Biomaterjali määrdumise võtmine. Materjali kogumine, säilitamine ja tarnimine PCR-uuringute jaoks

Kogumise, ladustamise ja transportimise juhised

bioloogiline materjal laboriuuringuteks

Bioloogiline materjal peab olema märgistatud katseklaasides (konteinerites) ja kaasas peab olema täidetud individuaalne saatekiri ühes eksemplaris.

Saatekiri tuleb hoolikalt, loetavalt täita, märkides ära järgmised andmed: kuupäev, sondi number, biomaterjali uurimisele saatnud tervishoiuasutuse nimi, materjali võtnud arsti nimi; Patsiendi nimi, vanus ja sugu, esialgne diagnoos; raseduse ajal - rasedusaeg.

Bioloogilise materjali vastuvõtmine:

PCR ja immunokeemilised vereanalüüsid- Koos 09:00 enne 18:00 välja arvatud nädalavahetused ja pühad.

Bakterioloogilised uuringud- Koos 09:00 enne 11:00 välja arvatud reeded, nädalavahetused, pühad ja riigipühad.

patogeenide tuvastamiseks PCR abil

1.1.1. Biomaterjal võetakse mikroorganismide eeldatavast elupaigast ja nakkuse arengust.

1.1.2. Kogutud materjali kogus peaks olema väike. Liigne eritis, lima ja mäda kahjustavad DNA ekstraheerimise kvaliteeti ning aitavad kaasa DNA lagunemisele ladustamise ja transportimise ajal.

1.1.3. Patsiendilt vatitiku või harjaga sondiga võetud biomaterjali sisestamisel puhverlahusega Eppendorfi tuubi on vajalik:

Jälgige steriilsust;

Enne tampoonile (pintslile) kogutud biomaterjali lahusesse kastmist määrige see katseklaasi kuivale seinale, seejärel niisutage tampoon (pintsel) lahuses ja peske sondi pöörates ettevaatlikult kogu materjal katsutist maha. katseklaasi ja tampooni (harja) sein;


Võimalusel suruge tampooni vastu katseklaasi seina, eemaldage sond koos tampooniga (harjaga) ja sulgege katseklaas.

1.2. Meetodid biomaterjali võtmiseks PCR-uuringuks

1.2.1. Kraabid. Kraapimiseks kasutatakse ühekordselt kasutatavaid steriilseid sonde, millel on suurenenud adsorptsiooniga vatitups ehk “harjad”, harvem Volkmanni lusikad, väikesed kõrvalusikad vms veidi tömpide servadega instrumente. Kraapimisliigutused materjali kogumiseks. Uuritav materjal peaks sisaldama võimalikult palju epiteelirakke ning minimaalses koguses lima, verd ja eksudaadi lisandeid. Viige materjal puhverlahusega steriilsesse Eppendorfi katsutisse (vt punkt 1.1.).

Emakakaela kanalist kraapimine: enne kraapimist on vaja eemaldada liigne lima steriilse vatitupsuga, töödelda emakakaela steriilse soolalahusega. Sisestage sond emakakaela kanalisse 0,5-1,5 cm sügavusele, vältides kokkupuudet tupe seintega ja koguge materjal kraapiva liigutusega (mitte vereni). Väike hulk punaseid vereliblesid proovis ei mõjuta analüüsi tulemust. Emakakaela erosiooni korral võetakse materjal terve ja muutunud koe piirilt.

Ureetra kraapimine: sisestage sond ureetrasse (meestel - 2-4 cm sügavusele) ja koguge materjal mitme pöörleva liigutusega. Eelõhtul enne materjali võtmist on provokatsioon lubatud (vürtsikas toit, alkohol jne). Enne proovi võtmist on soovitatav hoiduda urineerimisest 1-2 tundi. Küllusliku olemasolul mädane eritis kraapimine tuleb teha hiljemalt 15 minutit pärast urineerimist.

Sidekesta kraapimine võtke pärast silma eelnevat tuimastamist 0,5% dikaiini lahusega. Pöörates silmalaugu, kasutage kogumiseks vatitikuga (või silmaskalpelliga) sondi epiteelirakud konjunktiivist.

Pärasoole kraapimine: sisestage sond pärakusse 3-4 cm sügavusele ja koguge materjal pöörleva liigutusega kokku.

1.2.2. Insuldid. Kasutage vatitiku või harjaga ühekordselt kasutatavat steriilset sondi, kasutades väikest kogust eritist (tupe võlvidest, neelust, ninaneelust jne) ja viige see puhverlahusega steriilsesse Eppendorfi katsutisse (vt jaotist). 1.1.).

1.2.3. Veri. PCR testimiseks peab veri olema emakeelena(pole kokku keeratud).

Koguge veri aseptiliselt, veenipunktsiooniga - kaubamärgiga katseklaasi (2-3 ml) EDTA antikoagulandiga ( hepariini ei tohi kasutada antikoagulandina!), segage ettevaatlikult, keerates toru ettevaatlikult ümber.

EDTA-ga veri on biomaterjal järgmistele uurimisrühmadele:

- geeniuuringud(vereproovi võtmise hetk ei oma tähtsust).

- nakkusetekitajate tuvastamine(kõige informatiivsemad on külmavärinate ajal võetud proovid, kõrgendatud temperatuur st arvatavasti vireemia või baktereemia ajal).

1.2.4. Uriin. Koguge hommikune esimene või keskmine uriinikogus vähemalt 10 ml tühja steriilsesse anumasse. Kui uriiniproovi võetakse päevasel ajal, siis enne seda ei tohi patsient urineerida 1,5-3 tundi.

1.2.5. Röga. Desinfitseerige hommikul suuõõne ja kõri (loputage söögisooda lahusega). Koguge röga tühja steriilsesse laia suuga viaali.


1.2.6. Biopsia. Materjal tuleks võtta nakkustekitaja väidetava asukoha tsoonist, kahjustatud koest või kahjustusega piirnevast piirkonnast. Asetage biopsia puhverlahusega steriilsesse Eppendorfi katsutisse.

1.2.7. sülg, maomahl, tserebrospinaalvedelik, sünoviaalvedelik. Sülg (1-5 ml), maomahl (1-5 ml), tserebrospinaalvedelik (1-1,5 ml) - asetage tühja steriilsesse katseklaasi (konteiner).

1.2.8. Eesnäärme mahl. Pärast eesnäärme massaaži kogutakse mahl 0,5-1 ml tühja steriilsesse katseklaasi (konteiner). Kui mahla ei ole võimalik saada, kogutakse kohe pärast massaaži esimene portsjon uriini koguses, mis ei ületa 10 ml (see osa sisaldab eesnäärme mahla).

1.2.9. Väljapesu, bronhoalveolaarne loputus (BAL). Steriilse vatitiku ja 5-7 ml soolalahusega pestakse näiteks endoskoobi või bronhoskoobi otsast ning 0,5-5 ml pesu pannakse tühja steriilsesse katsutisse (konteinerisse).

1.2.10. Väljaheited. Sisse asetatakse vatitikuga sond väljaheide ja keerake veidi, püüdes kinni väikese koguse materjali. Seejärel asetatakse materjal puhverlahusega steriilsesse Eppendorfi katsutisse.

1.3. PCR-uuringute jaoks bioloogilise materjali säilitamise reeglid

1.3.1. Tampoonid, kaabitsad:

Külmkapis (+4ºС - +8ºС) kuni 7 päeva;

Sügavkülmas (-20ºС) kuni 14 päeva (lubatud on ainult üks sulatus!).

1.3.2. Uriin: külmikus (+4ºС - +8ºС) mitte rohkem kui 1 päev;

1.3.3. Veri EDTA-ga: külmikus (+4ºС - +8ºС) - nakkusetekitajate määramiseks - mitte rohkem kui 1 päev; geeniuuringute jaoks - kuni 4 päeva. Külmutamine ei ole teema.

1.3.4. Röga

1.3.5. Biopsiad:

Külmkapis (+4ºС - +8ºС) mitte rohkem kui 1 päev,

Sügavkülmas (-20ºС) kuni 2 nädalat.

1.3.6. eesnäärme mahl: külmikus (+4ºС - +8ºС) mitte rohkem kui 1 päev.

1.3.7. sünoviaalvedelik: külmikus (+4ºС - +8ºС) mitte rohkem kui 1 päev.

2. Vere võtmise, säilitamise ja transportimise reeglid

immunokeemiliste uuringute jaoks

2.1.1. Vereproovide võtmise eelõhtul välistage füüsiline harjutus, stressiolukorrad, füsioterapeutilised protseduurid, vastuvõtt ravimid(välja arvatud juhtudel uimastiravi arsti poolt välja kirjutatud), suukaudsed rasestumisvastased vahendid, alkohoolsed joogid ja rasvased toidud. Ärge suitsetage vahetult enne uuringut.

2.1.2. Funktsiooni uurimisel kilpnääre kilpnäärmehormoone sisaldavate ravimitega ravi ajal viiakse uuring läbi 24 tundi pärast ravimi viimast annust; 2-3 päeva enne vere võtmist välistage joodi sisaldavate ravimite kasutamine.

2.1.3. PSA-d uurides nädal enne analüüsi, välistage kõik manipulatsioonid eesnäärmega.

2.1.4. Veri võetakse hommikul tühja kõhuga (et vältida tšilli, st seerumi hägusust) füsioloogilise puhkuse tingimustes. Enne vere võtmist tuleb patsiendile anda 15-minutiline puhkus.

2.1.5. Vereproovide võtmine toimub raviasutuse raviruumis, patsiendi asendis "istub" või "lamab" kubitaalveenist, järgides aseptika ja antisepsise reegleid. Veri kogutakse steriilsesse katsutisse, monosüstlasse või verevõtusüsteemi (Vacutainer®, Vacuette®).

2.1.6. Seerumi saamiseks settib venoosne veri kuni täieliku hüübimiseni. Pärast fibriini trombi moodustumist eraldatakse viimane seintest steriilse klaaspulgaga, iga proovi jaoks rangelt individuaalne, tuubi tsentrifuugitakse kiirusel 3000 p / min 15 minutit. * .

* Monosüstal ja verevõtusüsteemid (Vacutainer®, Vacuette®) tsentrifuugitakse ilma eelneva manipuleerimiseta.

2.1.7. Supernatant kollast värvi(seerum) pipeteeritakse ettevaatlikult tühja korgiga katsutisse (5 ml).

2.2. Vere ja vereseerumi säilitamise reeglid immunokeemiliste uuringute jaoks

2.2.1. Tovallikraav: külmikus (+40C - +80C) 1 päev.

2.2.2.Seerumveri:

Külmkapis temperatuuril + 40 ° C - + 80 ° C 4 päeva;

Sügavkülmas -200C juures 2 nädalat.

Lubatud on ainult üks sulatus!

TÄHELEPANU! Uuritakse seerumit, mis ei sisalda erütrotsüütide, bakterite kasvu, küloosi, hemolüüsi lisandeid. Nende nähtude esinemisel seerum hävitatakse ja määratakse korduv vereproov.

2.3. Vere võtmise ja säilitamise reeglid luupuse antikoagulandi uurimiseks

ja hüübimisuuringud

2.3.1. Veri võetakse hommikul tühja kõhuga kubitaalveenist, järgides uuringupäeval aseptika ja antisepsise reegleid. Vere hüübimise aktiveerimise vältimiseks ei tohi veeni kokkusurumine kesta kauem kui 1 minut .

2.3.2. Kui uuring on ette nähtud vere hüübimist mõjutavate ravimite võtmise taustal, tuleb see suunata.

2.3.3. Veri kogutakse spetsiaalsesse torusse, mis sisaldab naatriumtsitraat, kuni märgini. Kui seda reeglit ei järgita, muutub vere/antikoagulandi suhe, mis võib negatiivselt mõjutada tulemuse täpsust.

2.3.4. 1 tunni jooksul pärast vere võtmist tuleb katseklaasi tsentrifuugida kiirusel 3000 p/min 15 minutit.

2.3.5. Plasma säilitamine: +40C - +80C juures kuni 6 tundi või -200C juures kuni 2 nädalat.

2.4. Vere võtmise ja säilitamise reeglid glükeeritud (glükosüülitud) hemoglobiini uurimiseks

2.4.1. Veri võetakse hommikul tühja kõhuga kubitaalveenist, järgides aseptika ja antisepsise reegleid.

2.4.2. Veri kogutakse spetsiaalsesse EDTA-d sisaldavasse katsutisse, segatakse õrnalt. Ärge tsentrifuugige!

2.4.3. Laborisse toimetamine vereproovi võtmise päeval.

2.4.4. Säilitamine: kuni 2 nädalat -200C juures.

2.5. Sünnituseelse sõeluuringu reeglid

2.5.1. Optimaalne ajastus uuringu läbiviimine: I trimester - 10-13 rasedusnädalat; II trimester - 16-18 rasedusnädalat.

2.5.2. Uuringule viidates täidetakse spetsiaalne suund, milles on vaja märkida raseda naise individuaalsed andmed: vanus (kuupäev / kuu / aasta), kaal, ultraheli tulemused (KTR, BDP, loodete arv, rasedusaeg ultraheli järgi (nädalad + päevad); olemasolul andmed kaelavoldi suuruse kohta - NT) koos kohustusliku ultraheliuuringu kuupäeva ja ultraheli teostanud arsti nimega; täiendavad riskitegurid (suitsetamine, diabeet, IVF), etniline kuuluvus.

2.5.3. Raseduse teise trimestri sõeluuringuks saate kasutada esimesel trimestril tehtud ultraheliuuringu andmeid.

3. Biomaterjali võtmise, ladustamise ja transportimise reeglid

bakterioloogiliste uuringute jaoks

3.1. Biomaterjal võetakse enne antibiootikumiravi alustamist või mitte vähem kui nädal pärast selle lõppu.

3.2. Vältimaks proovi saastumist väliskeskkonnast mikroorganismidega, viiakse võetud biomaterjal standardsete steriilsuse reeglite kohaselt transpordisöötmega tühja anumasse või katseklaasi: katseklaasi (anuma) kork avatakse / suletud, et korgi sisemus jääks steriilseks, steriilseid klaasnõusid ei hoita kaua lahti.

3.3. Biomaterjali võtmine tuvastamiseks mükoplasmad ja ureaplasmad, trihhomonaadid, gonokokid, mittespetsiifiline mikrofloora, põllukultuurid anaeroobsed bakterid toodetud kaubamärgiga katseklaasides süsiniku transpordikeskkonnaga:

Avage pakend näidatud kohas vastavalt skeemile;

Eemaldage ja avage katseklaas, visake kork ära;

Kasutage sondi, et võtta kraapimine/tampooniproov, biopsia või kasta sond bioloogilisse vedelikku;

Asetage sond koos biomaterjaliga kohe katseklaasi (sondi käepide on katseklaasi kork);

Nummerdage katseklaas, märkige number suunas.

3.4. Transpordisöe keskkonda viimiseks mõeldud bioloogilise materjali tüübid: määrdumised/kraapimised, eesnäärmemahl, tserebrospinaalvedelik, sünoviaalvedelik, biopsia.

3.5. Biomaterjali säilitamine katseklaasides koos transpordikeskkonnaga tuvastamiseks mükoplasmad ja ureaplasmad, mittespetsiifiline mikrofloora kuni transpordi hetkeni -

Tarne laborisse ühe päeva jooksul.

3.6. Biomaterjali säilitamine katseklaasides koos transpordikeskkonnaga tuvastamiseks Trihhomonaadid, gonokokid, anaeroobsete bakterite kultuurid kuni transpordi hetkeni - toatemperatuuril.

3.7. Looduslik biomaterjal: röga, eesnäärme mahl, sünoviaalvedelik 1–10 ml mittespetsiifilise mikrofloora tuvastamiseks kogutakse mükoplasmad ja ureaplasmad tühja steriilsesse anumasse.

Laborit on vaja teavitada biomaterjali võtmise eelõhtul või päeval enne kella 11:00.

Loodusliku biomaterjali säilitamine kuni transportimiseni - külmkapis (+4ºС - +8ºС).

Proovivõtupäeval laborisse toimetamine.

3.8. Uriin bakteriuuria määra määramiseks(hommikune keskmine portsjon, 10-20 ml) kogutakse pärast välissuguelundite põhjalikku tualetti tühja steriilsesse kaanega anumasse.

Laborit on vaja teavitada biomaterjali võtmise eelõhtul või päeval enne kella 11:00.

Biomaterjali säilitamine kuni transportimiseni - külmkapis (+4ºС - +8ºС).

Laborisse toimetamine biomaterjali võtmise päeval.

3.9. Veri steriilsuse tagamiseks.

Kõige informatiivsem on temperatuuri tõusu ajal võetud vereproov.

Veri kogutakse kaubamärgiga pudelitesse kahefaasilise transpordivahendiga (pudel täiskasvanutele, pudel lastele). Avage ettevaatlikult pudeli plastkork, pühkige kummikorgi ilmunud osa 70% alkoholiga. Steriilsetes tingimustes võtke süstlaga veenist verd ja süstige läbi kummikorgi viaali (4 ml - viaali täiskasvanutele, 2 ml - viaali lastele).

Laborit on vaja teavitada biomaterjali võtmise eelõhtul või päeval enne kella 11:00.

Vere säilitamine kuni transpordini - toatemperatuuril.

Laborisse toimetamine biomaterjali võtmise päeval.

3.10. Rinnapiim mittespetsiifilise mikrofloora tuvastamiseks võetakse see igast rinnast eraldi steriilsesse hermeetiliselt suletud tassi. Tassidele allkiri: “vasak rind”, “parem rind”.

Enne biomaterjali kogumist peske rindkere sooja vee ja seebiga, pühkige see puhta rätikuga, töödelge nibusid ja peripapillaarset piirkonda hoolikalt 70% etanoolilahuses niisutatud vatitupsuga, kuivatage steriilse salvrätikuga (iga nääre on töödeldud eraldi tampooniga). Esimesed 10-15 ml pressitud piima analüüsiks ei kasutata. Valage igast rinnast teine ​​portsjon piima allkirjaga tassi koguses ~ 10 ml.

Laborit on vaja teavitada biomaterjali võtmise eelõhtul või päeval enne kella 11:00.

Laborisse tarnimine materjali võtmise päeval 2 tunni jooksul.

3.11. Väljaheited düsbakterioosi korral.

Enne proovi võtmist on keelatud juua alkoholi 3 päeva ja võtta antibiootikume 2 nädalat. Tool tuleb hankida ilma klistiiri ja lahtistiteta. Kõhukinnisusega lapsed võivad ärritava toime saavutamiseks kasutada seepi. Väljaheited kogutakse eraldi anumasse, pestakse desinfitseerimisvahendist. Steriilse lusikaga võetakse 3-5 g keskmisest osa väljaheitest ja asetatakse steriilsesse anumasse.

Laborit on vaja teavitada biomaterjali võtmise eelõhtul või päeval enne kella 11:00.

Säilitamine kuni transportimise hetkeni - säilita biomaterjaliga konteiner soojas hoidmiseks vati ja paberisse mähituna.

Laborisse toimetamine biomaterjali võtmise päeval.

4. Biomaterjali võtmise, ladustamise ja transportimise reeglid

mikroskoopilisteks uuringuteks

4.1. Igalt patsiendilt 2 klaasi(üks klaas on taga). Igal klaasil 3 punkti: vagiina ( V), emakakaela kanal ( FROM), kusiti ( U). Tehke lööke nii, et mattpind oleks vasakul, peal ja sellest - vasakult paremale: v, c, u.

4.2. Klaasil olev märgistus (nr.) ei tohiks alkoholis lahustuda (klaasi jäätunud osale saab allkirjastada lihtsa pliiatsiga). Määrdused tuleb fikseerida õhu käes kuivatamisega (30-60 min).

4.3. Klaasid peavad olema märgistatud, üksteise külge määrdumisega kokku pandud, pakendatud individuaalsesse kotti, millel on vastav kiri (tervisekeskus, patsiendi täisnimi, klaasil olev nr.).

4.4. Pakk ja täidetud saatekiri saadetakse Laborisse.

5. Biomaterjali võtmise, ladustamise ja transportimise reeglid

5.1. 24 tunni jooksul enne uuringut on vaja välistada douching, intravaginaalne ravi ja seksuaalvahekord. Te ei saa materjali menstruatsiooni ajal võtta. Kõige informatiivsemad on proovid, mis on võetud 14-20 päeva pärast menstruatsiooni algust.

5.2. Materjal võetakse enne bimanuaalset uuringut, erinevaid diagnostilisi teste, enne materjali võtmist PCR-i jaoks. Materjal võetakse ilma eeltöötlus tupe limaskest.

5.3. Kraapimine tupe/emakakaela limaskestalt võetakse nailonist Cervex-Brushi, spaatli või muu instrumendiga ja jaotatakse ühtlaselt üle alusklaasi, jättes objektiklaasi ühe otsa puhtaks (märgistamiseks). Klaasile võetakse üks punkt, dubleeritakse veel ühe varuklaasi jaoks (punkti kohta ainult kaks klaasi). Määrdused tuleb fikseerida õhu käes kuivatamisega (30-60 min).

5.4. Prillid peavad olema märgistatud (Nr ja patsiendi täisnimi), üksteise külge määrdumistega kokku volditud, pakendatud individuaalsesse kotti, millel on vastav kaasasolev kiri (HCI, patsiendi täisnimi, klaasil nr.).

5.5. Kuivatatud määrdeid säilib toatemperatuuril kuni 6 päeva.

5.6. Pakett ja täidetud saatekiri (iga punkti kohta üks saatekiri, mis näitab ära biomaterjali tüübi) viiakse Laborisse.

Ärge pange suunda klaaskotti, ärge mähkige klaasi suunas!

Kliinilise laboratoorse diagnostika osakond FPC ja PC kursusega

Kliinilise laboridiagnostika distsipliini sektsioonide loetelu, et valmistuda 6. kursuse kaugõppe üliõpilaste talvisel laboratoorsel eksamil sooritatavateks katseteks.

1. Kliinilise diagnostika labori organisatsiooniline struktuur.

2. Üldised kliinilised laboratoorsed uuringud.

3. Hematoloogilised laboratoorsed uuringud.

4. Laboratoorsed meetodid hemostaasi hindamine.

5. Biokeemilised laboriuuringud.

6. Laboratoorsete uuringute kvaliteedikontroll.

Kliinilise laboridiagnostika distsipliini kontrollküsimuste loetelu, et valmistuda 6. kursuse kaugõppes õppijate talvisel labori-eksami sessioonil auditoorsete testide läbiviimiseks.

    Kliinilise diagnostika labori struktuurne korraldus.

    Valgevene Vabariigi tervishoiuministeeriumi normdokumendid ja korraldused, mis reguleerivad kliinilise diagnostika labori tööd.

    Kliinilise diagnostika laboriseadmed.

    Kliinilise diagnostika labori peamised mõõte- ja analüüsiseadmed.

    Ohutusabinõude alused ning sanitaar- ja epidemioloogilise režiimi reeglid kliinilises diagnostikalaboris töötamisel.

    Bioloogilise materjali võtmise, kohaletoimetamise, vastuvõtmise, töötlemise ja registreerimise eeskirjad.

    Üldised kliinilised laboriuuringud.

    Patsiendi ettevalmistamine materjali uurimiseks, kogumiseks, säilitamiseks ja töötlemiseks üldine analüüs uriin.

    Uriini füüsikalised omadused: värvus, läbipaistvus, lõhn, pH, uriini suhteline tihedus.

    Uriini keemilised omadused, üldvalgu määramise meetodid (kvalitatiivsed ja kvantitatiivsed meetodid, "kuiva keemia" meetodid).

    Glükoosi määramine uriinis indikaatorpaberi ja glükoosoksüdaasi meetodil.

    Kusesetete natiivse preparaadi valmistamise reeglid.

    Organiseeritud uriinisetete elementide kvantitatiivne määramine.

    Korraldamata setete elementide määramine.

    Organiseerimata sademete liigid.

    Üldine kliiniline vereanalüüs.

    Meetodite omadused ESRi määratlused, hemoglobiini kontsentratsioon, erütrotsüütide arv, värviindeks, leukotsüüdid ja leukotsüütide valem.

    Patsiendi ettevalmistamise, proovide võtmise, säilitamise ja materjali töötlemise reeglid kliiniline analüüs veri.

    Perifeerse vere erütrotsüütide ja leukotsüütide taseme füsioloogiliste kõikumiste normaalväärtused ja piirid.

    Gorjajevi kambris ettevalmistuse ettevalmistamise ja loendamise reeglid.

    Meetod vere hemoglobiini määramiseks hemoglobiintsüaniidi meetodil.

    Kaasaegne luuüdi hematopoeesi kontseptsioon.

    Leukotsüütide protsent perifeerses veres. Leukotsüütide valemi diagnostiline väärtus.

    Laboratoorsed uuringud, mis iseloomustavad vere hüübimissüsteemi.

    Vere hüübimissüsteemi mõiste.

    primaarne hemostaas. Laboratoorsed meetodid primaarse hemostaasi uurimiseks.

    Koagulatsiooni hemostaasi faasid.

    fibrinolüüs.

    antikoagulantide süsteem.

    Sekundaarse hemostaasi hindamise laboratoorsed meetodid.

    Laboratoorsed uuringud, mis iseloomustavad biokeemilised parameetrid veri.

    Valkude metabolismi iseloomustavad laboratoorsed näitajad. Üldvalgu määramine vereseerumis biureedi meetodil.

    Jääklämmastik ja selle komponendid. Karbamiidi, kreatiniini, kusihappe määramise meetodid.

    Ensüümide uurimise meetodid. Ensüümide aktiivsuse määramise kliiniline ja diagnostiline väärtus.

    Süsivesikute bioloogiline roll. Glükoosisisalduse määramine ensümaatilisel meetodil.

    Plasma lipoproteiinid. Lipiidide metabolismi laboratoorsed näitajad.

    Sapipigmentide teke ja ainevahetus. Pigmendi ainevahetuse näitajate uurimise kliiniline ja diagnostiline tähendus.

    Kliiniliste laboratoorsete uuringute analüütiline usaldusväärsus ja kvaliteedikontroll.

    Laboratoorsete tulemuste analüütiline hindamine. Vigade liigid, nende omadused.

    Laborisisene kvaliteedikontroll. Uurimistulemuste reprodutseeritavuse jälgimise meetodid. Uuringu tulemuste õigsuse kontroll.

Cjättes analüütilise labori järelduse.

Analüütiline labori järeldus koostatakse vastavalt olukorraprobleemi tingimustele.

Kavandatavate laboriandmete analüüsi põhjal tuleks vastata järgmistele küsimustele:

Analüüsitava meetodi aluseks olev põhimõte;

Vajalik varustus;

Katsematerjali koostamise reeglid ja selle meetodi teostamisel võimalikud peamised vigade allikad;

Ühikud;

Referentsväärtuste mõiste. Analüüsitud meetodi kliiniline ja diagnostiline väärtus.

Praktilised oskused:

Laboratoorsete uuringute töökoha korraldamine;

Reaktiivide valmistamine vajalikus kontsentratsioonis;

Bioloogilise materjali vastuvõtt, märgistamine ja ladustamine;

Üldise vereanalüüsi läbiviimine;

Üldise uriinianalüüsi läbiviimine;

Hemostasioloogilise uuringu läbiviimine;

Biokeemiliste uuringute läbiviimine;

Laboratoorsete uuringute tulemuste registreerimine;

Otsuse konkreetse lokalisatsiooni (tupe, ureetra, emakakaela kanal jne) analüüsimiseks läbivaatamise vajaduse kohta teeb raviarst lähtudes patsiendi kaebuste (ta) ja kaebuste koguarvust. kliiniline pilt objektiivse tulemuse saamiseks on vajalik, et uuritav kliiniline materjal sisaldaks võimalikult palju epiteelirakke ning minimaalses koguses lima ja vere lisandeid (lubatud on lisandite mõõdukas esinemine vere ja lima kujul). Biomaterjali ebaõige proovide võtmine võib põhjustada usaldusväärse tulemuse saamise võimatuse ja selle tulemusena vajaduse uuesti võtta biomaterjal.

Kliinilise materjali võtmise protseduur koos transpordikeskkonnaga katseklaasi:

1. Avage viaali kork.

2. Kasutage ühekordselt kasutatavat steriilset sondi, eemaldage vastav tühjendus

biotoop (tupp, kusiti, emakakaela kanal).

3. Viige sond koos kliinilise materjaliga 1,5 ml transpordisöötmega katsutisse, kui sond tabab toru põhja, painutage sondi õhuke osa lisajõuga sälku, seejärel murdke see ära ja jätke sond. Vajadusel hankige kliinilist materjali mitmest biotoopist korrake protseduuri, võttes iga kord kliinilise materjali uue sondiga uude katsutisse.

3. Sulgege toru tihedalt kaanega, märkige see ära.

Emakakaela kanali kliinilise materjali võtmise tunnused:

1. Emakakaela kanali kliiniline materjal saadakse pärast ureetra sondi või emakakaela tsütoharja (HPV-testimiseks on vaja piisaval hulgal epiteelirakke!) abil speolum tuppe.

2. Enne kliinilise materjali võtmist on vaja emakakaela kanali ava hoolikalt töödelda steriilse marli tampooniga ja seejärel töödelda emakakaela steriilse soolalahusega.

3. Pärast ureetra sondi sisestamist 1,5 cm võrra emakakaela kanalisse pööratakse seda mitu korda (2-3 täispööret päripäeva) ja eemaldatakse. Sondi eemaldamisel on vaja täielikult välistada selle kokkupuude tupe seintega.

4. Saadud kliiniline materjal asetatakse katseklaasi koos transpordisöötmega (vt eespool).

Kliinilise materjali tupest võtmise tunnused:

Uuringu päeval ei tohiks naised suguelundeid tualetti panna ega tuppe dušitada.

1. Tupest pärit kliiniline materjal saadakse tupe- või ureetrasondi abil tagumisest või lateraalsest forniksist, kraapides epiteeli pinnalt.

2. Kliiniline materjal tuleb hankida ENNE käsitsi läbivaatust.

3. Enne manipuleerimist võib günekoloogilist täppi niisutada sooja veega, antiseptikumide kasutamine täppide ravimisel on vastunäidustatud.

4. Tüdrukutel (neitsi) saadakse kliiniline materjal tupe vestibüüli limaskestalt ilma günekoloogilist täppi kasutamata.

5. Saadud kliiniline materjal asetatakse katseklaasi koos transpordisöötmega (vt eespool).

Naiste kusiti kliinilise materjali võtmise tunnused:

1. Ureetra kliiniline materjal saadakse ureetra sondi abil.

2. Enne kliinilise materjali võtmist soovitatakse patsiendil hoiduda urineerimisest 1,5-2 tundi.

3. Kui kusiti voolus on vaba, tuleb ureetra välimine avaus puhastada vatitikuga.

4. Vaba sekretsiooni puudumisel võib teha ureetra kerge massaaži.

5. Pärast instrumendi sisestamist ureetrasse 1 cm sügavusele on vaja see edasi lükata välisavasse, vajutades kergelt kusiti taga- ja külgseinu (pöörlevad liigutused on valusad).

6. Saadud kliiniline materjal asetatakse katseklaasi koos transpordisöötmega (vt eespool).

Mitmest biotoopist saadud materjali uurimiseks korratakse protseduuri, kasutades iga kord uut steriilset sondi ja uut katseklaasi!!!

Emakakaelakanalist, tupesisu ja ureetra materjali segamine ühes torus on vastuvõetamatu!

Meeste kusiti kliinilise materjali võtmise tunnused:

1,5-2 tundi. Meeste urogenitaaltrakti mikrofloora koostise määramise tulemuste moonutuste välistamiseks urogenitaaltrakti mööduva mikrofloora esinemise tõttu on kolm päeva enne biomaterjali võtmist soovitatav seksuaalne karskus või kaitstud seksuaalkontakti kasutamine.

1. Enne kusiti kraapimist töödeldakse peenisepead ureetra välisava piirkonnas steriilse soolalahusega niisutatud tampooniga.

2.Masseerige kusiti. Ureetrast vabalt voolavate eritiste juuresolekul eemaldatakse need kuiva tampooniga.

3. Sond sisestatakse ureetrasse 1-2 cm sügavusele.Mitme pöörleva liigutusega tehakse epiteelirakkude kraapimine ning sond viiakse koos transpordisöötmega katseklaasi, murtakse ära ja jäetakse. Eemaldatavat võetakse piisavas koguses. Lisandite mõõdukas esinemine lima, vere ja mäda kujul on vastuvõetav.

Kliinilise materjali võtmine Koospeenise eesnahk (HRP):

Enne biomaterjali võtmist soovitatakse patsiendil hoiduda urineerimisest

1,5-2 tundi.

1. Ühekordse sondi abil tehakse epiteelirakkude kraapimine vastavast biotoopist ( eesnahk peenisepea, eesnahakott) ja viia sond koos transpordisöötmega katseklaasi, katkestada ja lahkuda.

Biomaterjali ladustamise ja transportimise tingimused:

1. Vastuvõetud kliinilise materjaliga tuubid peavad olema märgistatud.

2. Kaasdokument-juhisesse tuleb märkida: täisnimi, patsiendi(te) vanus, kliiniline materjal, kavandatav diagnoos, näidustused uuringuks, proovide võtmise kuupäev ja kellaaeg, saatva asutuse (osakonna) nimi. kliiniline materjal.

3. Kui kliinilise materjali transportimise aeg selle võtmise hetkest kuni laborisse toimetamiseni ei ole pikem kui päev, siis tuleb kliinilise materjaliga katseklaasi säilitada ja laborisse toimetada temperatuuril. kodukülmikust (+ 4 + 10 ° C), külmutamata.

4. Kui kliinilist proovi ei ole võimalik ööpäeva jooksul laborisse toimetada, on kliinilise materjali proovi ühekordne külmutamine ja säilitamine temperatuuril -20°C kuni üks kuu.

Biomaterjali võtmise, ladustamise ja transportimise reeglid

Patogeenide tuvastamiseks PCR abil

1.1.1. Biomaterjal võetakse mikroorganismide eeldatavast elupaigast ja nakkuse arengust.

1.1.2. Kogutud materjali kogus peaks olema väike. Liigne eritis, lima ja mäda kahjustavad DNA ekstraheerimise kvaliteeti ning aitavad kaasa DNA lagunemisele ladustamise ja transportimise ajal.

1.1.3. Patsiendilt vatitiku või harjaga sondiga võetud biomaterjali sisestamisel puhverlahusega Eppendorfi tuubi on vajalik:

Jälgige steriilsust;

Enne tampoonile (pintslile) kogutud biomaterjali lahusesse kastmist määrige see katseklaasi kuivale seinale, seejärel niisutage tampoon (pintsel) lahuses ja peske sondi pöörates ettevaatlikult kogu materjal katsutist maha. katseklaasi ja tampooni (harja) sein;

Võimalusel suruge tampooni vastu katseklaasi seina, eemaldage sond koos tampooniga (harjaga) ja sulgege katseklaas.

Meetodid biomaterjali võtmiseks PCR-uuringuks

1.2.1. Kraabid. Kraapimiseks kasutatakse ühekordselt kasutatavaid steriilseid sonde, millel on suurenenud adsorptsiooniga vatitups ehk “harjad”, harvem Volkmanni lusikad, väikesed kõrvalusikad vms veidi tömpide servadega instrumente. Kraapimisliigutused materjali kogumiseks. Uuritav materjal peaks sisaldama võimalikult palju epiteelirakke ning minimaalses koguses lima, verd ja eksudaadi lisandeid. Viige materjal puhverlahusega steriilsesse Eppendorfi katsutisse (vt punkt 1.1.).

Emakakaela kanalist kraapimine: enne kraapimist on vaja eemaldada liigne lima steriilse vatitupsuga, töödelda emakakaela steriilse soolalahusega. Sisestage sond emakakaela kanalisse 0,5-1,5 cm sügavusele, vältides kokkupuudet tupe seintega ja koguge materjal kraapiva liigutusega (mitte vereni). Väike hulk punaseid vereliblesid proovis ei mõjuta analüüsi tulemust. Emakakaela erosiooni korral võetakse materjal terve ja muutunud koe piirilt.

Ureetra kraapimine: sisestage sond ureetrasse (meestel - 2-4 cm sügavusele) ja koguge materjal mitme pöörleva liigutusega. Eelõhtul enne materjali võtmist on provokatsioon lubatud (vürtsikas toit, alkohol jne). Enne proovi võtmist on soovitatav hoiduda urineerimisest 1-2 tundi. Rohke mädaerituse korral tuleb kraapimine teha hiljemalt 15 minutit pärast urineerimist.

Sidekesta kraapimine võtke pärast silma eelnevat tuimastamist 0,5% dikaiini lahusega. Pärast silmalau pööramist kasutage vatitikuga (või silma skalpelliga) sondi, et koguda sidekesta epiteelirakud.

Pärasoole kraapimine: sisestage sond pärakusse 3-4 cm sügavusele ja koguge materjal pöörleva liigutusega kokku.

1.2.2. Insuldid. Kasutage vatitiku või harjaga ühekordselt kasutatavat steriilset sondi, kasutades väikest kogust eritist (tupe võlvidest, neelust, ninaneelust jne) ja viige see puhverlahusega steriilsesse Eppendorfi katsutisse (vt jaotist). 1.1.).

1.2.3. Veri. PCR testimiseks peab veri olema emakeelena(pole kokku keeratud).

Koguge veri aseptiliselt, veenipunktsiooniga - kaubamärgiga katseklaasi (2-3 ml) EDTA antikoagulandiga ( hepariini ei tohi kasutada antikoagulandina!), segage ettevaatlikult, keerates toru ettevaatlikult ümber.

EDTA-ga veri on biomaterjal järgmistele uurimisrühmadele:

- geeniuuringud(vereproovi võtmise hetk ei oma tähtsust).

- nakkusetekitajate tuvastamine(Kõige informatiivsemad on külmavärinate, kõrgendatud temperatuuri, s.t arvatavasti vireemia või baktereemia ajal võetud proovid).

1.2.4. Uriin. Koguge hommikune esimene või keskmine uriinikogus vähemalt 10 ml tühja steriilsesse anumasse. Kui uriiniproovi võetakse päevasel ajal, siis enne seda ei tohi patsient urineerida 1,5-3 tundi.

1.2.5. Röga. Hommikul desinfitseerige suu ja kõri (loputage söögisooda lahusega). Koguge röga tühja steriilsesse laia suuga viaali.

1.2.6. Biopsia. Materjal tuleks võtta nakkustekitaja väidetava asukoha tsoonist, kahjustatud koest või kahjustusega piirnevast piirkonnast. Asetage biopsia puhverlahusega steriilsesse Eppendorfi katsutisse.

1.2.7. Sülg, maomahl, tserebrospinaalvedelik, sünoviaalvedelik. Sülg (1-5 ml), maomahl (1-5 ml), tserebrospinaalvedelik (1-1,5 ml) - asetage tühja steriilsesse katseklaasi (konteiner).

1.2.8. Eesnäärme mahl. Pärast eesnäärme massaaži kogutakse mahl 0,5-1 ml tühja steriilsesse katseklaasi (konteiner). Kui mahla ei ole võimalik saada, kogutakse kohe pärast massaaži esimene portsjon uriini koguses, mis ei ületa 10 ml (see osa sisaldab eesnäärme mahla).

1.2.9. Väljapesu, bronhoalveolaarne loputus (BAL). Steriilse vatitiku ja 5-7 ml soolalahusega pestakse näiteks endoskoobi või bronhoskoobi otsast ning 0,5-5 ml pesu pannakse tühja steriilsesse katsutisse (konteinerisse).

1.2.10. Väljaheited. Väljaheite sisse asetatakse vatitikuga sond ja seda veidi pööratakse, püüdes kinni väikese koguse materjali. Seejärel asetatakse materjal puhverlahusega steriilsesse Eppendorfi katsutisse.



Optimaalne aeg vereanalüüsid - vahemikus 1 kuni 4 tundi pärast võtmist Vahemikus 5 kuni 30 minutit toimub trombotsüütide ajutine kohanemine antikoagulandiga ja nende agregatsioon, mis võib viia nende vereproovi vale vähenemiseni.

Ei ole soovitav verd uurida hiljem kui 8 tundi pärast võtmist, sest. mõned rakkude omadused muutuvad: leukotsüütide maht väheneb, erütrotsüütide maht suureneb, mis lõppkokkuvõttes toob kaasa ekslikud mõõtmistulemused ja tulemuste ebaõige tõlgendamise. Vere säilitamise päeva jooksul püsivad stabiilsed ainult hemoglobiini kontsentratsioon ja trombotsüütide arv.

Verd ei saa külmutada. K 2 EDTA-ga kapillaarverd tuleb hoida toatemperatuuril ja analüüsida 4 tunni jooksul pärast kogumist.

Uuringute kvalitatiivse tulemuse tagamiseks on vaja enne analüüsi rangelt kontrollida proovide säilitamise aega ja tingimusi.

Kui on vaja teha hilinenud analüüs (transport pikkadel vahemaadel, seadme tehniline rike jne), hoitakse vereproove külmkapis (4 o - 8 o C) ja uuritakse 24 tunni jooksul. Siiski tuleb arvestada, et rakud paisuvad ja nende mahuga seotud parameetrid muutuvad. Praktiliselt terved inimesed need muutused ei ole kriitilised ega mõjuta kvantitatiivseid parameetreid, kuid patoloogiliste rakkude olemasolul võivad viimased muutuda või isegi kokku kukkuda mõne tunni jooksul alates vereproovi võtmise hetkest.

Vahetult enne uuringut tuleb verd mitu minutit põhjalikult segada, et lahjendada antikoagulant ja jaotada moodustunud elemendid plasmas ühtlaselt. Proovide pikaajaline pidev segamine kuni nende uurimise hetkeni ei ole soovitatav patoloogiliste rakkude võimaliku vigastuse ja lagunemise tõttu.

Vereanalüüs automaatse analüsaatoriga tehakse toatemperatuuril. Külmkapis säilitatav veri tuleb esmalt soojendada toatemperatuurini, kuna madalal temperatuuril suureneb vere viskoossus ja vererakud kipuvad kokku kleepuma, mis omakorda toob kaasa segunemise halvenemise ja mittetäieliku lüüsi. Külma vere uurimine võib leukotsüütide histogrammi kokkusurumise tõttu põhjustada "häiresignaalide" ilmumist.

Hematoloogiliste uuringute tegemisel vereproovi võtmise kohast märkimisväärsel kaugusel tekivad paratamatult probleemid, mis on seotud ebasoodsate transporditingimustega. Analüüside kvaliteeti võivad mõjutada mehaanilised tegurid (raputamine, vibratsioon, segunemine jne), temperatuuritingimused, lekke tõenäosus ja proovide saastumine. Nende põhjuste kõrvaldamiseks on veresontide transportimisel soovitatav kasutada hermeetiliselt suletud plasttorusid ja spetsiaalseid isotermilisi transpordikonteinereid. Transpordi ajal ei ole proovi (natiivse materjaliga) ja saatelehe kokkupuude bioloogilise ohutuse reeglite kohaselt lubatud.

^ 4.3. Bioloogilise materjali vastuvõtt ja registreerimine

Venoosse vereproovidega tuubid toimetatakse laborisse nende võtmise päeval spetsiaalsetes bioloogilise materjali kohaletoimetamiseks mõeldud kottides, milles tuubid peavad olema vertikaalses asendis ja kaugemal transportimisel spetsiaalsetes konteinerites. .

Materjali saav laboritöötaja peab kontrollima:

Saatekirja õigsus: saatelehele on märgitud uuritava andmed (perenimi, ees- ja isanimi, vanus, haiguslugu või ambulatoorse kaardi number, osakond, diagnoos, läbiviidud teraapia);

Katseklaaside märgistamine vereproovidega (need peavad olema märgistatud patsiendi koodi või perekonnanimega, mis on identsed uuringu materjali saatmise vormil oleva koodi ja perekonnanimega). Laborant peab registreerima tarnitud materjali, märkima katseklaaside arvu.

^ 4.4 Loendamine rakuline koostis veri hematoloogilisel analüsaatoril

Vere rakulise koostise arvutamine hematoloogilisel analüsaatoril peab toimuma rangelt vastavalt seadme juhistele.

Hematoloogilise analüsaatoriga töötades peaksite:

Kasutage K-2 EDTA-ga stabiliseeritud verd soovitatud vahekorras konkreetsete soola- ja ühekordselt kasutatavate hematoloogiliste katsutite jaoks (tavaline või vaakum);

Enne analüüsimist segage katsuti hoolikalt, kuid põhjalikult verega (soovitav on kasutada vereproovide segamise seadet - selleks otstarbeks rotomix);

Kasutage ettenähtud viisil registreeritud reaktiive; reaktiivide vahetamisel teise tootja toodete vastu kontrollige ja seadistage instrumendi kalibreerimine;

Käivitage seade, jälgides kõiki loputusetappe, saavutades kõigi kanalite indikaatorite nullväärtused (taust);

Pöörake tähelepanu instrumentide teadetele võimalike süstemaatiliste vigade kohta: pidage meeles, et MCHC kasv on suurem normaalväärtused, tavaliselt mõõtmisvea tulemus;

Kui tuvastatakse viga, on hädavajalik põhjus kõrvaldada, ärge töötage rikkis seadmega;

Viige läbi kvaliteedikontrolli protseduur vastavalt vastavale programmile. koos tulemuse hinnanguga;

Töötage mõtestatult, võrreldes saadud tulemusi kliiniline tunnus patsiendi proovid;

Pärast mõõtmiste lõppu loputage analüsaatorit põhjalikult;

Seadme pikemaks ajaks seiskamisel tuleb kindlasti läbi viia kõik konserveerimistoimingud (võimalusel koos hooldusinseneriga);

Tehniliste probleemide korral peaksite abi otsima litsentsitud ettevõtte hooldusinsenerilt Hooldus; Ärge usaldage töid väljaõppeta töötajatele.

Hematoloogilise analüsaatoriga tööle asudes tuleks arvestada analüüsitavate parameetrite mõõtmise lineaarsuse piiridega. Proovide hindamine analüüsitud parameetrite väärtustega, mis ületavad mõõtmise lineaarsuse piiri, võib viia ekslike tulemusteni. Enamasti kuvab analüsaator hüpertsütoosiga proovide analüüsimisel mõõdetud parameetri väärtuse asemel ikooni “D” (lahjendus), mis viitab vajadusele proovi lahjendada ja uuesti mõõtmine. Lahjendada tuleb seni, kuni kahel järgmisel lahjendusel saadakse sarnased lõpptulemused.

^ PRI me R ─ Hüperleukotsütoosiga patsiendi proovi analüüs kolmel erineval hematoloogilisel analüsaatoril on toodud tabelis.

Tabel 3

¦ Hüperleukotsütoosi loendamise tulemused kolme erineva hematoloogilise analüsaatoriga


^ Hematoloogilised analüsaatorid

Proovi lahjendusmäär

Lõppväärtus

^ Terve veri

1:1

1:3

1:4

WBC

1

D

274,5

274,5

143,1

715,5

2

322,6

253,2

177,7

141,8

709,0

3

D

D

168,3

139,1

695,5

Tabelist on näha, et täisverd analüüsides andis ainult üks analüsaator (2.). digitaalne väärtus valgete vereliblede arvu, ülejäänud kaks näitasid proovi lahjendamise vajadust. Järgnev proovi samm-sammult mõõtmine kolmes lahjenduses võimaldas saavutada lähedased lõpptulemused kõigis seadmetes ainult lahjendusega 1:3 ja 1:4. Seega oli leukotsüütide üldarv 700,0 - 710,0 x 10 9 /l, mis on enam kui 2 korda kõrgem algväärtusest, mis saadi täisveres 2. analüsaatoril ja 1,5 - lahjendusel 1:1 1. ja 1. 2. analüsaatorid.

  1. ^ Hematoloogiliste analüsaatorite kalibreerimine
Kalibreerimine viitab selle tulemusel analüsaatori reguleerimise protseduurile

Mis saavutab vea süstemaatilise komponendi võrdsuse nulliga (null bias) või kinnitab, et nihe on null, võttes arvesse kalibreerimisviga. Hematoloogiliste analüsaatorite kalibreerimist saab läbi viia kahel põhilisel viisil:

täisvere jaoks;

Põhineb sertifitseeritud väärtustega stabiliseeritud vereproovidel.

^ 5.1 Täisvere kalibreerimine

Täisvere kalibreerimist saab läbi viia võrdlusanalüsaatoriga, mille kalibreerimine on kontrollitud ja mida võib võtta originaalina.

Võrdluseks võrdlusanalüsaatoriga kalibreerimiseks kasutatakse 20 patsiendi veenivere proovi, mis on juhuslikult valitud referentanalüsaatorit omava labori igapäevasest uurimisprogrammist. Veri tuleb võtta antikoagulandi K 2 EDTA-ga vaakumtorudesse. Pärast võrdlusanalüsaatoriga analüüsimist toimetatakse veretorud laborisse kalibreeritava seadmega analüüsimiseks. Aeg võrdlusanalüsaatori ja kalibreeritud analüsaatoriga tehtud mõõtmiste vahel ei tohi ületada 4 tundi. Kalibreeritava instrumendi kalibreerimisproovide analüüs tuleb läbi viia samamoodi nagu patsiendi proovide analüüs. Saadud tulemused kantakse tabelisse lisas 1 toodud kujul. Nende tulemuste põhjal määratakse sobivad kalibreerimistegurid, mis on arvuliselt võrdsed graafiku alguspunkti läbivate kalibreerimissirgete kalde koefitsientidega.

Kalibreerimistegurid arvutatakse arvutis, kasutades programmi EXCEL, mis sisaldub mis tahes versiooni Microsoft OFFICE paketis. Kalibreerimistegurite arvutamiseks selles programmis koostatakse hajuvusdiagramm, kus mõõdetud väärtused kantakse piki X-telge, võrdlusväärtused piki Y-telge ja regressioonijoon seatakse läbi algpunkti. Programm tõmbab kalibreerimisjoone ja määrab selle kalde, mis on soovitud kalibreerimisfaktor. Kui tuvastatakse jämedad vead - punktid, mis on graafikul kalibreerimisjoonest oluliselt eraldatud, tuleb need arvutusest eemaldada (kustutada EXCELi tabelist kogu rida). Saadud kalibreerimistegur kantakse 1. liite tabelisse ja seda kasutatakse seadme kalibreerimise käsitsi reguleerimiseks vastavalt selle kasutusjuhendile.


    1. ^ Kalibreerimine sertifitseeritud väärtustega stabiliseeritud vereproovide suhtes
See kalibreerimismeetod põhineb kaubanduslikel kalibreerimis- ja kontrollmaterjalidel, mis on kunstlik segu stabiliseeritud inimese erütrotsüütidest ja fikseeritud inimese või looma rakkudest, mis jäljendavad leukotsüüte ja trombotsüüte. Nende materjalide komponentide bioloogiliste omaduste olulise erinevuse tõttu looduslikust verest sõltuvad hematoloogiliste parameetrite sertifitseeritud väärtused konkreetsest analüsaatori tüübist.

Võimaluse korral tuleks kasutada kalibraatoreid, mis on tootja poolt spetsiaalselt loodud teatud tüüpi analüsaatorite kalibreerimiseks. Kaasaegsetes hematoloogilistes kalibraatorites seatud väärtuste vead vastavad üldiselt meditsiinilised nõuded. Kuid mitte kõigil analüsaatoritüüpidel pole selliseid kalibraatoreid. Lisaks ei ole piiratud säilivusaja tõttu (tavaliselt mitte rohkem kui 45 päeva) alati võimalik hankida proove, mille kehtivusaeg ei ole lõppenud.

Kontrollmaterjalid ei ole tootja poolt ette nähtud kalibreerimiseks: väärtuste tolerantsid on palju laiemad, valideerimis- ja tootmiskontrolli meetodid ei ole nii ranged kui kalibraatorite puhul. Kalibreerimisel saab kontrollmaterjale kasutada ainult ühe teabeallikana seadme metroloogiliste omaduste kohta.

Siiski tuleb meeles pidada, et kui kalibreerimiseks kasutatakse nii kontrollmaterjale kui ka kalibraatoreid, on proovi ettevalmistamise ja analüsaatorite töö omadustel oluline mõju süstemaatilise vea komponentidele. Neid mõjutegureid ei saa kaubanduslike materjalidega kalibreerimisel arvesse võtta. Sellest tulenevalt tuleb kõikidel juhtudel teostatud kalibreerimist kontrollida, analüüsides patsiendi proovides saadud tulemuste statistikat (erütrotsüütide indeksid, normaalväärtuste intervallid).

5.2.1 Hematoloogiliste analüsaatorite kalibreerimisintervallid

Kalibreerimisintervalli nõuded leiate tavaliselt analüsaatori kasutusjuhendist. Reeglina on kalibreerimine vajalik pärast remonti või kui ettevõttesiseste kvaliteedikontrolli protseduuride käigus tuvastatakse oluline triiv.

5.2.2 Kalibreerimisprotseduur

Kalibreerimisprotseduur viiakse läbi vastavalt analüsaatori kasutusjuhendile.

5.2.3 Kalibreerimistulemuste kontrollimine

See kontroll seisneb kalibreerimisproovi analüüsis vahetult pärast kalibreerimist. Teostatud kalibreerimine on aktsepteeritud, kui analüüsi tulemused vastavad kalibreerimisväärtustele, võttes arvesse analüsaatori analüütilist varieerumist.

5.2.4 Kalibreerimise kontrollimine RBC indeksite abil

See kalibreerimise kontrollimise ja täpsustamise meetod kasutab tõsiasja, et patsientide erütrotsüütide indeksite - MCHC, MCH ja MCV - keskmised väärtused on üsna väikesed ja seetõttu saab neid tõhusalt kasutada kalibreerimise kontrollimiseks ja edasiseks kvaliteedikontrolliks. Soovitatav proovide arv keskmistamiseks on 20. Keskmise MCHC määramiseks võib kasutada mis tahes patsiendi proovi, samas kui aneemiaga patsiendid tuleks keskmisest MCHC ja MCV hulgast välja jätta.

Paljudel kaasaegsetel hematoloogilistel analüsaatoritel on sisseehitatud programmid voolu keskmiste arvutamiseks, mis lihtsustab oluliselt andmetöötlust.

Erütrotsüütide indeksite sihtväärtused, mis on keskmistatud 20 18–60-aastaste patsientide proovi kohta, olenemata soost, on toodud tabelis 4.

Tabel 4

Erütrotsüütide indeksite sihtväärtused

Kui saadud keskmised väärtused on väljaspool kontrolltolerantsi, tähendab see, et MCV või Hgb või RBC kalibreerimist tuleb korrigeerida.

Ebarahuldava kalibreerimise põhjuste kindlaksmääramisel erütrotsüütide parameetrite uurimise tulemuste põhjal kaubanduslike kalibreerimis- / kontrollmaterjalide kasutamisel tuleks arvesse võtta järgmist materjalide sertifitseeritud väärtuste usaldusväärsuse hinnangut:

Kõige täpsem ja ajaliselt stabiilsem parameeter on erütrotsüütide kontsentratsioon;

Hgb on stabiilne parameeter, kuid see võib sõltuda kasutatavatest reagentidest (näiteks tsüaniidi või tsüaniidivaba);

Kõige ebastabiilsem parameeter on MCV. MCV väärtus kipub muutuma kogu materjali säilivusaja jooksul üsna laias väärtusvahemikus. MCV kalibreerimise täpsustamisel on erütrotsüütide indeksite keskmiste analüüsist saadud andmed ülimuslikud stabiliseeritud vereproovide sertifitseeritud väärtuste suhtes.

Eeldades, et RBC kalibreerimine on õige, näitab tabel 5 võimalikud põhjused indeksite keskmiste väärtuste väljumine kontrolltolerantsi piiridest.

Tabel 5

Erütrotsüütide indeksite keskmiste väärtuste ületamise põhjused


Erütrotsüütide indeksid

Keskmine indeksi väärtus

Keskmine indeksi väärtus

Keskmine indeksi väärtus

Keskmine indeksi väärtus

MCHC

Piiri all

Piiri kohal

Piiri kohal

Piiri all

MCH

tolerantsi piires

tolerantsi piires

Piiri kohal

Piiri all

MCV

Piiri kohal

Piiri all

tolerantsi piires

tolerantsi piires

Põhjus

Ülehinnatud MCV

alahinnatud MCV

Kõrge Hgb

Madal Hgb