim de anticorpi.
• Teniaza.
• Opistorhiază - efectuează diagnostic diferențial între formele acute și cronice ale bolii.
• Toxoplasmoza.
• Fascioliaza - în stadiul acut al bolii, se determină prezența anticorpilor.
• Leishmanioza cutanată sau viscerală.

La utilizarea materialelor de pe site, referința activă este obligatorie.

Informațiile furnizate pe site-ul nostru nu trebuie utilizate pentru autodiagnosticare și tratament și nu pot înlocui consultarea unui medic. Avertizăm despre prezența contraindicațiilor. Este necesară consultarea de specialitate.

Ce analize de sânge se fac pentru sifilis: RW, RPHA, ELISA, VDRL, RPR, RIBT, decodificarea rezultatelor testelor

Sifilisul este o boală infecțioasă cauzată de spirocheta Treponema pallidum, predispusă la progresie. curs cronic, cu o periodizare clară a simptomelor clinice.

Predominanța transmiterii sexuale asupra contactului și transplacentară pune această boală într-o serie de boli cu transmitere sexuală (ITS, ITS). Pe lângă aceste metode de transmitere a infecției, calea artificială (din latinescul „artificio” – creat artificial) joacă un rol deosebit.

Este tipic pentru institutii medicale, implementat în principal într-un cadru spitalicesc. Infecția apare în timpul transfuziilor de sânge, diverse operatii chirurgicale, metode de diagnostic invazive.

În ciuda carantinei sângelui donat, problema detectării sifilisului la donatori este diferite etape boala este încă prezentă.

Prin urmare, măsurile de diagnosticare pentru sifilis necesită standardizare, introducerea de noi metode sensibile și informative de identificare, precum și reducerea la minimum a erorilor și interpretarea greșită a rezultatelor testelor.

Clasificarea metodelor de diagnostic de laborator

Diagnosticul sifilisului are unele caracteristici și diferă de diagnosticul altor infecții bacteriene. Structura complexă și proprietățile antigenice ale treponemului palid provoacă erori în interpretarea rezultatelor reacții serologice.

Un test de sânge pentru sifilis este oferit la 3 grupuri principale de pacienți:

1. 1 Screening și examinare medicală profilactică a grupurilor de populație (inclusiv sarcina, înregistrarea la clinica prenatală, angajarea și înregistrarea unei cărți medicale etc.).
2. 2 Screening în grupuri de risc (sex neprotejat cu o persoană infectată cu sifilis, persoane după contact sexual forțat, infectată cu HIV și așa mai departe).
3. 3 Persoane cu simptome sau suspectate de a avea o infecție sifilitică.

Toate metode de laboratorîmpărțit condiționat în direct și indirect.

Metode directe

1. 1 Identificarea Treponema pallidum în câmp întunecat (microscopie în câmp întunecat).
2. 2 Infectarea animalelor de experiment (cultivarea la animale de laborator).
3. 3 PCR (reacție în lanț a polimerazei).
4. 4 Sondă ADN sau hibridizare a acidului nucleic.

Metode indirecte

Reacțiile serologice sunt metode diagnostic de laborator bazat pe detectarea anticorpilor (abreviați ca AT) la antigenele treponemului palid (abreviați ca AG). Ele sunt esențiale pentru confirmarea diagnosticului.

1. 1 Teste non-treponemice:
   • Reacția Wasserman (RSK);
   • Reacția de microprecipitare (MR, RMP) și analogii săi, care sunt dați mai jos;
   • Test rapid de reagină în plasmă (RPR, RPR);
   • Testare cu toluidină roșie și ser (TRUST);
   • Test non-treponemic al Laboratorului pentru Studiul Bolilor cu Transmitere Sexuală - VDRL.
2. 2 teste treponemale:
   • R-tion de imobilizare a Treponema pallidum - RIBT / RIT;
   • R-țiunea imunofluorescenței - RIF, FTA (diluția serurilor RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
   • R-țiunea hemaglutinării pasive (RPHA, TRPGA, TPHA);
   • ELISA (ELISA, EIA);
   • Imunoblotting.

Figura 1 - Algoritm de serodiagnostic sifilis

Metode histomorfologice

Aceste metode se reduc la identificarea caracteristicilor histomorfologiei manifestărilor sifilitice. Se acordă atenție subtilităților structurii șancrului dur. In orice caz, diagnostic diferentiat infecția folosind histologie este foarte dificilă. Histomorfologia este utilizată cu alte teste de laborator și clinice.

Microscopia în câmp întunecat al Treponema pallidum

Această metodă se bazează pe detectarea directă a treponemului palid în materialul studiat folosind un microscop și dispozitive speciale (cel mai adesea descărcarea de eroziuni și ulcere, mai rar lichidul cefalorahidian și alte substraturi).

Cu ajutorul scarificării, răzuirii, stoarcerii din eroziuni și defecte ulcerative, se obține exudat, apoi preparatul preparat este examinat la microscop.

De obicei, treponeamele palide sunt detectate în preparatul obținut din șancru, din focarele de sifilis secundar proaspăt, secundar recurent, precum și punctate ale ganglionilor limfatici, placentă.

Pe baza fenomenului de strălucire a particulelor mici într-un câmp întunecat atunci când este lovit de un fascicul de lumină (fenomenul Tyndall), metoda vă permite perfect să diferențiați agentul cauzal al sifilisului de alte treponeme pe baza diferențelor morfologice și a diferențelor de modalități. bacteria se mișcă.

Pentru microscopie, se folosește un condensator special cu câmp întunecat de rezoluție optică corespunzătoare. Medicamentul este obținut prin metoda picăturii zdrobite (o picătură de material este aplicată pe o lamă de sticlă curată, fără grăsimi și acoperită cu o lamă foarte subțire).

Uleiul de imersie este aruncat pe lamela. Prin rotirea tubului și rotirea lentilei de mărire, se reglează iluminarea dorită.

În câmpul întunecat al microscopului, celulele sanguine sunt detectate, celule epitelialeși agentul cauzal al sifilisului. Treponemul palid arată ca o spirală, foarte subțire, radiind o culoare argintie, cu mișcări line.

Figura 2 - Microscopia câmpului întunecat ca modalitate de a vizualiza treponemul palid în materialul studiat. Sursa imaginii - CDC

Treponema pallidum trebuie distins de alte treponeame, inclusiv de Tr. refringens, care poate fi găsit în orofaringe și mucoasa genitală. Această bacterie face mișcări haotice, are bucle largi și asimetrice, destul de grosiere. În plus, Treponema pallidum se distinge de Tr. Microdentium, Tr. Buccalis si Tr. vincenti.

Vizualizarea bacteriilor într-un câmp întunecat este uneori completată de o reacție de fluorescență. Pentru aceasta, la materialul nativ se adaugă anticorpi antitreponemici marcați cu un colorant fluorescent. Aceasta formează un complex numit antigen-anticorp (abreviat AG-AT), care este obiectul de studiu folosind un microscop fluorescent.

Metoda reacției în lanț a polimerazei (PCR).

PCR, dezvoltată în 1991 pentru a detecta molecula de acid dezoxiribonucleic (ADN) din treponema pallidum, este foarte sensibilă și specifică, permițând detectarea fragmentelor de ADN ale agentului patogen.

Această analiză se bazează pe copierea unor secțiuni scurte de ADN de spirochete pallidum, care satisface parametrii specificați și este prezent în probă. Toate acestea se fac în condiții artificiale (in vitro). Reacția se realizează într-un dispozitiv - un amplificator, care asigură periodizarea ciclurilor de temperatură. Are loc răcirea, urmată de încălzirea eprubetelor cu o eroare de 0,1˚С.

Șablonul ADN este încălzit timp de 2 minute la o temperatură de 92-98˚С ( Temperatura maxima folosit dacă polimeraza este termostabilă). Când sunt încălzite, firele de ADN diverg din cauza ruperii legăturilor de hidrogen dintre ele. în etapa de recoacere, temperatura de reacţie este coborâtă pentru a lega primerul de matriţa monocatenară.

Coacerea durează aproximativ 30 de secunde, timp în care sunt sintetizate sute de nucleotide. Moleculele nou sintetizate sunt copiate de polimerază, ca urmare, fragmentele specifice de acid dezoxiribonucleic cresc de multe ori. Detectarea ulterioară a fragmentelor se realizează folosind electroforeza pe gel de agar.

Diagnosticul PCR al sifilisului este încă de natură experimentală, dar este justificat atunci când este detectată o infecție congenitală, în cazuri dificile de diagnostic, sau cu un conținut minim de treponem palid în materialul de testat.

Hibridarea ADN-ului

Hibridizarea ADN-ului se realizează in vitro și se bazează pe conectarea completă sau parțială a două molecule de ADN monocatenar într-o moleculă. În cazul unei potriviri complete de fragmente complementare, unirea este ușoară. Dacă potrivirea complementară este parțială, atunci asocierea lanțurilor de ADN are loc lent. Pe baza timpului fuziunii în lanț, se poate estima gradul de complementaritate.

Când ADN-ul este încălzit într-o soluție tampon, legăturile de hidrogen sunt rupte de baze azotate care sunt complementare, ca urmare, lanțurile de ADN diverg. În continuare, se obține un preparat din doi acizi dezoxiribonucleici denaturați. La răcire, regiunile monocatenare se refac. Se formează un așa-numit hibrid ADN.

Metoda face posibilă estimarea și analiza vitezei de recoacere, ținând cont de caracteristicile (asemănări și diferențe) ale ADN-ului între specii sau în cadrul unei specii.

Utilizarea unei sonde ADN constă în hibridizarea unui fragment de ADN marcat cu o regiune ADN specifică pentru a identifica secvențe de nucleotide complementare. Un grup de atomi nesaturați (cromofori) sau izotopi radioactivi este utilizat pentru a marca sonda.

Sonda ADN este utilizată pentru detectarea heterogenă și omogenă a acizilor nucleici. Rolul sondei este de a determina zonele în care a avut loc fuziunea țintă-sondă. Detectarea într-un sistem omogen are avantajul de a putea urmări hibridizarea moleculelor de ADN în timp real.

Esența metodei se reduce la denaturarea și renaturarea ADN-ului (reunificarea lanțurilor de ADN). Procesul de renaturare a acidului nucleic și a sondei ADN se încheie cu formarea unui „hibrid”.

Secvențele specifice de acid nucleic hibridizează cu o sondă ADN și astfel sunt detectate și permit estimarea cantității de ADN din materialul de testat.

Infecția animalelor de laborator

Sensibilitatea ridicată a iepurilor la Treponema pallidum (aproximativ 99,9%) le permite să fie utilizate în diagnosticul infecției sifilitice.

Infectarea iepurilor se realizează în centrele de cercetare și reprezintă „standardul de aur” pentru evaluarea sensibilității altor metode.

Să revenim la testele treponemale și non-treponemale, deoarece sunt folosite cel mai des. Luați în considerare avantajele și dezavantajele acestora, precum și erorile în interpretarea rezultatelor.

Teste non-treponemice

Acestea sunt teste de stabilit anticorpi IgGși IgM la antigenul cardiolipin standardizat. Lor dezavantaj semnificativ are o specificitate relativ scăzută.

Costul redus și ușurința de implementare fac posibilă clasificarea acestor teste ca teste diagnostice de screening necesare pentru stabilirea unui diagnostic preliminar și screening în rândul populației.

Este vorba despre teste non-treponemice care se dau la înregistrarea unei cărți medicale, aplicarea pentru un loc de muncă, înregistrarea într-o clinică prenatală.

1. 1 Sensibilitate minimă în stadiul de sifilis primar - 70%;
2. 2 Sensibilitate minimă în stadiul de sifilis tardiv - 30%;
3. 3 Posibilitatea rezultatelor fals-negative și fals-pozitive;
4. 4 Complexitatea implementării RSC.

1. 1 Cost relativ scăzut al producției de testare;
2. 2 Obțineți un răspuns rapid;
3. 3 Posibilitatea de aplicare a acestora pentru screening.

Obținerea de probe fals pozitive sau slab pozitive este posibilă în următoarele cazuri:

1. 1 Încălcarea tehnologiei de execuție, la blocarea complexului AG-AT.
2. 2 Pacientul are boli autoimune (artrita reumatoidă, reumatism, sclerodermie, lupus eritematos sistemic, sarcoidoză etc.).
3. 3 Neoplasme maligne.
4. 4 Infecții virale și bacteriene.
5. 5 Boli endocrine ( tiroidita autoimună, Diabet).
6. 6 Sarcina.
7. 7 Consumul de alcool.
8. 8 Consumul de alimente grase.
9. 9 bătrânețe.

După cum puteți vedea din listă, există suficiente motive pentru un rezultat incorect. Prin urmare, trebuie tratat cu mare prudență. Să luăm în considerare încă două mostre împreună cu RSC. Aceasta este o reacție de microprecipitare și VDLR (modificarea sa).

Reacția de fixare a complementului (RSK, Wasserman, RW)

Acesta este un test bazat pe capacitatea complementului de a se lega de complecși AG-AT. Complexul rezultat este identificat folosind un sistem hemolitic. Antigenul cardiolipin crește semnificativ sensibilitatea probei.

Sensibilă este reacția Colmer, care constă în efectuarea la diferite condiții de temperatură. Astfel, prima fază a reacției Colmer are loc la o temperatură de 20˚С timp de o jumătate de oră, a doua fază la o temperatură de 4-8˚С timp de 20 de ore. În acest timp, are loc legarea complementului.

Când se efectuează RSK, este posibil să se obțină rezultate puternic pozitive. Motivul este probabil un titru mare de anticorpi în serul nediluat. În acest caz, probele sunt plasate cu doze descrescătoare.

Pentru a diferenția etapele sifilisului și a evalua eficacitatea tratamentului antisifilitic, se determină cantitatea de anticorpi din ser.

Pozitivitatea probei este evaluată prin încrucișări; de asemenea, în reacțiile Wasserman, Colmer și Cann, este indicată diluția serului.

Reacția de microprecipitare

Întrucât complexitatea efectuării testelor de mai sus este mare, a fost dezvoltată o metodă accelerată pentru serodiagnosticul sifilisului, așa-numita metodă expresă, reacția de microprecipitare (abreviată MR, RMP), pentru largimea de acoperire a examinărilor medicale ale diferitelor grupuri de populație. .

Se efectuează cu antigen cardiolipin și excipienți. Avantajul său este colectarea de sânge periferic pentru cercetare. Acest lucru accelerează semnificativ atât tehnica în sine, cât și munca asistenților de laborator.

Figura 2 - Reacția de microprecipitare (schemă)

RM necesită plasmă sau ser inactivat al pacientului (acestea conțin anticorpi). Apoi, plasma este plasată în godeurile marcate. Apoi, se adaugă o picătură de antigen cardiolipină la materialul de testat, se amestecă și se agită. Ca urmare, în serul persoanei infectate apar fulgi caracteristici, cu intensitate variabilă.

Acesta este un test de calitate. Cuantificarea folosește 10 diluții de ser plasate în 10 godeuri marcate corespunzător. Cu MR calitativă, răspunsul este indicat sub formă de încrucișări (plus) sau minus, cu MR cantitativă, se indică titrul de anticorpi (1:2, 1:4 și așa mai departe).

Prezența fulgilor este privită ca un răspuns pozitiv sau slab pozitiv. Apariția unui floculat este posibilă și în absența unei boli, prin urmare, evaluarea finală a rezultatului obținut se efectuează după un studiu de control sau alte reacții (RIBT, RIF, ELISA, RPHA).

Metoda recomandată de Organizația Mondială a Sănătății pentru stabilirea unei reacții cu un antigen de natură lipoid (AH) este pe bună dreptate considerată cea mai bună dintre celelalte teste standard non-treponemale. Dezvoltat în SUA, Georgia în laboratorul de boli venerice (Veneral Diseases Research Laboratories).

Abrevierea instituției a servit drept nume pentru eșantion - VDRL. VDRL este o modificare a MP. Serul de la un pacient cu sifilis este inactivat și plasat pe o lamă de sticlă. Antigenul folosit este format din cardiolipină, colesterol și lecitină în diferite procente. Răspunsul este înregistrat aproape imediat.

Flocularea distinctă are loc în prezența anticorpilor în ser. Serul devine reactiv la 4 săptămâni după infecție. Pentru a evalua cantitatea de anticorpi, serul este prediluat exponențial.

1. 1 sensibilitate relativ mare;
2. 2 specificitate relativ mare;
3. 3 ușurința de implementare;
4. 4 cost redus de reactivi;
5. 5 obțineți un răspuns rapid.

Dezavantajul VDRL este rata relativ mare de fals pozitive.

Cauzele lor sunt toate aceleași boli enumerate mai sus.

Testele treponemale se efectuează cu antigene specifice Treponema pallidum. Sunt necesare si obligatorii pentru stabilirea diagnosticului final. Aceasta este o reacție de imunofluorescență (RIF), reacție de hemaglutinare indirectă (IPHA), imunotest enzimatic (ELISA) etc.

După rezultat pozitiv test non-treponemic (RPR, MP, VDRL), trebuie efectuate întotdeauna teste treponemice (mai des o combinație - RPHA, ELISA, RIF).

Testele treponemale sunt mai dificil de efectuat decât testele rapide și costă mai mulți bani.

Această reacție (abreviată ca RIF) este utilizată pentru a diagnostica sifilisul, inclusiv formele latente, și pentru a verifica din nou probele pozitive și fals pozitive.

RIF se bazează pe strălucirea anticorpilor marcați atunci când sunt combinate cu un complex antigen-anticorp sub o lampă de cuarț. Metoda a început să fie utilizată în anii 60 și s-a remarcat prin ușurința sa de implementare și specificitatea ridicată (care este ușor inferioară RIBT).

Are mai multe modificări: RIF-10, RIF-200 și RIF-abs.

Cel mai sensibil RIF în diluție este de 10 ori, iar restul sunt mai specifice. RIF se realizează în două etape. Serul sanguin al pacientului este adăugat la AG. Se formează un complex AG-AT, care este investigat în faza următoare. Complexul marcat cu fluorocrom este apoi identificat prin microscopie. Dacă nu se observă strălucire, aceasta indică absența anticorpilor specifici în serul sanguin.

RIF-200 este cea mai valoroasă dintre toate diluțiile. Metoda este destinată diagnosticului diferite forme sifilis, în special sifilis latent, și verificarea încrucișată a probelor pozitive.

Reacția de imobilizare a Treponema pallidum (abreviat RIBT, RIT) este unul dintre testele serologice complexe care necesită efort și costuri financiare semnificative. RIBT este folosit din ce în ce mai puțin, dar relevanța sa rămâne în diagnosticul sifilisului latent.

Are o mare importanță în recunoașterea rezultatelor fals pozitive la gravide și se bazează pe imobilizarea bacteriilor în prezența imobilizinelor - anticorpi tardivi.

Rezultatul este evaluat pe procentul (%) de treponem imobilizat folosind un tabel special:

1. 1 De la 0 la 20 - test negativ.
2. 2 De la 21 la 50 - test slab pozitiv.
3. 3 Din 50 reacție prepozitivă.

Rezultate fals pozitive sunt posibile și cu RIBT. Astfel, un răspuns incorect este posibil cu infecția cu trepanematoză tropicală, precum și cu tuberculoza, ciroza hepatică, sarcoidoza și pacienții senili.

Acest test de sânge pentru sifilis se numește test de hemaglutinare pasivă (abreviat ca sânge pentru TPHA, TPHA).

Antigenul pentru TPHA este preparat din eritrocite de berbec acoperite cu fragmente de treponeme palide (obținute de la iepuri infectați (vezi Figura 4)). Pentru analiză se utilizează sânge venos (plasmă sau ser inactivat) al pacientului.

Când antigenul este adăugat în serul unui pacient cu sifilis, se formează un complex AG-AT, care duce la aglutinarea globulelor roșii. aglutinarea este determinată subiectiv de un asistent de laborator.

Figura 3 - Schema RPHA (reacție de hemaglutinare pasivă)

Proba este evaluată ca pozitivă atunci când apar aglutinate de culoare roz uniformă. Culoarea precipitatului în roșu indică depunerea eritrocitelor. RPHA este foarte sensibil și foarte specific.

Reacția de microhemaglutinare

Este o versiune simplificată a RPGA. Diferă de proba descrisă mai sus prin faptul că are mai puțin antigen, diluant și ser de sânge pentru a efectua reacția. Proba poate fi evaluată la 4 ore după incubarea serului. Este utilizat în depistarea și examenele de masă pentru sifilis.

Test imunosorbant legat

Testul imunosorbent legat de enzime (abreviat ELISA) se bazează pe o reacție specifică antigen-anticorp. Material biologic (ser sanguin al pacientului, lichid cefalorahidian) este introdus în godeuri, pe suprafața solidă a cărora sunt fixați antigenele treponemului palid. Materialul de testat este incubat, apoi anticorpii care nu s-au legat de antigeni sunt spălați (vezi Figura 5).

Identificarea complexului rezultat se realizează în stadiul de fermentație folosind ser imun marcat cu enzima. În timpul unei reacții chimice, enzima colorează complexele rezultate. Intensitatea colorării depinde de cantitatea de anticorpi specifici din sângele pacientului și este înregistrată de un spectrofotometru.

Figura 4 - Schema ELISA (imunotest enzimatic)

Sensibilitatea ELISA este mai mare de 95%. Metoda este utilizată într-un mod automat pentru studierea grupelor de populație decretate: donatori, gravide și altele, pentru a clarifica diagnosticul în cazul testelor netreponemice pozitive și fals pozitive.

Imunoblotting

Imunoblotting este o metodă extrem de sensibilă, o modificare a unui ELISA simplu. Reacția se bazează pe electroforeză cu separarea antigenelor treponeme palide.

Imunodeterminanții separați sunt transferați pe hârtie de nitroceluloză și prezentați în ELISA. Serul este apoi incubat și anticorpii nelegați sunt spălați. Materialul rezultat este tratat cu imunoglobuline marcate cu enzime (IgM sau IgG).

Evaluarea clinică a rezultatelor diagnosticului de laborator al sifilisului

În tabelul 1 de mai jos am prezentat rezultatele posibile ale analizelor și interpretarea acestora. După cum puteți vedea în tabel, principala valoare în descifrare este evaluarea cuprinzătoare a testelor.

Tabelul 1 - Descifrarea rezultatelor reacțiilor serologice (analize de sânge pentru sifilis). Faceți clic pe tabel pentru a vizualiza

Reactivitatea testelor este evaluată și prin „încrucișări”:

1. 1 Răspunsul maxim (test puternic pozitiv) este indicat prin 4 încrucișări.
2. 2 O probă pozitivă este indicată prin 3 încrucișări.
3. 3 O reacție slab pozitivă este indicată de două încrucișări.
4. 4 O cruce indică un rezultat dubios și negativ.
5. 5 Un răspuns negativ este marcat cu semnul minus.

Problema optimizării diagnosticului de laborator al sifilisului nu și-a pierdut actualitatea până în prezent. Metode moderne diagnosticele, în ciuda dorinței oamenilor de știință de a aduce diagnosticul la cea mai mare sensibilitate și specificitate posibile, necesită o verificare de control și o abordare individuală.

O caracteristică a infecției sifilitice este fenomenul de serorerezistență, care nu a primit o explicație științifică. Diagnosticul se pune după o examinare completă a pacientului prin metode epidemiologice, clinice, de laborator.

Pe fondul dezvoltării economice și tehnice a medicinei, există progrese și în dezvoltarea de noi criterii de diagnosticare a sifilisului. Toate acestea vă vor permite să tratați rapid, cu succes și cu acuratețe pacienții.

1. 1 RECOMANDĂRI CLINICE FEDERALE PENTRU MANAGEMENTUL PACIENȚILOR CU SIFILIS. SOCIETATEA RUSĂ DE DERMATOVENEROLOGI ȘI COSMETOLOGI. Moscova 2013;
2. 2 ORDINUL MINISTERULUI SĂNĂTĂȚII AL FEDERAȚIA RUSĂ din 26 martie 2001 N 87 „PRIVĂ ÎMBUNĂTĂȚIREA DIAGNOSTICULUI SEROLOGIC SIFILISUL”;
3. 3 Sifilis. Pranatharthi Haran Chandrasekar, MBBS, MD Profesor, șef de boli infecțioase, Departamentul de Medicină Internă, Wayne State University School of Medicine. Medsacape.com;
4. Ghid pentru tratarea bolilor cu transmitere sexuală (CDC).

(link la articolul 3 din acest dosar), permițând evaluarea capacității de rezistență a organismului boli infecțioase iar arătând faza bolii, un loc important îl ocupă imunotestul enzimatic (ELISA). Efectuarea acestui studiu vă permite să evaluați în mod cuprinzător activitatea funcției de protecție a sângelui și să identificați starea de imunodeficiență în patologiile infecțioase, precum și bolile de sânge, procesele autoimune și problemele hormonale.

Cum este posibil să acoperiți atât de multe obiective într-o singură analiză și care sunt indicațiile pentru implementarea acesteia? Să încercăm să ne dăm seama.

Ce este un test de sânge ELISA?

Acesta este un test de laborator care vă permite să determinați prezența anticorpilor specifici (factori de protecție ai sângelui de natură proteică) la anumiți antigeni (agenți patogeni). Printre anticorpii de importanță capitală se numără imunoglobulinele, care pot exista sub formă de imunocomplexe.

Imunoglobulinele sunt produse ca urmare a unor reacții neuroumorale umane complexe care apar ca răspuns la introducerea de antigene străine. Fiecare tip de agent patogen produce propriii anticorpi specifici. Acţionează prin „legarea” unui antigen sau a unui microorganism patologic, formând un compus complex „antigen-anticorp”, urmat de neutralizare, liză enzimatică, reacţii de fagocitoză şi excreţie din organism.

Notă:prin prezența anumitor complexe metoda ELISA determină tipul de agent patogen sau substanță nocivă prezentă la pacient.

Puteți afla principiile de bază ale funcționării imunității umane urmărind această recenzie video:

Ce sunt imunoglobulinele

Au fost descoperite și studiate 5 clase principale de imunoglobuline - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. rolul celorlalți nu a fost încă pe deplin elucidat și se află în stadiul cercetării științifice.

Notă:cel mai important în medicină practică Importante sunt imunoglobulinele din clasele A, M și G. Conținutul informațional al definiției se bazează pe diferite intervale de timp ale apariției, maximului și dispariției lor.

Să luăm în considerare această întrebare mai detaliat.

Sarcina principală imunoglobulina A (IgA) este funcția de protecție a mucoaselor tractului respirator, tractul gastrointestinal și sistemul urinar. Cu un debut acut al bolii, este imposibil să le identifici. Aceste complexe de protecție apar abia din a 2-a săptămână de la debutul bolii, uneori mai târziu. Cea mai mare parte a imunoglobulinei A este concentrată în țesuturile mucoase. Aproximativ 80%. Anticorpii rămași circulă în sânge. Funcția principală este neutralizarea și distrugerea microorganismelor. După cedare manifestări acute boală, numărul acestor imunoglobuline începe să scadă și dispare complet până la 8 săptămâni de la debutul bolii. Dacă IgA se găsesc în mai mult de întâlniri târzii, atunci aceasta indică o cronizare a procesului.

Principalii și primii markeri ai fazei acute dezvoltarea patologiei sunteți imunoglobuline de clasa M (IgM). Ele se găsesc până în a 5-a zi de la debutul stării de rău. Puteți determina prezența lor în sânge timp de aproximativ 6 săptămâni. Apoi încep să dispară rapid.

Răspunsul imun rezidual caracterizează prezența în sânge imunoglobuline de clasa G (IgG). Apariția acestor factori în sânge este detectată la aproximativ o lună de la debutul bolii. În viitor, acestea pot fi determinate timp de mai multe luni, ani și chiar o viață, îndeplinind o funcție de protecție împotriva revenirii (recăderii) bolii și, în unele cazuri, făcând imposibilă dezvoltarea secundară a patologiei. Dacă cantitatea de imunoglobulină G a început să crească din nou, atunci poate fi suspectată reinfecția. O concluzie similară se poate trage prin efectuarea a două sau trei probe prelevate la un interval de 2 săptămâni.

Imunoglobulina D (IgD) este localizat pe limfocitele B, este într-o concentrație mică la oamenii sănătoși. După 10 ani de viață își atinge valorile maxime. Cantitatea de imunoglobulina D crește în timpul sarcinii, la pacientele cu boli sistemice ale țesutului conjunctiv, boli cauzate de o stare de imunodeficiență.

Indicații pentru numirea imunotestului enzimatic

Determinarea anticorpilor la prezența în organism a microbilor patogeni care provoacă:

• trichomonaza;
• ureaplasmoza si.

Există o creștere a numărului de imunoglobuline și cu.

Diagnosticarea este efectuată pentru a detecta:

• boli herpetice;
• grupuri de hepatită virală;
• virusul Epstein-Barr;
• citomegalovirus.

Cu ajutorul ELISA, este posibilă determinarea prezenței anticorpilor la 600 de tipuri de alergeni, detectarea stării de imunodeficiență, efectuarea unei examinări cuprinzătoare înainte de operațiunile de transplant și efectuarea unei analize cuprinzătoare pentru eficacitatea tratamentului.

ELISA este metoda suplimentara detectarea celulelor canceroase.

Cum se efectuează un ELISA de sânge?

Pentru testul imunoabsorbant legat de enzime, în cele mai multe cazuri, se utilizează sângele pacienților, uneori se iau țesut vitros, lichidul din canalul spinal și lichidul amniotic.

Sângele este extras printr-un ac de injectare într-o seringă din vena cubitală. Studiul se efectuează pe stomacul gol. Trebuie amintit că luarea anumitor medicamente poate afecta rezultatul analizei. Înainte de a dona sânge, trebuie să vă abțineți de la fumat, să beți alcool. Utilizarea substanțelor narcotice poate distorsiona rezultatele.

În cazul valorilor negative ale imunoglobulinelor IgM, IgG, IgA, putem vorbi despre absența bolii sau faza ei inițială, iar rezultatul cu minusuri este posibil și cu recuperarea completă după o perioadă semnificativă de timp.

Dacă IgA și IgM nu sunt detectate, iar IgG este pozitivă, atunci, după toate probabilitățile, vorbim despre imunitatea formată după boală infecțioasă sau după vaccinare.

În cazul unui titru ridicat de IgM cu valori negative ale IgG, IgA, se poate concluziona că există o boală infecțioasă acută.

Valorile pozitive simultane ale rezultatelor imunoglobulinelor - IgA, IgM, IgG sunt caracteristice fazei acute a recidivei unei boli cronice existente.

Pentru infecție cronică ELISA, care se află în faza de remisie a procesului, arată valori negative ale imunoglobulinei M (IgM), în timp ce rezultatul imunoglobulinelor G (IgG) și A (IgA) va fi pozitiv.

Beneficiile metodei imunologice enzimatice

Principalele avantaje ale metodei ELISA sunt:

• cost redus de analiză;
• specificitatea diagnosticului, acuratețea;
• control dinamic (repetă analiza pentru a determina eficacitatea tratamentului și etapele bolii);
• posibilitatea de a efectua examinări în masă în focarele de infecție;
• viteza de obținere a rezultatului;
• simplitatea relativă a analizei;
• posibilitatea utilizării tehnologiei informației în prelucrare;
• siguranța și lipsa durerii pentru pacient.

Există dezavantaje ale ELISA de sânge?

Principalul punct negativ al studiului este posibilitatea de a obține date fals negative și fals pozitive. Cauza neînțelegerilor pot fi defecte tehnice, luarea de medicamente, care pot distorsiona imaginea.

ELISA este utilizat pentru a detecta:

• (ascaris, oxiuri);
• ascuțit și forma cronica opistorhiază;
• trichineloză;
• prezența lambliei (ca analiză suplimentară);
• forme de leishmanioză;
• amibiaza;
• conținutul de toxoplasmă;

În concluzie, trebuie remarcat faptul că imunologia modernă este în permanență în stadiul de dezvoltare, în căutarea unor noi metode de diagnosticare și tratare a bolilor.

Stepanenko Vladimir, chirurg

Preț: la cerere

Puteți adăuga un articol în coșul de cumpărături specificând cantitatea