Hastalıkların teşhisi için serolojik kan testleri yöntemleri. Kan serumunda antiviral antikorların (at) tespiti

Daha basit ve daha uygun fiyatlı bir yaklaşım - serumda antiviral antikorların (AT) tespiti. Kan örnekleri iki kez alınmalıdır: hastalığın başlangıcından hemen sonra. klinik işaretler ve 2~3 hafta sonra. Tam olarak iki serum örneğini incelemek son derece önemlidir. AT'nin görünümü ile mevcut vaka arasında bağlantı kurulamaması nedeniyle tek bir çalışmanın sonuçları kesin olarak kabul edilemez. Bu antikorların önceki bir enfeksiyondan sonra dolaşımda olması mümkündür. Böyle bir durumda, iyileşme döneminde elde edilen serum çalışmasının rolü fazla tahmin edilemez. İlk numunenin alınması sırasında hastalığın varlığı, ikinci numunenin çalışması sırasında tespit edilen AT titresinde en az dört kat artış ile gösterilir.

Aşağıda listelenen yöntemler antikorların farklılaşmasına izin verme(AT) hastalık sırasında oluşur ve iyileştikten sonra dolaşıma girer (farklı enfeksiyonlar için bu sürenin süresi değişkendir). Yeterli tanı için iki örnekte AT titrelerinde önemli bir artışı doğrulamak gerektiğinden, ilk örnek akut fazda ve ikincisi - iyileşme döneminde (2-3 hafta sonra) incelenir. Elde edilen sonuçlar retrospektiftir ve epidemiyolojik araştırmalar için daha uygundur.

RTGA virüslerin hemaglutininlerine (örneğin influenza virüsü) karşı sentezlenen AT'yi tespit eder. Yöntem, hastanın serumunda bu tür antikorların (AT) tespit edilmesini kolaylaştırır.

RSK- temel serolojik tanı yöntemi viral enfeksiyonlar (mevcut olanlar arasında). Reaksiyon, tamamlayıcı sabitleyici IgM ve IgG'yi saptar, ancak bunları ayırt etmez; elde edilen sonuçları optimize etmek için reaksiyonun formülasyonu, personelin belirli becerilerini gerektirir.

KAYALIK. Enfekte doku biyopsisi mevcutsa ve ticari floresan etiketli AT kitleri mevcutsa, doğrudan immünofloresan tanıyı doğrulayabilir. Reaksiyonun formülasyonu, çalışılan dokunun AT ile inkübasyonunu, daha sonra çıkarılmasını ve numunenin floresan mikroskopisini içerir.

Antiviral antikorların tespiti için immünosorpsiyon yöntemleri

İmmünosorpsiyon yöntemleri(örneğin, ELISA ve RIA), IgM ve IgG'yi ayrı ayrı tespit ettikleri için daha bilgilendiricidir, bu da bulaşıcı sürecin dinamikleri veya iyileşme durumu hakkında belirli sonuçlar çıkarmanıza olanak tanır. AT'yi tespit etmek için, bilinen Ag katı bir substrat üzerine (örneğin, test tüplerinin, plastik mikroplakaların, Petri kaplarının duvarlarında) adsorbe edilir ve hastanın serumunun çeşitli dilüsyonları eklenir. Uygun inkübasyondan sonra, bağlanmamış AT'ler çıkarılır, insan Ig'sine karşı enzim etiketli antiserum eklenir, bağlanmamış AT'lerin inkübasyonu ve yıkanması için prosedür tekrarlanır ve herhangi bir kromojenik substrat (enzimin etkisine duyarlı) eklenir. Renk değişimi spesifik antikorların içeriği ile orantılı olduğundan, spektrofotometrik yöntemle bunların titrelerini belirlemek oldukça mümkündür. HIV enfeksiyonunun tanısında en yaygın kullanımı immünoblotlama yöntemi bulmuştur.

Serolojik inceleme veya başka bir deyişle serolojik analiz, biyolojik materyallerin laboratuvar ortamında incelenmesidir. Bu analiz, incelenen organizmada veya kontrol kontrolünden geçen ürünlerde patojenik bakterilerin varlığını belirlemenizi sağlar.

Serolojik tanı yöntemleri

Sera veya diğer biyolojik nesnelerin (süt, safra, tükürük, bağırsak mukozasının sürüntüleri ve yardımcı materyaller) incelenmesi, vücudun bulaşıcı bir ajanın girişine verdiği tepki hakkında oldukça güvenilir bir fikir verir. Serolojik araştırma yöntemlerinin kullanılmasının sadece teşhis değeri taşımadığı, aynı zamanda vücut koruma düzeyi, popülasyon bağışıklığının durumu ve incelenen bölgedeki çeşitli rotavirüs türlerinin dolaşımı hakkında güvenilir bilgi sağladığı belirtilmelidir. Serolojik araştırmaların sonuçları ayrıca profilaktik ilaçların antijenik bileşimini optimize etmek için bilgi sağlayabilir ve aşıların immünolojik etkinliğini değerlendirmek için kullanılabilir.

Bununla birlikte, 1.5-2 haftalık aralıklarla alınan eşleştirilmiş kan serumlarının incelenmesi ihtiyacının ve ekspres tanı yöntemlerinin mevcudiyetinin, serolojik reaksiyonların tanısal değerini azalttığına dikkat edilmelidir.

Bu nedenle, geleneksel serolojik testler - tamamlayıcı fiksasyon testi (CFR) ve hemaglütinasyon inhibisyon testi (HIT) şimdiki zaman sadece sınırlı uygulama. Bununla birlikte, bu yöntemlerin basitliği, reaktiflerin mevcudiyeti ve ucuzluğu, onları laboratuvar uygulamalarında hala uygulanabilir kılmaktadır. RSK ve RTGA ayarı genel kabul görmüş yöntemlere göre yapılır.

Aşılama sonrası bağışıklık çalışması için RSK kullanımına bir örnek, K. Midkhan'ın (1989) çalışmasıdır. 5 aylık 116 çocuktan alınan serumları incelerken, vakaların %44'ünde RSK'ya göre güvenilir serokonversiyonlar ve nötralizasyon testi (PH) ve enzim immünoassay (ELISA) sonuçlarına göre - %83 ve %96'sında, sırasıyla.

Bağışıklık Araştırması

CSC yardımıyla popülasyon bağışıklığını incelemek için, birkaç aydan 80 yaşına kadar olan OKZ'li hastaların 1246 serumunu inceledik. Kompleman sabitleyici antikorların geometrik ortalama titrelerinin 2-4 yaş ve 60 yaş üstü gruplarda en yüksek olduğu gösterilmiştir, bu da bu yaş gruplarındaki bireyler arasında rotavirüs enfeksiyonunun en yüksek prevalansına ilişkin daha önceki verilerimizi doğrulamaktadır.

Rotavirüs testi

RTGA, rotavirüs enfeksiyonu çalışmasında RSK'dan daha sık ve kural olarak diğer laboratuvar testleriyle birlikte kullanılır. Böylece, Andrade J.P. et al. rotavirüs VP2, VP4, VP6 ve VP7'nin yapısal proteinlerine karşı antikorları incelemek için RTGA, immünoblot, ELISA bloğunu kullandı. Yazarlara göre, 2 ila 4 yaş arası çocuklarda rotavirüslere karşı antihemaglütinasyon antikorları %70-80 oranında bulundu.

RTGA'ya göre, belirli proteinlere karşı antikorların seviyesine bağlı olarak, yazarlar 4 grup birey tanımladı. Grup I ve II (%60), VP4 ve VP7'ye karşı yüksek düzeyde antikora sahip çocukları içerdi ve "bağışık" olarak sınıflandırıldı. AT III grup(%4) sevk edilen kişiler düşük seviye"kısmen bağışık" olarak adlandırılan VP7 ve VP6'ya karşı antikorlar. RTGA'ya göre antikor tespit edilmeyen grup IV'ün çocukları (%36), "bağışık olmayan" olarak belirlendi ve aralarında ciddi rotavirüs enfeksiyonu gelişmesi mümkün olduğundan bir risk grubu oluşturdu. Bu gözlemde, RTGA ve ELISA bloğunun duyarlılık göstergelerinin oldukça karşılaştırılabilir olduğu belirtilmelidir.

RTGA, yapısal protein VP4'ü incelemek için tekrar tekrar kullanılmıştır. Çalışmalar, hemaglütinasyon aktivitesinin antiserumlar tarafından spesifik olarak inhibe edildiğini, dolayısıyla VP4'ün rotavirüslerin hemaglutinin olduğunu doğruladığını göstermiştir. Benzer veriler daha önce M. Ezekiel (1995) tarafından yayınlanmıştır.

Bu nedenle, sunulan çalışmalar, rotavirüs enfeksiyonu çalışmasında RSK ve RTGA'nın hala kullanıldığını, ancak bu yöntemlerin yardımcı bir yapıya sahip olduğunu ve diğer testlerle tekrarlanması gerektiğini göstermektedir.

nötralizasyon testleri

Nötralizasyon reaksiyonu, insan veya hayvan bağışıklık serumlarının virüsün üremesini nötralize etme ve böylece bu fenomenle bağlantılı tezahürleri önleme yeteneğine dayanır. Biyolojik modele bağlı olarak, bu belirtiler şunlar olabilir: belirli bir kliniğe sahip bir hastalığın gelişimi, virüsün üremesi ve izolasyonu, spesifik antikorların üretimi ve ayrıca kullanım sırasında sitopatik bir etkinin ortaya çıkması veya kabarcık oluşumu. hücre kültürü.

Makrobiyolojik modeller şu anda esas olarak veterinerlik tıbbında kullanılmaktadır, insanlarda virüslerin tespiti çoğu durumda hem birincil hem de transfüze edilmiş hücre kültürü üzerinde gerçekleştirilir. PH yöntemleri, temel ayar şemasına göre iki gruba ayrılır. Yöntemlerin bir grubunda, seyreltilmemiş serum, virüsün seri dilüsyonları ile birleştirilir, diğerinde, serum dilüsyonları sabit bir virüs dozu ile test edilir. Bir nötralizasyon reaksiyonu oluşturmak için, belirgin bir sitopatik etkiye neden olan veya biyolojik bir modelde yoğun olarak yeniden üretilen bir patojen tercih edilir.

Bununla birlikte, rotavirüsler, ne yazık ki, B. Weber (1992) liderliğindeki araştırmacılar tarafından ikna edici bir şekilde gösterilen hafif bir sitopatik etkiye sahiptir. OKZ'li çocuklardan alınan 121 dışkı örneğinin CPP kontrolü altında MA-104 hücreleri üzerinde klasik virüs izolasyonu yöntemi kullanılarak yapılan bir çalışma, sadece 4 pozitif vakayı (%3,3) ortaya çıkardı. modern yöntemler rotavirüslerin saptanması (ELISA, PCR, PAAG'de EP) bu rakamın %54,4'e çıkmasına izin verdi. Bu nedenle, PH'nin duyarlılığını artırmak için, virüsün azalmasını görselleştirmeye yardımcı olacak ek metodolojik teknikler gereklidir, bunlar şu şekilde kullanılır: radyoaktif veya immünofloresan etiket, plak oluşumu, immünoperoksidaz boyama vb. virüs nötralize edici antikorların seviyesinin belirlenmesi, klasik PH yöntemiyle aynıdır, ondan sadece çözünürlük açısından, yani serumun virüs nötralize edici aktivitesinin görselleştirilmesinde farklıdır. Bu durumda, serumun aktivitesi, virüsün bulaşıcı özelliklerinin tezahürlerini bastırma kabiliyeti ile belirlenir.

Şu anda, çoğu çalışmada rotavirüse karşı virüs nötralize edici antikorların miktarını ölçmek için iki yöntem kullanılmaktadır. Bunlardan biri, spesifik olarak floresan konjuge antikorlara bağlanan virüsle enfekte olmuş hücrelerin (Plaq yöntemi) sayısını saymaya dayanır. Başka bir testte, virüsün nötralizasyon seviyesi, enzim immünoassay tarafından viral antijen üretimindeki azalma ile değerlendirilir. Her iki yöntemin karşılaştırmalı bir çalışması, rotavirüs serotipinin her prototip suşu için ELISA endeksleri ile plak oluşturan birimlerin sayısı arasında doğrusal bir ilişki gösterdi: Wa, DS-1, P, VA-70. Elde edilen veriler, bulaşıcı virüsün %60'ının nötralizasyonunu sağlayan serum dilüsyonunun (nötralize edici antikor titresi) belirlenmesini kolaylaştırır. Materyalleri her iki yöntemle test ederken antikor titrelerinin aynı olduğu ve her iki testin de sonuçların tekrarlanabilirliği açısından farklılık göstermediği ortaya çıktı. Yazarlara göre, floresein ile etiketlenmiş antikorları kullanan yöntemin bazı avantajları, sonuçların daha fazla nesnelliği (otomatik kayıt) ve daha az zahmetli olmasıdır.

Virüs nötralize edici antikorların titrelerini ölçmek için, ELISA'nın monoklonal antikorlarla bloke edilmesiyle modifiye PH da kullanılır.

• doğal enfeksiyon ve aşılama sırasında virüs nötralize edici antikorların (VNA) üretiminin yoğunluğunun incelenmesi;
• rotavirüslerin çeşitli yapısal proteinlerine VNA oluşumu;
• doğal enfeksiyona karşı korumada VNA kan serumu ve tükürük ve bağırsak mukozasının salgı antikorlarının rolünün değerlendirilmesi (Ward R. ve diğerleri, 1990, 1992, 1993, 1995, 1997).

Sonuç olarak, çeşitli modifikasyonlarında nötralizasyon reaksiyonunun hem deneysel hem de deneysel olarak hala yaygın olarak kullanıldığı vurgulanmalıdır. klinik araştırma yüksek duyarlılığı ve özgüllüğü ile diğer tüm serolojik yöntemler için referans görevi görür.

yağış analizi

Çökelme testleri, ozmotik prosesler kullanılarak veya bir jel ortamında veya başka tipte bir taşıyıcıda bir elektrik alanının etkisi altında serumun viral antijenlerle etkileşimine dayanır. Bu yöntemlerden biri de karşı immünoelektroforez (VIEF) reaksiyonudur. Yazarlar, rotavirüs ishalli sağlıklı ve hasta yetişkinlerin ve çocukların kan serumlarını ve ayrıca %4 polietilen glikol ilaveli %7 agaroz içinde VIEF yöntemiyle insan rotavirüsüne karşı antikorların varlığı için spesifik immünoglobulin preparatlarını inceledi. RV'ye karşı antikorların oldukça yaygın olduğu ve hasta yetişkinlerde ve çocuklarda sırasıyla %90.2-87.7'de ve 1 yaşın altındaki sağlıklı çocukların %78.4'ünde bulunduğu ortaya çıktı. 32 immünoglobulin serisinin tamamı 1:4-1:128 titrelerinde RV'ye karşı antikorlar içeriyordu. Yazarlara göre, yöntem popülasyon bağışıklığını incelemek için uygundur.

radyoimmünopresipitasyon

Başka bir çökeltme tekniği radyoimmünopresipitasyondur. Yazarlar, birincil rotavirüs enfeksiyonunda yapısal ve yapısal olmayan proteinlere karşı bağışıklık tepkisini incelemek için bu yöntemi kullandılar ve bağışıklık tepkisinin VP4'e VP7'den daha belirgin olduğunu gösterdiler.

Yenidoğanlarda dört değerlikli bir reasortant aşı kullanımına serum ve salgı immünolojik yanıtı incelenirken Bunun için ELISA ve PH ile birlikte bir radyoimmünoassay tekniği kullanıldı. Serumdaki bağışıklık tepkisinin enjekte edilen antijenin dozuna bağlı olduğu gösterilmiştir; tükürükte antikorların saptanmasına gelince, yazarlar görünümlerini anne sütü tüketimi ile açıklıyor.

Radyoimmünopresipitasyon reaksiyonu da ince araştırma çalışmalarında kullanılır. Bu nedenle, J. Tosser, genom yapısındaki VP6 proteininin topolojisini incelemek için bu yöntemi kullandı ve VP6'nın iç kapsid kanallarının oluşumunda rol oynadığını öne sürdü.

1994'teki diğer araştırmacılar da rotavirüs enfeksiyonundaki immünolojik değişiklikleri incelemek için radyoimmünopresipitasyon yöntemini kullandılar. Yazarlar, akut dönemde, esas olarak IgA ila VP2 ve VP6'nın kaydedildiğini, iyileşme döneminde, salgı antikorlarının (IgA) üretiminin yoğunluğunun sadece VP2'ye değil, aynı zamanda diğer yapısal ve yapısal olmayan proteinlere de azaldığını göstermiştir. . Daha sonra, radyoimmünopresipitasyon yöntemi kullanılarak benzer veriler elde edildi. Yazarlar, VP4 ve VP7'ye ek olarak, VP2, VP6 ve NSP2'nin de immünolojik süreçte yer aldığını göstermiştir.

Bu nedenle, immünopresipitasyon, doğal rotavirüs enfeksiyonunda immün yanıtı incelemek için tanısal olarak kullanılmıştır.

AT son yıllarİmmünopresipitasyonun yerini, RV enfeksiyonunda aşılama sonrası ve enfeksiyon sonrası bağışıklığı değerlendirmek ve ince taneli araştırma ve geliştirme için kullanılan radyoimmünopresipitasyon almıştır.

hibridizasyon yöntemleri

İmmünoblot yöntemi, rotavirüslere karşı antikorları belirlemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Rotavirüs enfeksiyonunun tanısında Western-blot kullanımına bir örnek, immünoblotlama kullanarak, OKZ'li 21 çocukta yapısal RV proteinlerine karşı antikorların özgüllüğünü karakterize eden H. Ushijima'nın (1989) çalışmasıdır. enfekte olmamış çocuklarda bu proteinlere karşı IgA ve IgG sınıflarının koproantikorlarının seviyesi. Yazarlar, immünoblotlamanın, eşleştirilmiş kan serumlarını incelemeden tek bir koproantikor örneği üzerinde hastalığın teşhisini koymayı mümkün kılabileceğini varsaydılar. VP1, VP2, VP4, VP6 ve VP7'ye karşı antikorların seviyesini belirlemek için Western-blot kullanma olasılığı Pavlov I. ve diğerleri (1991) tarafından gösterilmiştir. Yazarlar, SA-11, DS-1, Wan Ito rotavirüs suşlarına karşı antikorların varlığı için insan ve hayvanların kan serumlarını incelediler ve Western blot'un klinik uygulamada bağışıklığı değerlendirmek için başarıyla kullanılabileceği sonucuna vardılar.

İmmünoblotun, bir koproantikor örneği için eşleştirilmiş serum kullanılmadan rotavirüs enfeksiyonu tanısını doğrulamak için kullanılabileceğine inanılmaktadır.

RTHA ve ELISA ile birlikte, sürü bağışıklığını incelemek için immünoblot kullanıldı. VP2, VP4, VP6 ve VP7'ye karşı bağışıklığı olmayan, bir risk grubunu temsil eden ve öncelikle aktif ve pasif bağışıklama yoluyla korumaya ihtiyaç duyan bir grup birey bulunmuştur (Andrade J.P. ve diğerleri, 1996).

Doğal RV enfeksiyonu sürecindeki serolojik değişikliklerin araştırılmasında immünoblot kullanımı, Begue R. ve ark. (1998). Yazarlar, VP2 ve VP6'ya karşı antikorların en sık enfeksiyona karşı bağışıklık tepkisinde yer aldığını ve VP7 ve VP4'e karşı antikorların daha az dahil olduğunu doğruladılar.

İmmünofloresan analizi

Rotavirüslerle enfekte hücreler üzerinde test serumlarını titre etmek için florokrom etiketli anti-tür serumlarını kullanan dolaylı bir immünofloresan yöntemi kullanılır. Reaksiyon, etiketli antikorların ve bir homolog antijenin spesifik etkileşimine dayanırken, antijen-antikor kompleksi bir floresan mikroskop kullanılarak kolayca tespit edilir.

Bu yöntemi kullanarak, yazarlar iki Güney Amerika Kızılderili grubu üzerinde bir serolojik araştırma yürütmüşler ve her iki grupta da yüksek oranda seropozitif birey bulmuşlardır: ELISA ile sırasıyla %67.8 ve %77.4 ve IFM ile %45.5 ve %56.7.

IFM kullanılarak göbek kordonu kanında RV grup C'ye karşı antikor düzeyinin belirlenmesi üzerine yapılan bir başka çalışmada, doğurganlık çağındaki kadınların %30'unda bu antikorların geçmiş bir enfeksiyonu işaret ederek tespit edildiği gösterilmiştir.

Bağlantılı immünosorbent tahlili Günümüzde rotavirüs enfeksiyonunun serolojik tanısında PH ile birlikte son derece yaygın olarak kullanılmaktadır. Enzim etiketli antikorların veya antijenlerin kullanımına dayanan bu yöntem, uygulama kolaylığı ve ekonomik olması nedeniyle rotavirüs enfeksiyonunun serolojik teşhisi için en uygun ve umut vericidir. Yöntem, popülasyonun toplu seroepidemik araştırmalarını gerçekleştirmeyi, aşıların immünolojik ve epidemiyolojik etkinliğini değerlendirmeyi, insan vücudunun çeşitli biyolojik sıvılarında çeşitli sınıflardaki antikorların koruyucu rolünü incelemeyi ve ayrıca rotavirüsün serolojik teşhisini gerçekleştirmeyi mümkün kılar. enfeksiyon.

ELISA kullanan çok sayıda çalışma, R. Azeredo (1989) tarafından gerçekleştirildi ve bu, OKZ'nin yerleşik rotavirüs etiyolojisine sahip hasta sayısının, serolojik muayene sonuçlarına göre enfeksiyon seviyelerinden önemli ölçüde düşük olduğunu gösterdi. Bu veriler, birçok klinik rotavirüs enfeksiyonu vakasının feçeste RV tespiti ile teşhis edilmediğini bulmuştur. Rotavirüs enfeksiyonunun prevalansı ile ilgili daha ileri çalışmalar bu varsayımı doğrulamıştır. Seroepidemiyolojik araştırmalar yapılırken, popülasyonun %50-70'inin yüksek düzeyde antikorlara sahip olduğu bulundu, bu da insan popülasyonunda RV'nin yaygın dolaşımını gösterir.

Farklı immünoglobulin sınıflarına ait antikor seviyesinin dinamiklerini belirlemede ELISA tarafından daha da büyük fırsatlar açılır. Bu nedenle, 1989'daki metodolojinin yazarlarına göre, aşılama işlemi sırasında kandaki RV'ye karşı antikorlarda% 83-96'da önemli bir artış gözlemlendiğini iddia ediyorlar. IgA ve IgG sınıflarının antirotavirüs antikorları, sırasıyla %67.6 ve %70.0 plazma azalmasıyla ELISA ve PH ile eşit derecede iyi tespit edildi. IgM sınıfı antikorların serokonversiyonu, sırasıyla ELISA ve RSC ile çocukların %53'ünde ve %44'ünde tespit edildi. Yazarlar, farklı sınıflardaki antikorların üretim yoğunluğunun analizinin sonuçlarına dayanarak, aşılamadan sonra serokonversiyonları saptamak için en etkili, basit ve en hızlı yöntemin ELISA kullanarak IgA antikorlarını saptama yöntemi olduğu sonucuna varmışlardır.

Bu sonuç, RV enfeksiyonu teşhisi konan 68 anne-çocuk çiftinin bir araştırmasının sonuçlarına dayanarak, ELISA kullanılarak IgA antikorlarının saptanmasının gösterildiğini belirten R. Bishop'un (1996) çalışmasında da doğrulandı. dışkı materyalleri hem klinik olarak ifade edilen hem de asemptomatik enfeksiyon en hassas belirteçtir. Şiddetli RV ishali olan çocukları incelerken benzer sonuçlar 1998'de J. Kolomina tarafından elde edildi.

Bununla birlikte, serokonversiyonların yoğunluğunu incelemek için, tanı sürecini önemli ölçüde uzatan eşleştirilmiş serumları incelemek gerekir. Aynı zamanda, IgM sınıfının antikorlarının ortaya çıkmasının, bulaşıcı sürecin başladığının kanıtı olduğu iyi bilinmektedir. ELISA ve RSK ile rotavirüs enfeksiyonu olan hastaların muayenesi sırasında elde edilen verilerimize göre, ELISA sonuçlarına göre, incelenen tüm kişilerin kanlarında RV'ye karşı IgM antikorları içerdiği, RSK'ya göre ise sadece %77 (R

Son yıllarda, gene ve serotipe özgü antikorları belirleme olasılığının farkına varılmasıyla birlikte, ELISA, rotavirüs enfeksiyonunu incelemek için gerçek anlamda evrensel bir yöntem haline geldi ve şu yöntemler kullanıldı:

• bireysel yapısal ve yapısal olmayan RV proteinlerine karşı IgA, M, G sınıflarının antikorlarının üretimini incelerken;
• immünolojik etkinliğin değerlendirilmesinde Çeşitli türler aşılar: zayıflatılmış, soğuğa adapte edilmiş, DNA, reassortant;
• doğal enfeksiyon koşulları altında ve bağışıklama sırasında vücudun çeşitli biyolojik sıvılarında antikor üretimini incelerken.

Bu nedenle, sunulan verilerden aşağıdaki gibi, rotavirüs enfeksiyonunun immünolojik yönleri, geniş bir yelpazede kullanılarak incelenmiştir. laboratuvar yöntemleri. Sonuç olarak, çözünürlüğü, ekonomik ve zaman maliyetlerini dikkate alarak en uygun araştırma yönteminin seçimi oldukça karmaşıktır ve araştırmacıların karşı karşıya olduğu görevlere ve ayrıca laboratuvar ekipmanına bağlıdır. Ve yine de, bizim görüşümüze göre, çeşitli yöntemlerden ikisi seçilmelidir - hücre kültüründeki nötralizasyon reaksiyonu ve enzim immünoassay - çeşitli immünoglobulin sınıflarına karşı antikorların incelenmesini sağlar. Rotavirüs enfeksiyonunun açık teşhisi olasılığı, geniş uygulamada kullanım için bu yöntemlerin özel vaadini belirler.

seroloji(Latince serumdan - "serum", logos - "bilim"), serum antikorlarının antijenlerle etkileşiminin özelliklerini inceleyen bir immünoloji dalıdır.

Teşhisin temeli, vücudun belirli bir antijenle enfeksiyonuna tepki olarak oluşan spesifik antikorların saptanmasıdır. Kanda hangi antikorların bulunduğuna bağlı olarak, enfeksiyonun doğası hakkında bir sonuca varılır ve bu antikorların miktarı aktivite derecesini gösterir. bulaşıcı hastalık.

Serolojik kan testinin bir parçası olarak araştırma için alınan materyal üzerinde çalışılıyor ve diğerleri Tehlikeli hastalıklar- uçuk, bağırsak enfeksiyonları, kızamıkçık, toksoplazmoz, klamidya, kızamık, klamidya. Ek olarak, bu çalışma kan grubunu onaylamanıza, proteinlerin özgüllüğünü belirlemenize olanak tanır.

Böylece, serolojik çalışmalar yapılır:

• bir ön tanı yapılmışsa ve şimdi onaylanması gerekiyorsa. Çalışma, uygun antijenin kan serumuna eklenmesine dayanmaktadır. Yanıt, hastalığın varlığı veya yokluğu hakkında bir sonuca varmanızı sağlar;
• teşhis konulamıyorsa. Çalışmanın bir parçası olarak, kana antikorlar eklenir ve antijenlerin türü belirlenir, bu da belirli bir hastalığın belirlenmesini mümkün kılar;
• Eğer gerekliyse .

Bu nedenle, serolojik bir kan testi, tanı koymaya veya en çok reçete yazmaya yardımcı olur. etkili tedavi- minimum zaman ve finansal maliyetle.

Serolojik çalışmaların avantajları şunları içerir:

• patolojik mikroorganizmaları tespit etme yeteneği erken aşamalar enfeksiyonlar;
• hastalığın gelişiminin kontrolü ve terapinin etkinlik düzeyi;
• biyomateryali almadan önce özel hazırlığa gerek yoktur;
• yeterlik. Sonuç, yatarak tedavide çok önemli olan iki ila üç saat içinde hazır olacaktır;
• reaktifin ihtiyaç duyulduğu sıklıkta numune alınmasına izin veren satın alınabilirliği;
• kontrendikasyon yok.

Serolojik test nasıl yapılır?

Kübital damardan kan örneklemesi yapılır. Önemli nokta- kan bir şırınga ile değil, yerçekimi ile alınır - bir damara şırınga olmadan bir iğne sokulur ve bir test tüpünde beş ml'ye kadar kan toplanır. Prosedür sabah gerçekleştirilir.

Çalışmanın altında yatan reaksiyonlara bağlı olarak, birkaç tür prosedür vardır:

1. Nötrleştirme reaksiyonu. Bağışıklık serum antikorlarının mikroorganizmalara veya toksinlere karşı nötralize edici bir ajan olarak reaksiyona girerek vücut üzerindeki olumsuz etkilerini önleme özelliğine dayanır;
2. aglütinasyon reaksiyonu. Doğrudan veya dolaylı olabilir. İlk durumda, antikorların varlığı için kan serumu çalışmasından bahsediyoruz (öldürülen mikroplar malzemeye atılır ve reaksiyon değerlendirilir - pul şeklinde bir çökelti varsa, reaksiyon pozitiftir) , dolaylı bir reaksiyon, üzerlerinde adsorbe edilen antijenlerle eritrositlerin malzemeye girmesine dayanır ( taraklı tortu, pozitif bir reaksiyonu gösterir);
3. Yağış reaksiyonu. Antijen solüsyonu, bağışıklık serumu üzerinde katmanlanır (sıvı bir ortam görevi görür). Çözünür antijen kullanılır. Antijen-antikor kompleksi çökerse, reaksiyon pozitif olarak kabul edilir;
4. tamamlayıcı reaksiyon. Kapsam — bulaşıcı hastalıkların tespiti. Kompleman aktive edilir ve reaksiyonlar incelenir;
5. etiketli antijenler ve antikorlarla reaksiyon. Özel bir şekilde işlenen doku antijenlerinin veya mikropların UV ışınlarının etkisi altında ışık yaymaya başlaması esasına dayanır. Yöntem, sadece antijenlerin teşhisinde değil, aynı zamanda hormonların, enzimlerin ve ilaçların belirlenmesinde de yaygın olarak kullanılmaktadır.

Test için hazırlanmak gerekir: dört gün içinde hasta kalp ilaçları almayı reddetmeli, ayrıca tezahürlerinden herhangi birinde alkolü, baharatlı ve yağlı yiyecekleri, tatlıları hariç tutmalı, fiziksel çabayı sınırlamalı ve stresten kaçınmalısınız.

Bu kurallara uymazsanız, yanlış olma riski olumlu sonuç. İkinci bir test reçete etmeden önce, doktor hastanın işlemden bir gün önce ne yaptığını öğrenmeli ve muayeneye nasıl uygun şekilde hazırlanacağı konusunda tavsiyelerde bulunmalıdır.

Serolojik analiz: transkript

Serolojik kan testi - bulaşıcı ajanın türünü belirlemenize / onaylamanıza izin veren bir analiz, uzmanın teşhis koymasına yardımcı olur. Doktor bulamazsa bu vazgeçilmez bir yardımdır. ilaç tedavisi, çünkü çeşitli hastalıklara neden olan ajanlar, spesifik ilaçların ve antibiyotiklerin etkisine karşı farklı duyarlılıkta farklılık gösterir.

Malzemeyi toplama prosedürü tamamlandıktan sonra, laboratuvar asistanları bir sonraki aşamaya geçer - göstergeleri deşifre ederler. Bu nedenle, hastanın kanında antikor bulunmazsa, vücutta enfeksiyon olmadığı sonucuna varılabilir - bu durumda analiz sonucu pozitiftir.

Ancak bu durum, kuralın bir istisnasıdır: hastalığın semptomları varsa, serolojik çalışmalar vücutta ciddi bir patolojinin varlığını ortaya çıkarır ve kanıtlar.

İlk olarak, bir analiz kullanılarak vücutta patojenler bulunur, daha sonra enfeksiyonun ne kadar ciddi bir şekilde geliştiği hakkında bir sonuca varılan antikor miktarı tahmin edilir.

Hepatit, HIV, sifiliz için serolojik testler: özellikler

Frengi . Frengi testi yaparken uzmanlar, sifilizin girmesinden sorumlu proteinleri ararlar. insan vücudu enfeksiyonun etken maddesi - soluk treponema hakkında konuşuyoruz. Bu durumda kan serumu biyolojik bir materyal görevi görür.

. Viral hepatit- Tehlikesi, vücutta kendini göstermeden uzun süre yaşayabilmeleri gerçeğinde yatan ciddi bulaşıcı hastalıklar. Belirteçleri analiz ederek hastalığı erken evrede, daha tedavi edilebilir olduğunda belirlemek mümkündür - belirteçler hastalıktan veya aşının uygulanmasından sonra kanda belirir.

anlamak gerekiyor patojenin tanımlanmasının enfeksiyondan sadece 1.5-2 ay sonra mümkün olduğu. Analiz hamile bir kadın tarafından yapılırsa, yanlış bir pozitif sonuç mümkündür.

Tıbbi siteyi https://tabletix.ru/ görüntülemenizi öneririz. Sitede faydalı bilgiler, tıbbi görüşler bulacaksınız.
Aşağıda listelenen semptomlardan bir veya daha fazlasını gözlemlerseniz, bir serolojik test yaptırmayı düşünmelisiniz:

• kusmak;
• iştahsızlık veya yokluğu;
• vücudun nedensiz iktidarsızlığı, aşırı çalışma;
• sarımsı ten rengi;
• dışkı ve idrarda renk değişikliği.

HIV. Olumlu bir sonuç gösterdiyse, bu hastanın AIDS ile enfekte olduğu anlamına gelmez. Enfeksiyon yakın zamanda meydana geldiyse (en fazla iki ay önce), antikorların varlığı, hastalığın gelişimi gerçeğinin belirlenmesine izin vermez. Yeniden çalışma planlanıyor.

Serolojik kan testi- Asıl amacı vücuttaki virüslerin, enfeksiyonların, mikropların hızlı tespiti olan en önemli araştırma yöntemi.

Bu eşsiz laboratuvar "araç", bağışıklık baskılanmasının bir sonucu olan herhangi bir hastalığı tanımlamanıza izin verir, bu nedenle tembel olmayın, ancak hastalığı zamanında tanımlayabilmek ve ondan hızla kurtulabilmek için düzenli olarak bir analiz yapın.

8 057

Frengi teşhisi için dolaylı yöntemler.

Frengi teşhisi için, teknik ve amaç bakımından farklılık gösteren birçok araştırma yöntemi kullanılmaktadır. Doğrudan yöntemler, mikroskopi (karanlık alan mikroskobu vb.) veya PCR kullanarak test materyalindeki patojeni tespit etmeyi amaçlar.

Soluk treponemanın (T. pallidum) doğrudan tespit yöntemlerine ek olarak, sifiliz incelenirken dolaylı ( serolojik) kan serumu ve beyin omurilik sıvısında sifilizin etken maddesine karşı antikorları tespit eden araştırma yöntemleri. Frengi teşhisi için dolaylı yöntemler, ELISA, RPHA, CSR, RIF ve RIF-abs, RIBT, PCR, ekspres yöntem, immünoblot ve diğerlerinin serolojik testlerini içerir.

Bulaşıcı hastalıkların teşhisi için serolojik yöntemler.

Serolojik tanı kriterleri spesifik antijen-antikor reaksiyonlarına dayanır. Belirlenmesi gereken mikroorganizmaların antijenleri (hücre duvarlarının bileşenleri, flagella, kapsüller, DNA ve toksinler) serumda bulunan antikorlarla reaksiyona girer. Serolojik tanı yöntemlerinin temeli olan antijenler ve bunlara karşılık gelen antikorlar arasında bağlanma meydana gelir. Serolojik testler, bilinen bir antikor kullanılarak bilinmeyen bir antijenin (kaynağı bakteri, virüs, toksin vb.) veya bilinen bir antijen kullanılarak serumdaki bir antikorun saptanması için kullanılır.

Serolojik reaksiyonlar, antijenin durumuna ve antijen ile antikorun etkileşime girdiği ortamın özelliklerine ve ayrıca yürütme yöntemine göre sınıflandırılır.

Serolojik reaksiyonları yürütmek için aglütinasyon, çökeltme, kompleman fiksasyonu, immünofloresan, enzim immünoassay ve radyoimmünoassay ve diğerleri gibi birçok laboratuvar yöntemi kullanılır. Bu reaksiyonlar, mikroorganizmaların etkin bir şekilde ön tanımlanmasına izin verir.

Serolojik reaksiyonları oluşturmak için gerekli serumlar deneysel olarak elde edilir, özellikle aşı ve serum enstitüleri tarafından üretilir ve ticari teşhis kitlerinin bir parçası olarak sunulur.

Serolojik yöntemler, insanlarda ve hayvanlarda bulaşıcı hastalıkların tanı ve tedavisinde önemli bir araçtır, çünkü yalnızca hastalığa neden olan ajanı tanımlayamazlar, aynı zamanda hastaların ve iyileşen hastaların kanındaki ilgili patojenlere karşı spesifik antikorları da tespit edebilirler. Serolojik yöntemler şu anda en etkili yöntemler patojeni izole etmenin imkansız veya zor olduğu ve nispeten nadiren yanlış pozitif ve yanlış negatif sonuçlar verdiği durumlarda teşhis.

Frengi teşhisi için serolojik yöntemlerin kullanılması

Frengi teşhisi için serolojik laboratuvar yöntemlerinin temeli, vücudun patojenin görünümüne karşı bir bağışıklık tepkisi verme yeteneğidir. Kanın (veya beyin omurilik sıvısının) serumundaki (plazma) serolojik reaksiyonların yardımıyla, enfeksiyona karşı bağışıklık tepkisinin izleri, yani soluk treponema antijenlerine karşı antikorlar veya antijenlerin kendileri tespit edilir.

Var olanın kendine özgü doğasını belirlemek için klinik bulgular(yani, frenginin bir sonucu oldukları) ve gelecekte patolojik sürecin dinamiklerini kontrol etmek için önerildi. çok sayıda serolojik araştırma yöntemleri. Aynı yöntemler nüfus taraması için de yaygın olarak kullanılmaktadır.

Mevcut ulusal kılavuzlara ve klinik kurallara uygun olarak yönergeler, dünyanın birçok ülkesinde, nüfus araştırmalarında sifilizli hastaları belirlemek ve klinik bir tanı koymak için gelişmiş serolojik yöntemler kullanılmaktadır. Hem hastalarda hastalığın klinik belirtilerinin varlığında hem de gizli dönemlerde kullanılırlar.

Serolojik reaksiyonların belirlenmesi, frengi teşhisi için en güvenilir yöntemlerden biridir. Düzenlenmiş bir ayarlama yöntemiyle standartlaştırılmış serolojik testler, frengi için serolojik testler olarak adlandırılır. Frengiye belirli koşullar altında neredeyse tüm serolojik reaksiyonların yanlış pozitif veya yanlış negatif olabileceği göz önüne alındığında, bunlar karmaşık ve gerekirse dinamiklere yerleştirilmelidir.

Hastanın kan serumundaki antikorları belirlemek için kullanılan serolojik testler, duyarlılık, özgüllük, kurulum karmaşıklığı ve maliyet açısından birbirinden farklıdır. 21. yüzyılda gelişmeye yeni bir ivme kazandıran etkili sifiliz serodiagnozu için klasik yöntemlere ek olarak immünolojik testler ve teknolojiler kullanılmaktadır.

Antikorlar, tortul reaksiyonlar, enzim immünolojik testi, immünokemilüminesans, immünokromatografik testler, lineer immünoblotlama, akış florometrisi, immünoçip teknolojisi ve diğerleri dahil olmak üzere çeşitli immünokimyasal (serolojik) yöntemlerle saptanır.

Serodiagnoz (serolojik yöntemleri kullanan bir çalışma) aşağıdakiler için kullanılır:

• sifilizin klinik tanısının doğrulanması,
• gizli sifiliz teşhisi,
• frengili hastaların tedavisi için kriterlerden biri olarak tedavinin etkinliğini izlemek,
• frenginin önlenmesi (patolojiyi belirlemek için nüfusun belirli gruplarının tarama muayenesi).

Serolojik testlerin gerektirdiği en önemli özellikler - duyarlılık, özgüllük, tekrarlanabilirlik

Bir yöntem seçmek için belirleyici kriter laboratuvar teşhisi etkinliği - duyarlılığı, özgüllüğü ve tekrarlanabilirliğidir.

Duyarlılık hastalardaki pozitif sonuçların oranıdır. Yöntemin duyarlılığı, patojenin spesifik belirteçlerini (örneğin, patojen antijenleri veya bunlara karşı antikorlar) içerdiği bilinen numunelerin çalışmasının pozitif sonuçlarının yüzdesi ile belirlenir.

özgüllük- negatif test sonuçlarının oranı sağlıklı hastalar. Yöntemin özgüllüğü, açıkça patojenin spesifik belirteçlerini içermeyen numunelerin çalışmasının olumsuz sonuçlarının yüzdesi ile belirlenir. Bu nedenle, duyarlılık ve özgüllük ne kadar yüksek olursa, araştırma yöntemi o kadar güvenilir ve güvenilirdir.

önemli tanı kriterleri ayrıca geçerlidir Yeniden üretilebilirlik Aynı numunelerin tekrarlanan incelemelerinden elde edilen sonuçlar. Yüksek teknolojideki önemli gelişmelere rağmen, çalışılan tüm biyo-tahlillerde %100 (mutlak) duyarlılık ve özgüllük sağlayan hiçbir yöntemin bulunmadığına dikkat edilmelidir.

Şu anda, bir reaksiyon oluştururken %95'ten daha az duyarlılığa ve özgüllüğe sahip olan test sistemleri, kitler ve bileşenler Rusya'da resmi olarak kayıtlıdır. Bu nedenle, yetersiz bir sonuç elde etme olasılığı her zaman vardır.

Kullanılan antijen tipine göre testlerin sınıflandırılması. Frengi için treponemal ve treponemal olmayan testler

Modern zührevi bilimde, farklı kriterlere göre farklı kategorilere ayrılabilen, teşhis amaçlı olarak, frengiye karşı bir düzineden fazla serolojik reaksiyon varyantı kullanılır. Sınıflandırma, araştırma metodolojisine, kapsamına, hızına, düşük maliyetine, laboratuvar ekipmanı gereksinimlerine vb. göre yapılır.

Treponemal reaksiyonlar teorik olarak daha spesifiktir, ancak aynı zamanda yanlış pozitif sonuçlar verirler. Ayrıca, tedavi edilmemiş ve tedavi edilmiş sifiliz arasında ayrım yapılmasına izin vermezler. Treponemal reaksiyonların sonuçları her iki durumda da olumlu olacaktır. Treponemal olmayan reaksiyonlar, tedavi edilmemiş veya yeni ve iyileştirilmiş enfeksiyonlar arasında ayrım yapar.

Muayene sırasında hem treponemal hem de treponemal olmayan reaksiyonların yapılması önerilir. Frengi teşhisini koymak ve doğrulamak için, her iki test türü için de pozitif sonuçlar gerekir - treponemal ve treponemal olmayan. Bu nedenle treponemal olmayan testler treponemal testler ile birlikte kullanılır ve belirli zaman aralıklarında tedavi öncesi, sırasında ve tedavi bitiminden sonra yapılır.

1. Treponemal olmayan testler

Sonuçların görsel olarak yorumlandığı treponemal olmayan testlerin en ünlüsü:

• RW - Lipid antijenleri ile Wassermann reaksiyonu (kardiyolipin antijeni ile tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu, RSKk)
• Kann reaksiyonu (şu anda kullanılmamaktadır),
• Zaks-Vitebsky'nin sitokolik reaksiyonu (şu anda kullanılmamaktadır),
• plazma veya inaktif serum (MRP veya RMP) ile çökeltmenin mikro reaksiyonu,
• RPR (Hızlı Plazma reaktif testi),
• GÜVEN (Toluidin Red Isıtılmamış Serum Testi).

Treponemal olmayan testler arasında, reaksiyon sonuçlarının mikroskobik olarak okunduğu 2 test vardır:

1. VDRL - (Zührevi Hastalıklar Araştırma Laboratuvarı);

2. USR - aktif plazma reaktiflerinin belirlenmesi için test (Isıtılmamış Serum Reajinleri).

Treponemal olmayan testlerdeki reaktivite genellikle doku hasarını gösterir ve her zaman sifilize özgü değildir. Uygulama kolaylığı ve düşük maliyet, bunların sifiliz ön tanısının belirlenmesinde tarama reaksiyonları olarak kullanılmasına izin verir.

2. Treponemal testler

Treponemal testler, spesifik treponemal antijenleri kullanır. Bu testler tanıyı doğrulamak için gereklidir (RPHA, RIT, RIF ve ELISA). Grup 1 testlerinden daha karmaşık ve pahalıdırlar, ancak aynı zamanda daha spesifik ve hassastırlar. Beyin omurilik sıvısındaki antikorların tespiti de treponemal testler kullanılarak gerçekleştirilir.

Frengi tanısını doğrulayan geleneksel treponemal testler, pahalı laboratuvar ekipmanı ve deneyimli personel gerektirir, bu nedenle nadiren özel laboratuvarların dışında gerçekleştirilirler. Ancak artık bunların yerini, sahada yapılabilen ve tam kan kullanılan basit ve hızlı treponemal testler alabilmektedir. Bu reaksiyonların gerçekleştirilmesi, reaktiflerin ve ekipmanın depolanması için uzun süreli eğitim, özel koşullar gerektirmez.

Treponemal ekspres reaksiyonların karşılaştırmalı ucuzluğu, rahatlığı ve pratikliği, onlara yalnızca tanıyı doğrulama yöntemleri olarak dikkat çekmez. Bu reaksiyonlar, birincil bakımın bir parçası olarak sifiliz taraması için kullanılabilir. Tıbbi bakım(sahada, aynı sağlık kuruluşunda yapılabilir) veya laboratuvarların bulunmadığı alanlarda yapılabilir. Bununla birlikte, hastanın tedavi edilip edilmediğine bakılmaksızın, T. pallidum'a karşı antikorlar birkaç yıl içinde belirlendiğinden, treponemal hızlı reaksiyonlar tedavinin etkinliğini değerlendirmek için kullanılamaz ve ayırıcı tanı tedavi edilmemiş ve tedavi edilmemiş sifiliz.

Tespit edilen antikor tipine göre sifiliz teşhisi için serolojik yöntemlerin sınıflandırılması

Modern dermatovenereolojide, teşhis için sifilize karşı çeşitli serolojik reaksiyonlar kullanılır. On yıl önce ilgili olan yöntemlerden bazıları, karmaşıklık veya özgünlük eksikliği nedeniyle artık kullanılmamaktadır. Tespit edilen antikorlara bağlı olarak, sifilizin serolojik tanı yöntemleri üç gruba ayrılır:

I. Lipid (reajin) reaksiyonları - lipid antijenlerine (reajinler) karşı antikorlar belirlenir:

1) flokülasyon: lipid antijenleri ile cam üzerinde mikro reaksiyon - hızlı bir teşhis yöntemi (yağış mikroreaksiyonları - MRP), VDRL, CMF (kardiyolipin mikroflokülasyon testi), RPR, vb.;

2) lipid antijenleri ile tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu (RSK): Wasserman reaksiyonu (RV), kalitatif ve kantitatif sertleşme yöntemi, termostatik ve soğukta (Colmer reaksiyonu);

3) şu anda kullanılmayan tortul reaksiyonlar: Cahn çökeltme reaksiyonu, sitokolik Sachs-Vitebsky reaksiyonu, vb.;

II. Grup treponemal reaksiyonları - grup treponemal antijenlerine (hem patojenik hem de saprofitik treponemaların mikrobiyal hücresinin bir parçası olan) antikorlar belirlenir:

1) Reiter protein antijeni ile CSC;

2) immünofloresan reaksiyonu (RIF);

3) bağışıklık yapışma reaksiyonu (RIP).

III. Türe özgü protein treponemal reaksiyonları - Treponema pallidum'un spesifik tür antijenlerine karşı antikorlar belirlenir:

1) soluk treponemaların (RIT) immobilizasyon reaksiyonu;

2) RIF-abs immünofloresan reaksiyonu ve varyantları (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS, vb.);

3) soluk treponemaların (TPHA) dolaylı hemaglütinasyonunun reaksiyonu ve modifikasyonu TPPA.

4) enzim bağışıklık tahlili (ELISA);

5) immünoblotlama.

Frengi için serolojik testlerin pratik kullanımı

Farklı pratik amaçlar için farklı serolojik testler kullanılır.

Yurtdışında, nüfusun toplu araştırmalarında ve gerekirse sifilizin acil tespitinde, treponemal olmayan tarama reaksiyonları (VDRL, RPR, vb.) kullanılmaktadır. Teşhis, treponemal testler FTA-ABS, TPHA veya TPPA ile onay gerektirir. Şu anda, tarama testlerinde VDRL'nin yerine ELISA'nın kullanılması tavsiye edilmektedir. Bunun nedeni, ELISA testinin duyarlılık, özgüllük, araştırmayı otomatikleştirme yeteneği ve ayrıca teşhis test kitlerinin geliştirilmesi ile ayırt edilmesidir. Ek olarak, treponemal testler ilk kez kullanıldığında, sifiliz için muayene sırasının ters bir şeması doğrulanır.

Tedavinin etkinliğini izlemek ve enfeksiyon aktivitesini değerlendirmek için kantitatif VDRL önerilir. Doğrulayıcı/ek test olarak antitreponemal IgM antikorları için bir ELISA testi kullanılır.

Yerli uygulamada, kardiyolipin antijenli bir mikro çökeltme reaksiyonu (RMP) ve kardiyolipin ve treponemal antijenlerle CSC dahil olmak üzere bir serolojik reaksiyon kompleksi (CSR) kullanılır. Son zamanlarda, CSR'de RSK'nın ELISA veya RPHA ile değiştirilmesi tavsiye edilmektedir. RIF (ve modifikasyonları - RIF-Abs ve diğerleri), RIBT de kullanılır.

RIBT, treponemal reaksiyonların ayrışması durumlarında bir inceleme reaksiyonu olarak kullanılır.

Rusya Federasyonu'nda sifilizin laboratuvar serolojik teşhisine yaklaşımlar

SSCB'de birleşik klinik laboratuvar araştırma yöntemlerinin uygulanmasına giriş ve Rusya Federasyonu daha ilerici için izin verilen teşhis yöntemleri, klinik teşhis laboratuvarlarının çalışmalarını kolaylaştırmak, işgücü verimliliğini artırmak, laboratuvar testlerinin tekrarını azaltmak ve rasyonel hazır reaktif kitlerinin geliştirilmesinin temeli haline geldi.

1985 yılında, SSCB'de, sifiliz tanısını iyileştirmek için, spesifik olmayan (Wassermann) antijeni ile treponemal olmayan CSC reaksiyonu ve tortul reaksiyonlar (sitokolik ve Cana) tanı kompleksinden daha az duyarlı olduğu ve ek sağlamadığı için hariç tutulmuştur. bilgi.

Bunun yerine, sifiliz (CSR) için serolojik testler kompleksinin bir parçası olarak, treponemal ve kardiyolipin antijenleri (RSKt) ile kompleman fiksasyon reaksiyonunun ve kardiyolipin antijeni (RMP) ile mikro çökeltme reaksiyonunun kullanılması sağlanmıştır. Bu reaksiyon kompleksinin daha yüksek hassasiyet ve bilgi içeriği, sadece reaktiflerin değil, aynı zamanda antitreponemal antikorların da tespit edilmesini sağlamıştır.

1985

1. Kan plazması ve inaktive edilmiş kan serumu ile kardiyolipin antijenli RMP. İzole uygulama durumunda seçim testi.

2. Treponemal ve kardiyolipid antijenleri ile CSC; termostatik ve soğukta kalitatif ve kantitatif ayar yöntemleri;

3. Treponema pallidum immobilizasyon reaksiyonu (RIT); test tüpü ve melanj sertleştirme yöntemleri;

4. Aşağıdaki modifikasyonlarda immünofloresan reaksiyonu (RIF): kan serumu ve kılcal kan ile absorpsiyonlu RIF (RIF-abs), tüm beyin omurilik sıvısı ile RIF-200, RIF (RIF-c); kalitatif ve kantitatif ayarlama yöntemleri. Sifilizin latent ve geç formlarının teşhisi, karar vericilerin tanınması (yanlış-pozitif sonuçlar)

5. Klasik serolojik reaksiyonların kompleksi (CSR): Kardiyolipin ve treponemal antijenler + RMP ile RSC (Wasserman reaksiyonu). Nüfusun sifiliz için önleyici muayenesi, her türlü sifilizin teşhisi, tedavinin etkinliğinin izlenmesi, sifiliz teması olan kişilerin muayenesi.

2001 yılında, Rusya Federasyonu Sağlık Bakanlığı, teşhis testleri yapma prosedürünü düzenleyen yeni bir düzenleyici belgeyi onayladı - Rusya Federasyonu Sağlık Bakanlığı'nın 26 Mart 2001 tarih ve 87 sayılı Emri "Sifilizin serolojik teşhisinin iyileştirilmesi hakkında ".

Frengi laboratuvar tanısını iyileştirmek, iş kalitesini iyileştirmek ve daha fazla yaygınlaştırma sifiliz insidansı, sifiliz tanısında seroreaksiyonlar kompleksindeki (CSR) RSK'nın tarama ve doğrulama testleri olarak ELISA ve RPHA ile değiştirilmesi önerilir, t.to. bu test sistemleri son derece hassas, spesifik ve tekrarlanabilirdir.

26 Mart 2001 tarihli ve 87 sayılı "Sifilizin serolojik teşhisinin iyileştirilmesi üzerine", Rusya'da sifilizin serolojik ve beyin omurilik sıvısı teşhisi için aşağıdaki yöntemlerin kullanılmasını sağlar:

1. Sifiliz popülasyonunu incelerken tarama testleri olarak RMP ve yabancı analoglar (VDRL, RPR ve benzeri mikro reaksiyonlar). RMP, plazma veya inaktive edilmiş kan serumu ile gerçekleştirilir.
2. Enzim immünolojik testi (ELISA). Kültürlenmiş veya patojenik treponema pallidumdan antijen. İçki teşhisi de dahil olmak üzere teşhis reaksiyonları. Kurulum kolaylığı ve ticari test sistemlerinin mevcudiyeti nedeniyle, tarama testleri olarak kullanılabilirler.
3. Pasif hemaglütinasyon (RPHA) reaksiyonu. Kültürlenmiş veya patojenik treponema pallidumdan antijen. Seçim ve tanı reaksiyonları.
4. RIF'nin kalitatif ve kantitatif varyantları (RIF-abs, RIF-c, parmaktan kılcal kan ile RIF). Antijen - Nichols suşunun patojenik soluk treponeması.
5. Frengi için treponemal ve kardiyolipin antijenleri ile bir kompleman fiksasyon reaksiyonu (CFR) ve RMP'den oluşan bir serolojik reaksiyonlar (CSR) kompleksi. Kompleman fiksasyon reaksiyonunu ELISA veya RPHA ile de RMP ile kombinasyon halinde değiştirmek mümkündür. CSR, teşhis testlerini ifade eder.
6. Nichols suşunun patojenik treponema pallidumunun bir antijen olarak kullanıldığı soluk treponema immobilizasyon reaksiyonu (RIBT). RIBT'ler tanısal doğrulama testleridir.

Bu nedenle, sağlık kuruluşlarında sifiliz hastalarının muayene sırasının aşağıdaki gibi planlanması önerilir:

1. İlk muayene sırasında, mikro çökeltme (RMP) veya modifikasyonunun (RPR, GÜVEN, VDRL) bir seçim (tarama) reaksiyonu nicel ve nitel versiyonlarda ve pozitif bir sonuç olması durumunda, herhangi bir spesifik doğrulayıcı treponemal test ( RPHA, ELISA, CSR, RIF, RIT);

2. Tedavinin bitiminden sonra, RMP veya modifikasyonu yerleştirilir ve bulaşıcı sürecin dinamikleri ve tedavinin etkinliği, titredeki azalma ile değerlendirilir. Terapinin etkinliğinin bir teyidi, titrede 1 yıl içinde 4 veya daha fazla azalmadır.

Randevu ile resepsiyon! Cumartesi Pazar.

Serolojik testler nelerdir, neden yapılır, serolojik teşhisin ana yöntemleri nelerdir?

Serolojik çalışmalar, belirli bağışıklık reaksiyonlarına dayalı olarak, hastaların biyolojik materyalindeki antijenleri veya antikorları incelemeye yönelik yöntemlerdir. Biyolojik materyalde enfeksiyona neden olan ajana veya antijenlere karşı antikorların tespiti, hastalığın nedenini belirlemeyi mümkün kılar.

bulaşıcı hastalıkların tanısında %100 özgüllük ve duyarlılığa sahip değildir. Bu nedenle, sonuçları dikkate alınarak değerlendirilmelidir. klinik tablo hastalıklar. Bu, enfeksiyonu teşhis etmek için çeşitli testlerin yanı sıra yöntemlerin kullanımını gerektirir. batı lekesi tarama yöntemlerinin sonuçlarının doğrulanması.

“İmmünoblotlama (Western blot, Western-blot) aslında nihai bir laboratuvar sonucuna varmanızı sağlayan immünolojik çalışmalar zincirindeki son doğrulama (doğrulayıcı) yöntemidir. Bu test özellikle bulaşıcı bir hastalığı (örneğin boğmaca, borreliosis, vb.) doğrulamak veya reddetmek için önemlidir. Western blot genellikle tespitten sonra gereklidir pozitif antikorlar sınıf IgG bulaşıcı süreç, tk. bu kombinasyonda, sonuçların daha doğru bir laboratuvar yorumu ve hastayı tedavi etmenin daha ileri taktikleri ortaya çıkar. Western blot için, üzerine proteinlerin yatay ve ardından artan moleküler ağırlık sırasına göre dikey immünoforez ile aktarıldığı özel nitroselüloz şeritler kullanılır. Hastanın serum antikorları, şeridin belirli alanlarındaki proteinlerle etkileşime girer ve daha sonra reaksiyonun seyri, enzime bağlı immünosorbent testine (ELISA) benzer”,- açıklar Tıp Bilimleri Adayı, SYNEVO Ukrayna Laboratuvarı Tıbbi Direktörü, Oksana Vladislavovna Nebyltsova.

Serolojik testler için kullanılan biyolojik materyal

• Serum
• Tükürük
• Dışkı

Tanı koymak için hangi durumlarda serolojik testler kullanılır?

Serolojik çalışmaların amacı, hastanın iyileşmesinden sonra tedavinin etkinliğini belirlemek ve hastalığın nüksetmesini tespit etmektir. Ek olarak, serolojik yöntemler aşağıdaki gibi hastalıkları tespit edebilir:

• amoebiasis
• Giardiyaz
• Opisthorchiasis
• trişinoz
• Toksokariazis
• sistiserkoz
• ekinokokoz

Serolojik tanıda kullanılan başlıca yöntemler

İmmünofloresan reaksiyonu (RIF, Koons yöntemi)

Yöntemin çeşitleri:

Doğrudan: mikroplar veya doku antijenleri veya mikroplar, UV ışığı altında parlayan etiketli florokromların yanı sıra antikorlu özel serumlarla tedavi edilir. Bakteriler böylece hücre çevresinde yeşil bir sınır şeklinde parlar. floresan mikroskobu altında gözlemlendi.

Dolaylı: swablar, antimikrobiyal tavşan serum antikorları ile tedavi edilir. Daha sonra mikropların antijenlerine bağlanmayan antikorlar yıkanarak uzaklaştırılır. Böylece mikroplar üzerinde kalan antikorlar tespit edilir. Sonuç olarak, florokrom ile işaretlenmiş mikrop + anti-tavşan antikorları + antimikrobiyal tavşan antikorları kompleksi oluşur. Bu kompleks, bir floresan mikroskobu altında gözlenir.

Sonuçları değerlendirmek için, antijen hücrelerinin yüzey sarı-yeşil parıltısının yoğunluğu ile karakterize edilen dört noktalı bir ölçek vardır:

Çok zayıf hücre parlaması

Hücre çevresinin zayıf parıltısı

+++/++++ parlak hücre parlaması

Reaksiyon titresi, +++ veya ++++ reaksiyon sonucu olan bir serum seyreltisi olarak kabul edilir.

Dolaylı hemaglütinasyon reaksiyonu (RNG)

Pasif veya dolaylı hemaglütinasyon reaksiyonu şu durumlarda kullanılır: enfeksiyon teşhisi protozoa, bakteri ve riketsiyadan kaynaklanır.

Teknik birkaç aşamadan oluşur. Önce eritrositler işlenir, izotonik bir sodyum klorür çözeltisi ile "yıkanır", daha sonra gerekirse 1: 20.000 tanen çözeltisi ile "yıkanır", sonra çözünür antijenlerle duyarlı hale getirilir. Tamponlu izotonik sodyum klorür solüsyonu ile muameleden sonra antijen kullanıma hazırdır. Serum, izotonik sodyum klorür çözeltisi ile test tüplerinde seyreltilir, ardından seyreltilmiş her seruma bir eritrosit tanı maddesi eklenir.

Sonuçlar, eritrosit tortusunun doğasına göre değerlendirilir:

Zayıf yoğunluk

Ortalama yoğunluk

yoğun tepki

Keskin bir tepki

Pozitif bir sonuç, eritrositlerin test tüpünün tüm tabanını kapladığı yoğun bir reaksiyon +++ veya keskin bir yoğun reaksiyon ++++ olan bir reaksiyondur.

Enzim immunoassay (ELISA)

Yöntem, %90'dan fazla yüksek özgüllüğe ve duyarlılığa sahiptir. Ana avantaj, olasılıktır. enfeksiyon tespiti ve antikorların seviyesini gösteren sürecin dinamiklerini izlemek.

Test, aşağıdakiler dahil olmak üzere çok çeşitli enfeksiyonları teşhis etmek için kullanılır:

• HIV enfeksiyonu
• Viral hepatit
• sitomegalovirüs enfeksiyonu
• uçuk enfeksiyonu
• Toksoplazma enfeksiyonu

Yeni araştırmalara dayalı sağlıklı beslenme için yeni öneriler

Antijen veya antikor katı plakalar üzerine sabitlenir, ardından bir enzim etiketi kullanılarak antijen-antikor kompleksleri saptanır.

ELISA'nın diğerlerine göre bir takım avantajları vardır serolojik yöntemler. Reaksiyon en hassas olanıdır ve testlerde evrensel reaktifler kullanılır. Analiz hızlıdır, çeşitli sınıfların immünoglobulinlerini inceleme yeteneği. Şu anda, ELISA, laboratuvar teşhisinin ana yöntemlerinden biridir.

ELISA sonuçlarının değerlendirilmesi, özel cihazlar kullanılarak otomatik olarak gerçekleştirilir. Bazı durumlarda, reaksiyon sonuçlarının görsel bir açıklamasına da izin verilir. Serolojik tanının güvenilirliği, sonuçların kalitesini değerlendirmek için tasarlanmış çeşitli prosedürlerden oluşan laboratuvar kontrolünün organizasyonuna bağlıdır.