5. “DUYUSAL MOTOR REAKSİYONU. BOXÖRÜN DIŞ TAHRİK EDİCİNİN GÖRÜNÜMÜNE MOTOR TEPKİLERİ Bir yumruğun hız performansında, boksörün bir dış uyaranın (ses, sinyal, dinamometre üzerindeki ampul) görünümüne nasıl tepki verdiği önemli bir rol oynar.

RZGA (RTGA)- aşağıdaki görevleri çözmeye izin veren oldukça spesifik serolojik reaksiyon: serumda hemaglütinasyon yapan virüse karşı antikor titresini belirlemek; bilinen serumla bilinmeyen bir hemaglutinasyon yapan virüsü tanımlayın; iki hemaglutinasyon yapan virüsün antijenik ilişkisinin derecesini belirlemek. RZGA, bazı viral enfeksiyonların (influenza, sığır parainfluenza, koyun viral abortusları vb.) geriye dönük tanısında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bunun için 2-3 hafta aralıklarla alınan eşleştirilmiş serum örnekleri kullanılır ve antikor titresinin 4 kat veya daha fazla artmasıyla hastalık belirlenir.

RZGA'nın Avantajları: ayar tekniğinin basitliği, hızlı yanıt, steril çalışma gerekli değildir, özgüllük, düşük maliyet. Dezavantaj - RZGA yalnızca hemaglutinasyon yapan virüslerle mümkündür.

RZGA'nın özü antiviral bağışıklık serumu virüsün karşılık gelen suşları ile etkileşime girdiğinde, virüsün hemaglutinasyon yeteneğinde bir gecikme (inhibisyon) meydana gelmesi gerçeğinde yatmaktadır. RHA'nın sonucu, kan serumunda bulunan spesifik olmayan hemaglütinasyon inhibitörlerinden etkilenir. Virüslere bağlanma ve hemaglütinasyonu önleme yetenekleri vardır. İnhibitörlerin reaksiyonun seyri üzerindeki olumsuz etkisini ortadan kaldırmak için yok edilmeleri (ortadan kaldırılmaları) gerekir. Bunun için çeşitli yöntemler kullanılmaktadır.

BileşenlerRZGA : test edilmiş virüs içeren malzeme; tanısal bağışıklık serumu; %1 eritrosit süspansiyonu; 2. seçenek - çalışılan kan serumu; standart antijen (viral diagnostik); %1 eritrosit süspansiyonu.

hazırlarken reaksiyonlarda, bazı vücut sıvılarının (kan serumu, idrar, tükürük, süt vb.) reaksiyonu inhibe edebilen ve hemaglütinasyonu geciktirebilen inhibitörler içerebileceği akılda tutulmalıdır. Bu durumlarda normal serumlar yani sağlıklı hayvanlardan alınan serumlar hemaglütinasyonu geciktirerek hatalı sonuçlara yol açabilir. bazılarının serasında sağlıklı insanlar ve hayvanlar iki tür inhibitör ortaya çıkardı - termostabil ve termolabil. Termolabil inhibitörler, globulinin beta fraksiyonlarında bulunur ve beta-globulin özelliklerine sahiptir, hemaglutinasyonu inhibe eder, virüsü nötralize eder ve antiviral bağışıklıkta önemli bir faktördür. RHA üretimine müdahale eder ve onları etkisiz hale getirerek onlardan kurtulurlar. serum 56-65 °C'de 30 dakika su banyosunda Termostabil inhibitörler (Francis inhibitörleri) globulinin a-fraksiyonlarında bulunur, dirençlidirler. yüksek sıcaklıklar(hatta kaynamaya kadar) ve alkalinin etkisi, hemaglütinasyonu bastırırlar, ancak virüs nötralize edici özelliklere sahip değildirler. Isıya dayanıklı inhibitörler, seranın karbon dioksit, vibrio kolera kültür filtratı veya potasyum periyodat ile işlenmesiyle kan serumundan çıkarılır.
RHA'yı ayarlamak için, 1 AU'yu belirlemek üzere RHA'daki virüsü önceden titre etmek gerekir. RHA evrelendirilirken virüs 4 AU titrede alınır, yani seyreltme RHA'daki virüsün titresinden 4 kat daha azdır. Örneğin, 1 AU içeren bir virüsün titresi 1:64'tür, bu da virüsün 1:16'lık bir dilüsyonunda 4 AU'nun bulunacağı anlamına gelir.
Tüm serumlar, RPHA ayarlanmadan önce, ısıya duyarlı inhibitörleri uzaklaştırmak için hayvanın türüne bağlı olarak 56-65°C sıcaklıkta 30 dakika ısıtılır.
Reaksiyonu bir sıra test tüplerinde veya kuyucuklarda oluşturmak için, salin içinde serum dilüsyonları hazırlanır. Genellikle ilk test tüpünde 1:10'luk bir dilüsyon hazırlanır ve ardından 1:1280'e kadar ve bazen daha yüksek olan 2 kat dilüsyonlar hazırlanır. Daha sonra bu sıradan seyreltmeye karşılık gelen serumdan 0,25 ml ikinci sıradaki test tüplerine aktarılır ve buraya 4 AU içeren virüsten 0,25 ml eklenir. Sıvı, tüpler çalkalanarak karıştırılır ve karışım oda sıcaklığında veya termostatta 30-60 dakika temas halinde tutulur, ardından her tüpe 0,5 ml %1'lik eritrosit süspansiyonu eklenir, ardından tüpler çalkalanır ve Karışım tekrar 30-60 dakikalık bir odada bekletilir.

Hemadsorpsiyon gecikme reaksiyonu (RZGAd).

Enfekte hücre kültüründe virüsleri tespit etmek, tanımlamak ve tiplendirmek için kullanılır.

Onun özü hücre kültüründe çoğalan hemaglütinasyon yapan virüslerin antijeni ile etkileşime giren immün serumun antikorlarının onları taraması ve sonuç olarak enfekte hücrelerin yüzeyinde eritrositlerin adsorpsiyonu gözlenmez.

Reaksiyon bileşenleri: 1) test tüplerinde hemaglutinasyon yapan virüs hücre kültürü ile enfekte olmuş ve enfekte olmamış; 2) Tanısal antiviral serum; 3) Tavuk eritrositlerinin %0.4 süspansiyonu.

Ayar tekniği. Hücre kültürü ile test tüplerinden besin ortamı boşaltılır, test tüplerine 2-3 ml Hank's solüsyonu eklenerek hücreler protein bileşenlerinden yıkanır. 1-2 dakika maruz kaldıktan sonra Hank solüsyonu çıkarılır. Daha sonra her bir deney ve kontrol tüpüne 0.2 ml diyagnostik serum eklenir. Test tüpleri, şerit yukarıda olacak şekilde eğik bir konumda bırakılır ve 15-20 dakika oda sıcaklığında tutulur. Daha sonra 0,2 ml %0,4 eritrosit süspansiyonu ekleyin ve tekrar oda sıcaklığında eğimli bir konumda 3...5 dakika bekletin. Daha sonra, yerleşmiş ancak adsorbe edilmemiş eritrositleri yeniden süspanse etmek için tüpler hafifçe 5-10 kez döndürülür.

Hemaglutinasyon inhibisyon testi (HITA), virüse karşı bağışık kan serumu varlığında virüs içeren bir ilaç tarafından eritrosit aglütinasyonunun olmaması olgusuna dayanan, hastanın kan serumunda bir virüsü tanımlamaya veya antiviral antikorları saptamaya yönelik bir yöntemdir.

Hemaglutinasyon inhibisyon reaksiyonu (RTHA), virüslerin kırmızı kan hücrelerini aglütine etme yeteneklerini kaybetmesinin bir sonucu olarak, bağışıklık serumunun antikorları tarafından virüs antijenlerinin blokajına, baskılanmasına dayanır.

RTHA, nedensel ajanları (grip, kızamık, kızamıkçık, kene kaynaklı ensefalit vb.) çeşitli hayvanların eritrositlerini aglütine edebilen birçok viral hastalığı teşhis etmek için kullanılır.

mekanizma. Virüs tiplemesi, bir dizi tipe özgü serum ile hemaglütinasyon inhibisyon testinde (HITA) gerçekleştirilir. Reaksiyonun sonuçları, hemaglütinasyonun olmaması ile dikkate alınır.

H0N1, H1N1, H2N2, H3N2, vb. antijenlere sahip A virüsünün alt tipleri, RTGA'da bir dizi homolog tipe özgü serum ile ayırt edilebilir.

Tamamlayıcı bağlanma reaksiyonu. mekanizma. Bileşenler. Başvuru

Komplement fiksasyon reaksiyonu (RCC), antijenler ve antikorlar birbirine karşılık geldiğinde, bir immün kompleksi oluşturmaları gerçeğinden oluşur; bu komplekse, antikorların Fc fragmanı yoluyla kompleman (C) bağlanır, yani kompleman antijen tarafından bağlanır. -antikor kompleksi. Antijen-antikor kompleksi oluşmazsa, tamamlayıcı serbest kalır.

AG ve AT'nin spesifik etkileşimine, tamamlayıcının adsorpsiyonu (bağlanması) eşlik eder. Komplement fiksasyon süreci görsel olarak görünmediğinden, J. Bordet ve O. Zhangu, komplementin AG-AT kompleksi tarafından sabitlenip sabitlenmediğini gösteren bir gösterge olarak hemolitik sistemi (koyun eritrositleri + hemolitik serum) kullanmayı önerdi. AG ve AT birbirine karşılık geliyorsa, yani bir bağışıklık kompleksi oluşmuşsa, tamamlayıcı bu komplekse bağlanır ve hemoliz meydana gelmez. AT, AG'ye karşılık gelmiyorsa, o zaman kompleks oluşmaz ve serbest kalan tamamlayıcı, ikinci sisteme bağlanır ve hemolize neden olur.

Bileşenler. Kompleman fiksasyon reaksiyonu (CFR) karmaşık bir serolojik reaksiyonlar. Uygulanması için 5 bileşene ihtiyaç vardır: AG, AT ve kompleman (birinci sistem), koyun eritrositleri ve hemolitik serum (ikinci sistem).

CSC için antijen, çeşitli öldürülmüş mikroorganizmaların kültürleri, bunların lizatları, bakteri bileşenleri, patolojik olarak değiştirilmiş ve normal organlar, doku lipitleri, virüsler ve virüs içeren materyaller olabilir.

Tamamlayıcı olarak taze veya kuru kobay serumu kullanılır.

mekanizma. RSK iki aşamada gerçekleştirilir: 1. aşama - antijen + antikor + tamamlayıcının üç bileşenini içeren bir karışımın inkübasyonu; 2. aşama (gösterge) - koyun eritrositlerinden oluşan bir hemolitik sistem ve bunlara karşı antikorlar içeren hemolitik serum ekleyerek karışımdaki serbest tamamlayıcının tespiti. Reaksiyonun 1. fazında, antijen-antikor kompleksi oluşumu sırasında kompleman bağlanması meydana gelir ve ardından 2. fazda, antikorlar tarafından duyarlı hale getirilen eritrositlerin hemolizi gerçekleşmez; tepki olumlu. Antijen ve antikor birbirine uymuyorsa (test örneğinde antijen veya antikor yoktur), tamamlayıcı serbest kalır ve 2. aşamada eritrosit-antieritrosit antikor kompleksine katılarak hemolize neden olur; tepki negatiftir.

Başvuru. RSK başta sifiliz (Wasserman reaksiyonu) olmak üzere birçok bulaşıcı hastalığı teşhis etmek için kullanılır.

Hemaglutinasyon inhibisyon reaksiyonu. mekanizma. Bileşenler. Başvuru

(RTGA) - kendisine karşı bağışık kan serumu varlığında bir virüs içeren bir ilaç tarafından eritrositlerin aglütinasyonunun olmaması olgusuna dayanan, hastanın kan serumunda bir virüsü tanımlamak veya antiviral antikorları tespit etmek için bir yöntem.

Hemaglutinasyon inhibisyon reaksiyonu (RTGA) blokaj temelinde, virüs antijenlerinin bağışıklık serumunun antikorları tarafından baskılanması, bunun sonucunda virüsler kırmızı kan hücrelerini aglütine etme yeteneklerini kaybeder.

RTGA kullanılır etken maddeleri (grip, kızamık, kızamıkçık, kene kaynaklı ensefalit vb.) çeşitli hayvanların eritrositlerini aglütine edebilen birçok viral hastalığın teşhisi için.

mekanizma. Virüs tiplemesi, bir dizi tipe özgü serum ile hemaglütinasyon inhibisyon testinde (HITA) gerçekleştirilir. Reaksiyonun sonuçları, hemaglütinasyonun olmaması ile dikkate alınır. H 0 N 1 , H 1 N 1 , H 2 N 2 , H 3 N 2 ve diğer antijenlere sahip A virüsünün alt tipleri, bir dizi homolog tipe özgü serum ile RTGA'da ayırt edilebilir.

Yağış reaksiyonu. mekanizma. Bileşenler. Ayarlama yolları. Başvuru

Yağış reaksiyonu (RP)- bu, çökelti adı verilen bulanıklık şeklinde antikorlarla çözünür bir moleküler antijen kompleksinin oluşumu ve çökelmesidir. Antijen ve antikorların eşdeğer miktarlarda karıştırılmasıyla oluşturulur; bunlardan birinin fazlası, bağışıklık kompleksinin oluşum seviyesini azaltır.

RP koymak test tüplerinde (halka çökeltme reaksiyonu), jellerde, besin ortamlarında vb.

mekanizma. Patolojik materyalden, çevresel nesnelerden veya saf bakteri kültürlerinden ekstrakte edilen şeffaf koloidal çözünür antijenler ile gerçekleştirilir. Reaksiyon, yüksek antikor titreleri ile şeffaf teşhis çökeltici serumlar kullanır. Çöken serumun titresi, bağışıklık serumu ile etkileşime girdiğinde görünür bir çökelti - bulanıklık oluşumuna neden olan antijenin en yüksek seyreltilmesi olarak alınır.

Halka çökeltme reaksiyonu içine 0,2-0,3 ml çöktürücü serum ilave edilen dar test tüplerine (0,5 cm çapında) yerleştirilir. Daha sonra bir Pasteur pipeti ile 0.1-0.2 ml antijen solüsyonu yavaşça tabakalandırılır. Test tüpleri dikkatlice "dikey" konuma getirilir. 1-2 dakika sonra reaksiyon kaydedilir. olumlu tepki serum ve test antijeni arasındaki sınırda beyaz bir halka şeklinde bir çökelti belirir. Kontrol tüplerinde çökelti oluşmadı.

Nötralizasyon reaksiyonu (PH)

Bu evrensel reaksiyon, diğer serolojik reaksiyonların değerlendirilmesinde bir ölçüt görevi görür.

Prensibi, bir antijen (virüs) homolog antikorlarla etkileşime girdiğinde, bir antijen + antikor kompleksi oluşması ve bunun sonucunda virüsün enfektivitesinin nötralize edilmesidir. Serbest (antikorlara bağlı olmayan) bir virüsün göstergesi, virüse duyarlı canlı bir sistemdir: hayvanlar, tavuk embriyoları veya hücre kültürü.

Reaksiyon bir test tüpünde kurulurken eşit hacimde virüs ve serum karıştırılır, karışım uygun sıcaklıkta (4, 22 veya 37°C) bir saat veya 16-18 saat (virüse bağlı olarak) bekletilir. ve deneyin koşulları). Daha sonra bu karışım, virüse duyarlı canlı bir sistemi enfekte etmek, canlı nesnelerin durumunu izlemek ve uygun bir süre sonra yokluğunda virüsün nötralizasyon sonucunu dikkate almak için kullanılır:

1) ölüm, gelişme klinik tablo hastalık ve patolojik değişiklikler laboratuvar hayvanlarının organ ve dokularında;

2) ölüm, embriyonun zarlarında, dokularında patolojik değişiklikler ve tavuk embriyolarının boşluklarının sıvılarında hemaglutinin yokluğu;

3) hücre kültüründe sitopatik etki (CPE) veya plak oluşumu.

Belirli bir miktarda virüsü nötralize etmek için belirli miktarda antikor gerektiğinden ve bu bileşenlerden biri hala bilinmediğinden, PH iki şekilde ayarlanabilir:

1) farklı serum dozlarına (dilüsyonlar) (genellikle seri 2-kat seyreltmeler şeklinde) aynı dozda virüs ekleyin (genellikle 100-1000 ED50). Bu varyantta, serumdaki virüsü nötralize eden antikorların titresi belirlenir; bunun göstergesi, enfekte olanın% 50'sini virüsün etkisinden koruyan serumun seyreltilmesidir. biyolojik sistemler;

2) virüsün farklı dozlarına (seyreltmelerine) (genellikle seri 10 kat seyreltmeler şeklinde) aynı dozlarda serum ekleyin (genellikle 1:10 veya 1:20 dilüsyonlarda). Bu PH varyantını ayarlarken, çalışılan (veya spesifik) seruma ek olarak normal (negatif) serum da kullanılır. Bu durumda, bağışıklık (spesifik) veya test serumunun virüs titresini normal seruma kıyasla kaç kat azalttığını gösteren nötralizasyon indeksi (IN) belirlenir.

PH'nin avantajları, çok yönlülüğü ve yüksek özgüllüğüdür; dezavantajlar - yüksek emek yoğunluğu; malzemelerin, mutfak eşyalarının ve aletlerin sterilitesine kesinlikle uyma ihtiyacı; yüksek yaşam maliyeti biyolojik sistemler; biyolojik tahlilin göreceli süresi ve matematiksel hesaplamalara duyulan ihtiyaç.

Hemaglutinasyon inhibisyon reaksiyonu (HITA)

Hemaglütinasyon yapan virüslerin çalışmasında yaygın olarak kullanılır.

Antikorların, homolog bir virüsle (antijen) karşılaştıklarında, hemaglutinasyondan sorumlu virion reseptörlerini bloke ederek onlarla bir antijen + antikor kompleksi oluşturdukları için, yalnızca bulaşıcı değil, aynı zamanda hemaglutinasyon aktivitesini de nötralize ettikleri gerçeğine dayanır.

RTGA'nın prensibi, eşit hacimde kan serumu ve virüsün bir test tüpünde (kuyuda) karıştırılması ve maruz kaldıktan sonra (30-40 dakika), karşılık gelen hayvan türlerinin eritrositlerinin eklenmesidir.

Kırmızı kan hücreleri, karışımda virüs varlığının bir göstergesidir. Eritrositlerin aglütinasyonu, karışımda virüsün varlığını gösterir ve hemaglütinasyonun olmaması, antikorlar virüsün hemaglutinasyon aktivitesini tamamen nötralize ettiğinden, yokluğunu gösterir.

RTGA iki versiyonda kurulabilir:

1) farklı serum dilüsyonlarına (genellikle 2 kat) aynı dozda virüs ekleyin (4-8 HAU);

2) virüsün farklı dilüsyonlarına (genellikle 2 kat) aynı dozda serum ekleyin.

Birinci seçeneğe göre RTGA ayarı aşağıdaki adımlara göre gerçekleştirilir:

Virüs, RGA'da titre edilir ve hemaglütinasyon titresi belirlenir;

Virüsün çalışma dozunu (4 veya 8 HAU) hazırlayın ve kontrol edin;

RTGA'nın ana deneyimini ortaya koyuyorlar;

Sonuçlar dikkate alınır.

Çaprazlamalarda her karışımdaki hemaglutinasyonu değerlendirin ve antikor titresini belirleyin. Serum antikor titresi hemaglütinasyonu tamamen engelleyen en yüksek serum dilüsyonu olarak alınır.

RGTA aşağıdakileri çözmenizi sağlar teşhis görevleri:

Bilinen bir virüs kullanarak kan serumundaki antikor titresini tespit edin ve belirleyin;

Bilinmeyen bir virüsü bilinen çeşitli serumlarla (antikorlar) inceleyerek tanımlayın.

RTGA'nın avantajları, ayar tekniğinin basitliği ve hızlı sonuç vermesidir. Bununla birlikte, bu reaksiyon yalnızca hemaglütinasyon yapan virüsler için kullanılabilir.