Luarea unui frotiu de biomaterial. Colectarea, depozitarea și livrarea materialului pentru studii PCR

Instrucțiuni pentru colectare, depozitare și transport

material biologic pentru cercetarea de laborator

pentru detectarea agenților patogeni prin PCR

1.1.1. Biomaterialul este preluat din habitatul așteptat al microorganismelor și din dezvoltarea infecției.

1.1.2. Cantitatea de material colectată trebuie să fie mică. Excesul de descărcare, mucus și puroi afectează negativ calitatea extracției ADN și contribuie la degradarea ADN-ului în timpul depozitării și transportului.

1.1.3. Când introduceți un biomaterial prelevat de la un pacient cu o sondă cu un tampon de vată sau o perie într-un tub Eppendorf cu o soluție tampon, este necesar:

Observați sterilitatea;

Înainte de a scufunda biomaterialul colectat pe tampon (perie) în soluție, ungeți-l pe peretele uscat al eprubetei, apoi umeziți tamponul (peria) în soluție și, rotind sonda, spălați bine tot materialul din peretele eprubetei și tamponul (peria);

Dacă este posibil, strângeți tamponul de peretele eprubetei, îndepărtați sonda cu tamponul (peria) și închideți eprubeta.

1.2. Metode de preluare a biomaterialului pentru cercetare prin PCR

1.2.1. Razuire. Pentru răzuire se folosesc sonde sterile de unică folosință care au un tampon de vată cu adsorbție crescută sau „perii”, mai rar linguri Volkmann, linguri mici pentru urechi sau instrumente similare cu marginile ușor tocite. Mișcări de răzuire pentru colectarea materialului. Materialul de testat trebuie să conțină cât mai multe celule epiteliale și o cantitate minimă de impurități de mucus, sânge și exudat. Transferați materialul într-un tub Eppendorf steril cu soluție tampon (vezi secțiunea 1.1.).

Razuire din canalul cervical: înainte de a lua o răzuire, este necesar să îndepărtați excesul de mucus cu un tampon de bumbac steril, tratați colul uterin cu soluție salină sterilă. Introduceți sonda în canalul cervical la o adâncime de 0,5-1,5 cm, evitând contactul cu pereții vaginului și colectați materialul cu o mișcare de răzuire (nu la sânge). Un număr mic de globule roșii din probă nu afectează rezultatul analizei. În prezența eroziunii cervicale, materialul este preluat de la marginea țesutului sănătos și alterat.

Razuire din uretra: introduceți sonda în uretră (la bărbați - la o adâncime de 2-4 cm) și colectați materialul cu mai multe mișcări de rotație. În ajunul luării materialului este permisă o provocare (mâncare picant, alcool etc.). Se recomandă să vă abțineți de la urinare timp de 1-2 ore înainte de prelevare. În prezența abundentelor scurgeri purulente răzuirea trebuie luată nu mai târziu de 15 minute după urinare.

Razuire din conjunctiva luați, după ce ați anesteziat în prealabil ochiul cu o soluție de dicaină 0,5%. Întorcând pleoapa, utilizați o sondă cu un tampon de vată (sau bisturiu pentru ochi) pentru a colecta celule epiteliale din conjunctiva.

Razuire din rect: introduceți sonda în anus la o adâncime de 3-4 cm și colectați materialul cu o mișcare de rotație.

1.2.2. Accident vascular cerebral. Folosind o sondă sterilă de unică folosință cu un tampon de vată sau o perie, luați o cantitate mică de scurgere (din bolțile vaginului, din faringe, nazofaringe etc.) și transferați-o într-un tub Eppendorf steril cu o soluție tampon (vezi secțiunea 1.1.).

1.2.3. Sânge. Pentru testarea PCR, sângele trebuie să fie nativ(nu încolțit).

Recoltați sângele aseptic, prin puncție venoasă - într-o eprubetă de marcă (2-3 ml) cu anticoagulant EDTA ( heparina nu trebuie folosită ca anticoagulant!), amestecați ușor răsturnând ușor tubul.

Sângele cu EDTA este un biomaterial pentru următoarele grupuri de cercetare:

- cercetare genetică(momentul prelevării de sânge nu contează).

- detectarea agenților infecțioși(cele mai informative sunt probele prelevate în timpul frisonului, temperatură ridicată, adică probabil în timpul viremiei sau bacteriemiei).

1.2.4. Urină.Într-un recipient steril gol, cu un capac etanș cu filet, colectați prima porțiune de dimineață sau mijlocul urinei într-o cantitate de cel puțin 10 ml. Dacă prelevarea de urină se efectuează în timpul zilei, atunci înainte de aceasta, pacientul nu trebuie să urineze timp de 1,5-3 ore.

1.2.5. Spută. Igienizați dimineața cavitatea bucalăși gâtul (clătiți cu o soluție de bicarbonat de sodiu). Colectați spută într-o fiolă sterilă, goală, cu gura largă.

1.2.6. Biopsie. Materialul trebuie luat din zona presupusei locații a agentului infecțios, din țesutul deteriorat sau din zona care se învecinează cu deteriorarea. Introduceți biopsia într-un tub Eppendorf steril cu soluție tampon.

1.2.7. Salivă, suc gastric, lichid cefalorahidian, lichid sinovial. Saliva (1-5 ml), suc gastric (1-5 ml), lichid cefalorahidian (1-1,5 ml) - se pune intr-o eprubeta sterila goala (recipient).

1.2.8. Suc de prostată. După masajul prostatei, sucul este colectat într-o cantitate de 0,5-1 ml într-o eprubetă (recipient) sterilă goală. Dacă este imposibil să obțineți suc, imediat după masaj, prima porție de urină este colectată într-o cantitate de cel mult 10 ml (această porție conține suc de prostată).

1.2.9. Spălări, lavaj bronhoalveolar (BAL). Cu un tampon de bumbac steril și 5-7 ml de soluție salină, se efectuează o spălare, de exemplu, de la vârful unui endoscop sau bronhoscop și 0,5-5 ml de spălare sunt plasate într-un tub steril (recipient) gol.

1.2.10. Fecale.Înăuntru este plasată o sondă cu un tampon de bumbac scaun si se intoarce usor, captand o cantitate mica de material. Apoi materialul este plasat într-un tub Eppendorf steril cu o soluție tampon.

1.3. Reguli de depozitare a materialului biologic pentru cercetarea PCR

1.3.1. Tampoane, răzuire:

La frigider (+4ºС - +8ºС) până la 7 zile;

În congelator (-20ºС) până la 14 zile (este permisă o singură dezghețare!).

1.3.2. Urină: la frigider (+4ºС - +8ºС) nu mai mult de 1 zi;

1.3.3. Sânge cu EDTA: într-un frigider (+4ºС - +8ºС) - pentru a determina agenți infecțioși - nu mai mult de 1 zi; pentru studii genetice - până la 4 zile. Înghețarea nu este supusă.

1.3.4. Spută

1.3.5. Biopsii:

La frigider (+4ºС - +8ºС) nu mai mult de 1 zi,

La congelator (-20ºС) până la 2 săptămâni.

1.3.6. suc de prostată: la frigider (+4ºС - +8ºС) nu mai mult de 1 zi.

1.3.7. lichid sinovial: la frigider (+4ºС - +8ºС) nu mai mult de 1 zi.

2. Reguli pentru luarea, depozitarea și transportul sângelui

pentru cercetare imunochimică

2.1.1. În ajunul prelevării de sânge, excludeți exercițiu fizic, situatii stresante, proceduri fizioterapeutice, receptie medicamente(cu excepția cazurilor tratament medicamentos prescrise de un medic), contraceptive orale, băuturi alcoolice și alimente grase. Nu fumați imediat înainte de studiu.

2.1.2. La examinarea funcţiei glanda tiroidaîn perioada de tratament cu medicamente care conțin hormoni tiroidieni, studiul se efectuează la 24 de ore după ultima doză de medicament; Cu 2-3 zile înainte de a lua sânge, excludeți utilizarea medicamentelor care conțin iod.

2.1.3. Când examinați PSA cu o săptămână înainte de analiză, excludeți orice manipulări cu glanda prostatică.

2.1.4. Sângele se ia dimineața, pe stomacul gol (pentru a evita chirul, adică turbiditatea serului), în condiții de repaus fiziologic. Înainte de a lua sânge, pacientul trebuie să aibă o odihnă de 15 minute.

2.1.5. Prelevarea de sânge se efectuează în camera de tratament a unității medicale, în poziția pacientului „șezând” sau „întins”, din vena cubitală cu respectarea regulilor de asepsie și antisepsie. Sângele este colectat într-un tub steril, mono-seringă sau sistem de colectare a sângelui (Vacutainer®, Vacuette®).

2.1.6. Pentru a obține ser, sângele venos se stabilește până la coagularea completă. După formarea unui cheag de fibrină, acesta din urmă este separat de pereți cu o baghetă de sticlă sterilă, strict individuală pentru fiecare probă, tubul este centrifugat la 3000 rpm timp de 15 minute. * .

* Sistemele mono-seringă și de colectare a sângelui (Vacutainer®, Vacuette®) sunt supuse centrifugării fără manipulări prealabile.

2.1.7. Supernatant Culoarea galbena(ser) se pipetează cu grijă într-un tub gol cu ​​capac (5 ml).

2.2. Reguli pentru păstrarea sângelui și a serului sanguin pentru studii imunochimice

2.2.1. Laşanţ: la frigider (+40C - +80C) timp de 1 zi.

2.2.2.Sersânge:

La frigider la o temperatură de + 40C - + 80C timp de 4 zile;

La congelator la -200C timp de 2 săptămâni.

Este permisă o singură dezghețare!

ATENŢIE! Serul care nu conține impurități de eritrocite, excrescențe bacteriene, chiloză, hemoliză este supus cercetării. În prezența oricăruia dintre aceste semne, serul este distrus și este prescrisă prelevarea repetată de sânge.

2.3. Reguli pentru luarea și stocarea sângelui pentru studiul anticoagulantului lupus

și studii de coagulare

2.3.1. Sângele se ia dimineața pe stomacul gol din vena cubitală, cu respectarea regulilor de asepsie și antisepsie în ziua studiului. Pentru a preveni activarea coagulării sângelui, compresia venei nu trebuie să depășească 1 minut .

2.3.2. Dacă studiul este prescris pe fondul luării de medicamente care afectează coagularea sângelui, ar trebui notat în direcție.

2.3.3. Sângele este colectat într-un tub special care conține citrat de sodiu, până la nota. Dacă această regulă nu este respectată, raportul sânge/anticoagulant se modifică, ceea ce poate afecta negativ acuratețea rezultatului.

2.3.4. În termen de 1 oră după administrarea sângelui, tubul trebuie centrifugat la 3000 rpm timp de 15 minute.

2.3.5. Depozitare plasma: pana la 6 ore la +40C - +80C sau pana la 2 saptamani la -200C.

2.4. Reguli pentru luarea și stocarea sângelui pentru studiul hemoglobinei glicozilate (glicozilate).

2.4.1. Sângele se ia dimineața pe stomacul gol din vena cubitală, respectând regulile de asepsie și antisepsie.

2.4.2. Sângele este colectat într-un tub special care conține EDTA, amestecat ușor. Nu centrifugați!

2.4.3. Livrare la Laborator în ziua prelevarii de sânge.

2.4.4. Pastrare: pana la 2 saptamani la -200C.

2.5. Reguli de screening prenatal

2.5.1. Timpul optim realizarea studiului: I trimestru - 10-13 săptămâni de sarcină; Trimestrul II - 16-18 săptămâni de sarcină.

2.5.2. Când se face referire la studiu, se completează o direcție specială, în care este necesar să se indice datele individuale ale gravidei: vârsta (data/lună/an), greutatea, rezultatele ecografiei (KTR, BDP, numărul de fetuși, vârsta gestațională conform ecografiei (săptămâni + zile); dacă sunt disponibile - date despre dimensiunea pliului gâtului - NT) cu indicarea obligatorie a datei ecografiei și a numelui medicului care a efectuat ecografia; factori de risc suplimentari (fumatul, Diabet, FIV), etnie.

2.5.3. Pentru screening-ul celui de-al doilea trimestru de sarcină, puteți utiliza datele unei ecografii efectuate în primul trimestru.

3. Reguli pentru preluarea, depozitarea și transportul biomaterialului

pentru cercetări bacteriologice

3.1. Biomaterialul este luat înainte de aplicarea cursului terapiei cu antibiotice sau nu mai puțin de o săptămână după finalizarea acestuia.

3.2. Pentru a preveni contaminarea probei cu microorganisme din mediul extern, biomaterialul prelevat este transferat într-un recipient sau eprubetă gol cu ​​un mediu de transport în conformitate cu regulile standard de sterilitate: dopul eprubetei (recipientului) este deschis/ închis astfel încât interiorul dopului să rămână steril, sticlăria sterilă nu este ținută deschisă mult timp.

3.3. Luarea de biomaterial pentru detectare micoplasme și ureaplasme, Trichomonas, gonococi, microfloră nespecifică, culturi bacterii anaerobe produs în eprubete de marcă cu mediu de transport de carbon:

Deschideți pachetul în locul indicat conform diagramei;

Scoateți și deschideți eprubeta, aruncați capacul;

Utilizați o sondă pentru a preleva o răzuire/tampon, o biopsie sau pentru a înmuia sonda într-un fluid biologic;

Puneți sonda cu biomaterialul imediat în eprubetă (mânerul sondei este capacul eprubetei);

Numerotați eprubeta, indicați numărul în direcția.

3.4. Tipuri de material biologic pentru transport în mediul cărbunelui: frotiuri / răzuire, suc de prostată, lichid cefalorahidian, lichid sinovial, biopsie.

3.5. Depozitarea biomaterialului în eprubete cu mediu de transport pentru detectare micoplasme și ureaplasme, microfloră nespecifică pana in momentul transportului -

Livrare la Laborator in termen de o zi.

3.6. Depozitarea biomaterialului în eprubete cu mediu de transport pentru detectare Trichomonas, gonococi, culturi de bacterii anaerobe pana in momentul transportului - la temperatura camerei.

3.7. Biomaterial nativ: spută, suc de prostată, lichid sinovial de la 1 la 10 ml pentru detectarea microflorei nespecifice, micoplasmele și ureaplasmele sunt colectate într-un recipient steril gol.

Este necesar să anunțați Laboratorul în ajunul sau în ziua preluării biomaterialului înainte de ora 11:00.

Depozitarea biomaterialului nativ până la transport - în compartimentul frigider (+4ºС - +8ºС).

Livrare la Laborator în ziua prelevării probei.

3.8. Urina pentru a testa gradul de bacteriurie(porția medie de dimineață, 10-20 ml) se colectează într-un recipient steril, gol, cu capac, după o toaletă amănunțită a organelor genitale externe.

Este necesar să anunțați Laboratorul în ajunul sau în ziua preluării biomaterialului înainte de ora 11:00.

Depozitarea biomaterialului până la transport - în compartimentul frigider (+4ºС - +8ºС).

Livrare la Laborator în ziua preluării biomaterialului.

3.9. Sânge pentru sterilitate.

Cea mai informativă este proba de sânge prelevată în timpul creșterii temperaturii.

Sângele se recoltează în sticle de marcă cu un mediu de transport în două faze (sticlă pentru adulți, biberon pentru copii). Deschideți cu grijă capacul de plastic al sticlei, ștergeți partea din dopul de cauciuc care a apărut cu alcool 70%. În condiții sterile, luați sânge dintr-o venă cu o seringă și injectați printr-un dop de cauciuc într-un flacon (4 ml - într-un flacon pentru adulți, 2 ml - într-un flacon pentru copii).

Este necesar să anunțați Laboratorul în ajunul sau în ziua preluării biomaterialului înainte de ora 11:00.

Depozitarea sângelui până la transport - la temperatura camerei.

Livrare la Laborator în ziua preluării biomaterialului.

3.10. Lapte matern pentru a identifica microflora nespecifică, aceasta este luată din fiecare sân într-o cupă sterilă separată, închisă ermetic. Semnează cupele: „sânul stâng”, „sânul drept”.

Înainte de colectarea biomaterialului, spălați pieptul cu apă caldă și săpun, ștergeți-l cu un prosop curat, tratați cu grijă mameloanele și zona peripapilară cu un tampon de vată umezit cu soluție de etanol 70%, uscați cu un șervețel steril (fiecare glandă este tratată cu un tampon separat). Primii 10-15 ml de lapte extras nu se folosesc pentru analiză. Exprimă a doua porție de lapte din fiecare sân în cana semnată în cantitate de ~ 10 ml.

Este necesar să anunțați Laboratorul în ajunul sau în ziua preluării biomaterialului înainte de ora 11:00.

Livrare la Laborator în termen de 2 ore din ziua preluării materialului.

3.11. Fecale pentru disbacterioză.

Înainte de a preleva proba, este interzis să beți alcool timp de 3 zile și să luați antibiotice timp de 2 săptămâni. Scaunul trebuie obtinut fara clisme si laxative. Copiii cu constipație pot folosi un săpun pentru un efect iritant. Fecalele sunt colectate într-un vas individual, spălate de dezinfectant. Cu o lingură sterilă se iau 3-5 g dintr-o porție medie de fecale și se pun într-un recipient steril.

Este necesar să anunțați Laboratorul în ajunul sau în ziua preluării biomaterialului înainte de ora 11:00.

Depozitare pana in momentul transportului - depozitati recipientul cu biomaterial pentru a se mentine la cald invelit in vata si hartie.

Livrare la Laborator în ziua preluării biomaterialului.

4. Reguli pentru preluarea, depozitarea și transportul biomaterialului

pentru examene microscopice

4.1. De la fiecare pacient 2 pahare(un pahar este de rezervă). Pe fiecare pahar 3 puncte: vagin ( V), canalul cervical ( DIN), uretra ( U). Aplicați mișcări astfel încât suprafața mată să fie în stânga, deasupra și de la ea - de la stânga la dreapta: v, c, u.

4.2. Marcajul (Nr.) de pe sticlă nu trebuie să se dizolve în alcool (puteți semna pe partea mată a paharului cu un simplu creion). Frotiurile trebuie fixate prin uscare la aer (30-60 min).

4.3. Ochelarii trebuie marcați, pliați cu pete unul pe altul, ambalați într-o pungă individuală cu inscripția corespunzătoare (unitate sanitară, numele complet al pacientului, nr. pe sticlă).

4.4. Pachetul și trimiterea completată sunt trimise la Laborator.

5. Reguli pentru preluarea, depozitarea și transportul biomaterialului

5.1. Cu 24 de ore înainte de studiu, este necesar să se excludă dusurile, utilizarea terapiei intravaginale și a actului sexual. Nu puteți lua materialul în timpul menstruației. Cele mai informative sunt probele prelevate la 14-20 de zile de la debutul menstruatiei.

5.2. Materialul este luat înainte de un studiu bimanual, diverse teste de diagnosticare, înainte de a lua materialul pentru PCR. Materialul este luat fără pretratament mucoasa vaginala.

5.3. O răzuire a mucoasei vaginale/cervicale este luată cu o perie de nailon Cervex-Brush, spatulă sau alt instrument și se întinde uniform pe lamă, lăsând un capăt al lamei liber (pentru marcare). Se ia un punct pe sticlă, duplicat pentru încă un pahar de rezervă (doar două pahare pe punct). Frotiurile trebuie fixate prin uscare la aer (30-60 min).

5.4. Ochelarii trebuie marcați (Nr. și numele complet al pacientului), pliați cu frotiuri unul pe celălalt, ambalați într-o pungă individuală cu inscripția corespunzătoare (HCI, numele complet al pacientului, Nr. pe sticlă).

5.5. Frotiurile uscate pot fi păstrate până la 6 zile la temperatura camerei.

5.6. Pachetul și trimiterea completată (o trimitere pentru fiecare punct indicând tipul de biomaterial) sunt transferate la Laborator.

Nu puneți direcția în punga de sticlă, nu înfășurați sticla în direcție!

Departamentul de Diagnosticare Clinică de Laborator cu cursul FPC și PC

Lista secțiunilor la disciplina diagnosticare clinică de laborator pentru pregătirea pentru implementarea testelor la clasă în sesiunea de laborator-examen de iarnă de către studenții anului VI de învățământ la distanță.

1. Structura organizatorică a laboratorului de diagnostic clinic.

2. Studii clinice generale de laborator.

3. Studii hematologice de laborator.

4. Metode de laborator evaluarea hemostazei.

5. Cercetare de laborator biochimic.

6. Controlul calității cercetării de laborator.

Lista întrebărilor de control privind disciplina diagnosticare clinică de laborator pentru pregătirea pentru implementarea testelor la clasă în sesiunea de laborator-examinare de iarnă de către studenții anului VI de învățământ la distanță.

Organizarea structurală a laboratorului de diagnostic clinic.

Documente de reglementare și ordine ale Ministerului Sănătății al Republicii Belarus, care reglementează activitatea laboratorului de diagnostic clinic.

Echipament de laborator de diagnostic clinic.

Principalele echipamente de măsurare și analiză ale laboratorului de diagnostic clinic.

Fundamentele măsurilor de siguranță și regulile de regim sanitar și epidemiologic atunci când se lucrează într-un laborator de diagnostic clinic.

Reguli pentru preluarea, livrarea, primirea, prelucrarea și înregistrarea materialului biologic.

Cercetare clinică generală de laborator.

Pregatirea pacientului pentru studiul, colectarea, depozitarea si prelucrarea materialului pt analiza generala urină.

Proprietățile fizice ale urinei: culoare, transparență, miros, pH, densitate relativă a urinei.

Proprietățile chimice ale urinei, metode de determinare a proteinei totale (metode calitative și cantitative, metode de „chimie uscată”).

Determinarea glucozei în urină folosind hârtie indicator și metoda glucozei oxidazei.

Reguli pentru prepararea unui preparat nativ de sediment urinar.

Determinarea cantitativă a elementelor sedimentului urinar organizat.

Determinarea elementelor de sediment neorganizat.

Tipuri de precipitații neorganizate.

Analiza clinică generală a sângelui.

Caracteristicile metodelor definițiile ESR, concentrația hemoglobinei, numărul de eritrocite, indicele de culoare, leucocite și formula leucocitelor.

Reguli de pregătire a pacientului, prelevare, depozitare și prelucrare a materialului pentru general analiza clinica sânge.

Valori normale și limite ale fluctuațiilor fiziologice ale nivelului de eritrocite și leucocite din sângele periferic.

Reguli pentru pregătirea pregătirii și numărarea în camera Goryaev.

Metoda de determinare a hemoglobinei din sânge prin metoda cianurii de hemoglobină.

Conceptul modern de hematopoieza măduvei osoase.

Procentul de leucocite din sângele periferic. Valoarea diagnostică a formulei leucocitare.

Studii de laborator care caracterizează sistemul de coagulare a sângelui.

Conceptul de sistem de coagulare a sângelui.

hemostaza primară. Metode de laborator pentru studiul hemostazei primare.

Fazele coagulării hemostazei.

fibrinoliza.

sistem anticoagulant.

Metode de laborator pentru aprecierea hemostazei secundare.

Studii de laborator de caracterizare indicatori biochimici sânge.

Indicatori de laborator care caracterizează metabolismul proteinelor. Determinarea proteinelor totale în serul sanguin prin metoda biuretului.

Azotul rezidual și componentele acestuia. Metode de determinare a ureei, creatininei, acidului uric.

Metode pentru studiul enzimelor. Valoarea clinică și diagnostică a determinării activității enzimelor.

Rolul biologic al carbohidraților. Determinarea continutului de glucoza prin metoda enzimatica.

Lipoproteinele plasmatice. Indicatori de laborator ai metabolismului lipidic.

Formarea și metabolismul pigmenților biliari. Semnificația clinică și diagnostică a studiului indicatorilor metabolismului pigmentului.

Fiabilitatea analitică și controlul calității studiilor clinice de laborator.

Evaluarea analitică a rezultatelor de laborator. Tipuri de erori, caracteristicile lor.

Controlul calității intralaborator. Metode de monitorizare a reproductibilității rezultatelor cercetării. Controlul corectitudinii rezultatelor studiului.

Clăsând o concluzie de laborator analitică.

Concluzia de laborator analitică se întocmește în funcție de condițiile problemei situaționale.

Pe baza analizei datelor de laborator propuse, trebuie să se răspundă la următoarele întrebări:

Principiul care stă la baza metodei analizate;

Echipamentele necesare;

Reguli de pregătire a materialului de testare și principalele surse de erori posibile la efectuarea acestei metode;

Unități;

Conceptul de valori referenţiale. Valoarea clinică și diagnostică a metodei analizate.

Abilitati practice:

Organizarea locului de munca pentru cercetare de laborator;

Prepararea reactivilor în concentrația necesară;

Recepția, etichetarea și depozitarea materialului biologic;

Efectuarea unui test general de sânge;

Efectuarea unei analize generale a urinei;

Efectuarea unui studiu hemostaziologic;

Efectuarea de studii biochimice;

Înregistrarea rezultatelor cercetărilor de laborator;

Procedura de preluare a materialului clinic într-o eprubetă cu un mediu de transport:

1. Deschideți capacul flaconului.

2. Folosind o sondă sterilă de unică folosință, obțineți descărcarea corespunzătoare

biotop (vagin, uretra, canal cervical).

3. Transferați sonda cu material clinic într-un tub cu un mediu de transport de 1,5 ml, când sonda lovește fundul tubului, îndoiți partea subțire a sondei spre crestătură cu forță suplimentară, apoi rupeți-o și lăsați-o. sonda în tub.Dacă este necesar, obțineți material clinic din mai multe biotopi, repetați procedura, luând de fiecare dată materialul clinic cu o nouă sondă într-un tub nou.

3. Închideți bine tubul cu un capac, marcați-l.

Caracteristicile luării materialului clinic al canalului cervical:

1. Materialul clinic al canalului cervical se obține după introducerea unui speculum în vagin cu ajutorul unei sonde uretrale sau al citopersuței cervicale (este necesar un număr suficient de celule epiteliale pentru testarea HPV!).

2. Înainte de a lua materialul clinic, este necesar să tratați cu atenție deschiderea canalului cervical cu un tampon de tifon steril și apoi să tratați colul uterin cu soluție salină sterilă.

3. După introducerea sondei uretrale în canalul cervical cu 1,5 cm, se rotește de mai multe ori (2-3 ture complete în sensul acelor de ceasornic) și se scoate. La îndepărtarea sondei, este necesar să se excludă complet contactul acesteia cu pereții vaginului.

4. Materialul clinic obținut este plasat într-o eprubetă cu mediu de transport (vezi mai sus).

Caracteristici ale preluării materialului clinic din vagin:

În ziua examinării, femeile nu ar trebui să toalete organele genitale și să nu facă duș în vagin.

1. Materialul clinic din vagin se obține din fornixul posterior sau lateral folosind o sondă vaginală sau uretrală prin răzuire de pe suprafața epiteliului.

2. Materialul clinic trebuie obținut ÎNAINTE de examinarea manuală.

3. Înainte de manipulare, speculul ginecologic poate fi umezit cu apă caldă, este contraindicată utilizarea de antiseptice pentru tratarea speculului.

4. La fete (fecioara), materialul clinic este obținut din membrana mucoasă a vestibulului vaginului fără utilizarea unui speculum ginecologic.

5. Materialul clinic obținut este plasat într-o eprubetă cu mediu de transport (vezi mai sus).

Caracteristici ale prelevării materialului clinic din uretra la femei:

1. Materialul clinic din uretra se obtine cu ajutorul unei sonde uretrale.

2. Înainte de a lua materialul clinic, pacientul este sfătuit să se abțină de la urinare timp de 1,5-2 ore.

3. Dacă există scurgeri uretrale libere, orificiul extern al uretrei trebuie curățat cu un tampon de bumbac.

4. In lipsa secretiilor libere se poate efectua un usor masaj al uretrei.

5. După introducerea instrumentului în uretră la o adâncime de 1 cm, este necesar să îl avansați până la deschiderea externă, apăsând ușor pe spatele și pereții laterali ai uretrei (mișcările de rotație sunt dureroase).

6. Materialul clinic obținut este plasat într-o eprubetă cu mediu de transport (vezi mai sus).

Pentru a studia materialul obtinut din mai multe biotopi se repeta procedura, de fiecare data folosind o noua sonda sterila si o noua eprubeta!!!

Este inacceptabil să amestecați materialul din canalul cervical, conținutul vaginal și uretra într-un singur tub!

Caracteristici ale prelevării de material clinic din uretra la bărbați:

1,5-2 ore. Pentru a exclude distorsiunile rezultatelor determinării compoziției microflorei tractului urogenital al bărbaților din cauza prezenței microflorei tranzitorii în tractul urogenital, abstinența sexuală sau utilizarea contactului sexual protejat se recomandă timp de trei zile înainte de a lua biomaterialul.

1. Înainte de a lua o răzuire din uretra, capul penisului este tratat în zona deschiderii externe a uretrei cu un tampon umezit cu soluție salină sterilă.

2. Masați uretra. În prezența secrețiilor care curg liber din uretră, acestea sunt îndepărtate cu un tampon uscat.

3. Sonda este introdusă în uretră la o adâncime de 1-2 cm.Cu mai multe mișcări de rotație se efectuează răzuirea celulelor epiteliale și sonda este transferată într-o eprubetă cu mediu de transport, ruptă și lăsată. Detașabil este luat în cantitate suficientă. Este acceptabilă o prezență moderată a impurităților sub formă de mucus, sânge și puroi.

Preluarea materialului clinic Cupreputul glandului penisului (HRP):

Înainte de a lua biomaterialul, pacientul este sfătuit să se abțină de la urina pt

1,5-2 ore.

1. Folosind o sondă de unică folosință, se face o răzuire a celulelor epiteliale din biotopul corespunzător ( preput glandul penisului, sac prepuțial) și transferați sonda într-o eprubetă cu mediu de transport, desprindeți și plecați.

Condiții pentru depozitarea și transportul biomaterialului:

1. Tuburile cu materialul clinic primit trebuie să fie etichetate.

2. În documentul-direcție de însoțire, este necesar să se indice: numele complet, vârsta pacientului (pacienților), materialul clinic, diagnosticul propus, indicațiile pentru examinare, data și ora prelevării, denumirea instituției (departamentului) care trimite materialul clinic.

3. În cazul în care timpul de transport al materialului clinic de la momentul preluării până la momentul livrării acestuia la laborator nu este mai mare de o zi, atunci tubul cu material clinic trebuie depozitat și livrat la laborator la temperatura de un frigider de uz casnic (+ 4 + 10 ° C), fără congelare.

Reguli pentru preluarea, depozitarea și transportul biomaterialului

Pentru detectarea agenților patogeni prin PCR

1.1.1. Biomaterialul este preluat din habitatul așteptat al microorganismelor și din dezvoltarea infecției.

1.1.2. Cantitatea de material colectată trebuie să fie mică. Excesul de descărcare, mucus și puroi afectează negativ calitatea extracției ADN și contribuie la degradarea ADN-ului în timpul depozitării și transportului.

1.1.3. Când introduceți un biomaterial prelevat de la un pacient cu o sondă cu un tampon de vată sau o perie într-un tub Eppendorf cu o soluție tampon, este necesar:

Observați sterilitatea;

Înainte de a scufunda biomaterialul colectat pe tampon (perie) în soluție, ungeți-l pe peretele uscat al eprubetei, apoi umeziți tamponul (peria) în soluție și, rotind sonda, spălați bine tot materialul din peretele eprubetei și tamponul (peria);

Dacă este posibil, strângeți tamponul de peretele eprubetei, îndepărtați sonda cu tamponul (peria) și închideți eprubeta.

Metode de preluare a biomaterialului pentru cercetare prin PCR

1.2.1. Razuire. Pentru răzuire se folosesc sonde sterile de unică folosință care au un tampon de vată cu adsorbție crescută sau „perii”, mai rar linguri Volkmann, linguri mici pentru urechi sau instrumente similare cu marginile ușor tocite. Mișcări de răzuire pentru colectarea materialului. Materialul de testat trebuie să conțină cât mai multe celule epiteliale și o cantitate minimă de impurități de mucus, sânge și exudat. Transferați materialul într-un tub Eppendorf steril cu soluție tampon (vezi secțiunea 1.1.).

Razuire din canalul cervical:înainte de a lua o răzuire, este necesar să îndepărtați excesul de mucus cu un tampon de bumbac steril, tratați colul uterin cu soluție salină sterilă. Introduceți sonda în canalul cervical la o adâncime de 0,5-1,5 cm, evitând contactul cu pereții vaginului și colectați materialul cu o mișcare de răzuire (nu la sânge). Un număr mic de globule roșii din probă nu afectează rezultatul analizei. În prezența eroziunii cervicale, materialul este preluat de la marginea țesutului sănătos și alterat.

Razuire din uretra: introduceți sonda în uretră (la bărbați - la o adâncime de 2-4 cm) și colectați materialul cu mai multe mișcări de rotație. În ajunul luării materialului este permisă o provocare (mâncare picant, alcool etc.). Se recomandă să vă abțineți de la urinare timp de 1-2 ore înainte de prelevare. În prezența scurgerii purulente abundente, răzuirea trebuie luată nu mai târziu de 15 minute după urinare.

Razuire din conjunctiva luați, după ce ați anesteziat în prealabil ochiul cu o soluție de dicaină 0,5%. După ce întoarceți pleoapa, utilizați o sondă cu un tampon de vată (sau un bisturiu pentru ochi) pentru a colecta celulele epiteliale din conjunctivă.

Razuire din rect: introduceți sonda în anus la o adâncime de 3-4 cm și colectați materialul cu o mișcare de rotație.

1.2.2. Accident vascular cerebral. Folosind o sondă sterilă de unică folosință cu un tampon de vată sau o perie, luați o cantitate mică de scurgere (din bolțile vaginului, din faringe, nazofaringe etc.) și transferați-o într-un tub Eppendorf steril cu o soluție tampon (vezi secțiunea 1.1.).

1.2.3. Sânge. Pentru testarea PCR, sângele trebuie să fie nativ(nu încolțit).

Recoltați sângele aseptic, prin puncție venoasă - într-o eprubetă de marcă (2-3 ml) cu anticoagulant EDTA ( heparina nu trebuie folosită ca anticoagulant!), amestecați ușor răsturnând ușor tubul.

Sângele cu EDTA este un biomaterial pentru următoarele grupuri de cercetare:

- cercetare genetică(momentul prelevării de sânge nu contează).

- detectarea agenților infecțioși(Cele mai informative sunt probele prelevate în timpul frisoanelor, temperaturii ridicate, adică probabil în timpul viremiei sau bacteriemiei).

1.2.4. Urină.Într-un recipient steril gol, cu un capac etanș cu filet, colectați prima porțiune de dimineață sau mijlocul urinei într-o cantitate de cel puțin 10 ml. Dacă prelevarea de urină se efectuează în timpul zilei, atunci înainte de aceasta, pacientul nu trebuie să urineze timp de 1,5-3 ore.

1.2.5. Spută. Dimineața, igienizați gura și gâtul (clătiți cu o soluție de bicarbonat de sodiu). Colectați spută într-o fiolă sterilă, goală, cu gura largă.

1.2.6. Biopsie. Materialul trebuie luat din zona presupusei locații a agentului infecțios, din țesutul deteriorat sau din zona care se învecinează cu deteriorarea. Introduceți biopsia într-un tub Eppendorf steril cu soluție tampon.

1.2.7. Saliva, suc gastric, lichid cefalorahidian, lichid sinovial. Saliva (1-5 ml), suc gastric (1-5 ml), lichid cefalorahidian (1-1,5 ml) - se pune intr-o eprubeta sterila goala (recipient).

1.2.8. Suc de prostată. După masajul prostatei, sucul este colectat într-o cantitate de 0,5-1 ml într-o eprubetă (recipient) sterilă goală. Dacă este imposibil să obțineți suc, imediat după masaj, prima porție de urină este colectată într-o cantitate de cel mult 10 ml (această porție conține suc de prostată).

1.2.9. Spălări, lavaj bronhoalveolar (BAL). Cu un tampon de bumbac steril și 5-7 ml de soluție salină, se efectuează o spălare, de exemplu, de la vârful unui endoscop sau bronhoscop și 0,5-5 ml de spălare sunt plasate într-un tub steril (recipient) gol.

1.2.10. Fecale. O sondă cu un tampon de bumbac este plasată în interiorul scaunului și ușor rotită, captând o cantitate mică de material. Apoi materialul este plasat într-un tub Eppendorf steril cu o soluție tampon.

Dacă este necesară efectuarea unei analize întârziate (transport pe distanțe lungi, defecțiune tehnică a dispozitivului etc.), probele de sânge sunt păstrate la frigider (4 o - 8 o C) și examinate în 24 de ore. Cu toate acestea, trebuie luat în considerare faptul că celulele se umflă și parametrii asociați cu volumul lor se modifică. Practic oameni sanatosi aceste modificări nu sunt critice și nu afectează parametrii cantitativi, dar în prezența celulelor patologice, acestea din urmă se pot modifica sau chiar se pot prăbuși în câteva ore din momentul prelevării sângelui.

Imediat înainte de studiu, sângele trebuie amestecat bine timp de câteva minute pentru a dilua anticoagulantul și a distribui uniform elementele formate în plasmă. Amestecarea constantă pe termen lung a probelor până în momentul cercetării lor nu este recomandată din cauza posibilelor leziuni și degradare a celulelor patologice.

Un test de sânge pe un analizor automat este efectuat la temperatura camerei. Sângele depozitat într-un frigider trebuie mai întâi încălzit la temperatura camerei, deoarece vâscozitatea sângelui crește la temperaturi scăzute și celulele sanguine tind să se lipească, ceea ce, la rândul său, duce la amestecare deteriorată și liză incompletă. Studiul sângelui rece poate provoca apariția „semnalelor de alarmă” din cauza compresiei histogramei leucocitelor.

Atunci când se efectuează studii hematologice la o distanță considerabilă de locul prelevării de sânge, apar inevitabil probleme asociate cu condiții nefavorabile de transport. Impactul factorilor mecanici (agitare, vibrații, amestecare etc.), condițiile de temperatură, probabilitatea de scurgere și contaminarea probelor pot afecta calitatea analizelor. Pentru a elimina aceste motive, la transportul tuburilor de sânge, se recomandă utilizarea tuburilor de plastic închise ermetic și a recipientelor speciale de transport izotermic. În timpul transportului nu este permis contactul probei (cu material nativ) și al formularului de trimitere, în conformitate cu regulile de siguranță biologică.

^ 4.3. Recepția și înregistrarea materialului biologic

Tuburile cu probe de sânge venos sunt livrate la laborator în ziua preluării lor în rafturi în pungi speciale pentru livrarea materialului biologic, în care tuburile trebuie să fie în poziție verticală, iar atunci când sunt transportate la distanță - în recipiente speciale .

Angajatul de laborator care primește materialul trebuie să verifice:

Corectitudinea sesizării: formularul de trimitere indică datele subiectului (nume, prenume și patronimic, vârstă, anamneză sau număr card de ambulatoriu, secție, diagnostic, terapie);

Etichetarea eprubetelor cu probe de sânge (trebuie marcate cu codul sau prenumele pacientului, identic cu codul și prenumele din formularul de trimitere a materialului pentru studiu). Asistentul de laborator trebuie să înregistreze materialul livrat, să noteze numărul de eprubete.

^ 4.4 Numărarea compozitia celulara sânge pe un analizor hematologic

Calculul compoziției celulare a sângelui pe un analizor hematologic trebuie efectuat în strictă conformitate cu instrucțiunile pentru dispozitiv.

Când lucrați la un analizor hematologic, ar trebui să:

Folosiți sânge stabilizat cu K-2 EDTA în proporția recomandată pentru sare specifică și tuburi hematologice de unică folosință (plată sau vid);

Înainte de analiză, amestecați cu atenție, dar temeinic tubul cu sânge (se recomandă utilizarea unui dispozitiv pentru amestecarea probelor de sânge - rotomix în acest scop);

Utilizați reactivi înregistrați în modul prescris; atunci când schimbați reactivii cu produse de la alt producător, verificați și setați calibrarea instrumentului;

Porniți dispozitivul, observând toate etapele de spălare, obținând valori zero (de fundal) ale indicatorilor pentru toate canalele;

Acordați atenție mesajelor instrumentului despre posibile erori sistematice: amintiți-vă că creșterea MCHC este mai mare valori normale, de obicei rezultatul unei erori de măsurare;

Dacă este detectată o eroare, este imperativ să eliminați cauza, nu lucrați la un dispozitiv defect;

Efectuați procedura de control al calității conform programului corespunzător. cu o evaluare a rezultatului;

Lucrați în mod semnificativ, comparând rezultatele obținute cu caracteristică clinică mostre de pacienti;

După terminarea măsurătorilor, clătiți bine analizorul;

Când opriți dispozitivul pentru o perioadă lungă de timp, este imperativ să efectuați toate procedurile de conservare (dacă este posibil, împreună cu un inginer de service);

În cazul unor probleme tehnice, ar trebui să solicitați ajutorul unui inginer de service de la o companie autorizată întreținere; Nu încredințați munca unui personal neinstruit.

Când începeți să lucrați la un analizor hematologic, trebuie să țineți cont de limitele liniarității măsurării parametrilor analizați. Evaluarea probelor cu valori ale parametrilor analizați care depășesc limita liniarității măsurătorii poate duce la rezultate eronate. În cele mai multe cazuri, atunci când se analizează probe cu hipercitoză, analizorul afișează pictograma „D” (diluat) în locul valorii parametrului măsurat, care indică necesitatea diluării probei și re-măsurare. Diluarea trebuie efectuată până când se obțin rezultate finale similare la următoarele două diluții.

^ PRI me R ─ Analiza unui eșantion de pacient cu hiperleucocitoză pe trei analizoare hematologice diferite este prezentată în tabel.

Tabelul 3

¦Rezultatele numărării hiperleucocitozei efectuate pe trei analizoare hematologice diferite

1. 
   ^ Calibrarea analizoarelor hematologice

Care realizează egalitatea la zero a componentei sistematice a erorii (zero bias) sau confirmă că biasul este zero, ținând cont de eroarea de calibrare. Calibrarea analizoarelor hematologice poate fi efectuată în două moduri principale:

Pentru sânge integral;

Pe baza probelor de sânge stabilizate cu valori certificate.

^ 5.1 Calibrarea sângelui integral

Calibrarea sângelui integral poate fi efectuată prin comparație cu un analizor de referință, a cărui calibrare a fost verificată și poate fi luată ca original.

Pentru calibrare prin comparație cu analizorul de referință se folosesc 20 de probe de sânge venos de la pacient, selectate aleatoriu din programul zilnic de cercetare al laboratorului care are analizatorul de referință. Sângele trebuie luat în tuburi vidate cu anticoagulant K 2 EDTA. După analiza pe analizorul de referință, tuburile de sânge sunt livrate la laborator pentru analize pe dispozitivul care este calibrat. Timpul dintre măsurătorile de pe analizorul de referință și cel calibrat nu trebuie să depășească 4 ore. Analiza probelor de calibrare pe instrumentul de calibrat trebuie efectuată în același mod ca și analiza probelor pacientului. Rezultatele obținute se înscriu într-un tabel în forma dată în Anexa 1. Aceste rezultate sunt utilizate pentru a determina factorii de calibrare corespunzători, care sunt numeric egali cu coeficienții pantei dreptelor de calibrare care trec prin origine pe grafic.

Factorii de calibrare se calculează pe un computer utilizând programul EXCEL inclus în pachetul Microsoft OFFICE al oricărei versiuni. Pentru a calcula factorii de calibrare în acest program, se construiește un grafic de dispersie, unde valorile măsurate sunt reprezentate de-a lungul axei X, valorile de referință sunt reprezentate de-a lungul axei Y și o linie de regresie este stabilită prin origine. Programul desenează o linie de calibrare și determină panta acesteia, care este factorul de calibrare dorit. Dacă sunt detectate erori grave - puncte care sunt separate semnificativ de linia de calibrare de pe grafic, acestea trebuie eliminate din calcul (ștergeți întreaga linie din tabelul EXCEL). Factorul de calibrare rezultat este introdus în tabelul din apendicele 1 și este utilizat pentru a regla manual calibrarea dispozitivului în conformitate cu instrucțiunile de utilizare ale acestuia.

1. 
   ^ Calibrare față de probe de sânge stabilizate cu valori certificate

Ori de câte ori este posibil, trebuie utilizați calibratori special conceputi de producător pentru a calibra un anumit tip de analizor. Erorile valorilor stabilite în calibratoarele hematologice moderne corespund în general cerințe medicale. Cu toate acestea, nu toate tipurile de analizoare au astfel de calibratori. În plus, din cauza termenului de valabilitate limitat (de obicei nu mai mult de 45 de zile), nu este întotdeauna posibilă obținerea de mostre care nu sunt expirate.

Materialele de control nu sunt destinate de către producător în scopuri de calibrare: toleranțele pentru valori sunt mult mai largi, metodele de validare și control al producției nu sunt la fel de stricte ca pentru calibratori. În timpul calibrării, materialele de control pot fi utilizate doar ca una dintre sursele de informații despre proprietățile metrologice ale dispozitivului.

Cu toate acestea, trebuie avut în vedere faptul că, atunci când atât materialele de control, cât și calibratorii sunt utilizați în scopuri de calibrare, caracteristicile de pregătire a probei și de funcționare a analizoarelor au un impact semnificativ asupra componentelor erorii sistematice. Acești factori de influență nu pot fi luați în considerare la calibrarea cu materiale comerciale. Ca urmare, în toate cazurile, calibrarea efectuată trebuie verificată prin analiza statisticii rezultatelor obținute în probele de pacienți (indici eritrocitari, intervale de valori normale).

5.2.1 Intervale de calibrare pentru analizoare hematologice

Cerințele privind intervalul de calibrare se găsesc de obicei în manualul de instrucțiuni al analizorului. De regulă, calibrarea este necesară după o reparație sau când se detectează o deviere semnificativă în procedurile interne de control al calității.

5.2.2 Procedura de calibrare

Procedura de calibrare se efectuează în conformitate cu manualul de instrucțiuni al analizorului.

5.2.3 Verificarea rezultatului calibrării

Acest control constă în analiza probei de calibrare imediat după calibrare. Calibrarea efectuată este acceptată dacă rezultatele analizei corespund valorilor de calibrare, ținând cont de variația analitică a analizorului.

5.2.4 Verificarea calibrării folosind indici RBC

Această metodă de verificare și rafinare a calibrării folosește faptul că valorile medii ale indicilor eritrocitelor - MCHC, MCH și MCV pentru pacienți au o variație destul de mică și, prin urmare, pot fi utilizate eficient pentru controlul calibrării și controlul suplimentar al calității. Numărul recomandat de probe pentru mediere este de 20. Orice probă de pacient poate fi utilizată pentru a determina media MCHC, în timp ce pacienții cu anemie ar trebui excluși din MCHC și MCV medii.

Multe analizoare hematologice moderne au programe încorporate pentru calcularea mediilor curente, ceea ce simplifică foarte mult procesarea datelor.

Valorile țintă ale indicilor de eritrocite, în medie pe 20 de eșantioane de pacienți cu vârsta cuprinsă între 18 și 60 de ani, indiferent de sex, sunt prezentate în Tabelul 4.

Tabelul 4

Valorile țintă ale indicilor eritrocitari

Dacă valorile medii obținute sunt în afara toleranței de control, atunci aceasta înseamnă că calibrarea MCV sau Hgb sau RBC trebuie corectată.

Atunci când se determină motivele unei calibrări nesatisfăcătoare din studiul parametrilor eritrocitelor atunci când se utilizează materiale comerciale de calibrare / control, trebuie luată în considerare următoarea evaluare a fiabilității valorilor certificate ale materialelor:

Parametrul cel mai precis și mai stabil în timp este concentrația de eritrocite;

Hgb este un parametru stabil, dar poate depinde de reactivii utilizați (de exemplu, cianuri sau fără cianuri);

Cel mai instabil parametru este MCV. Valoarea MCV tinde să se modifice pe toată durata de valabilitate a materialului într-o gamă destul de largă de valori. La rafinarea calibrării MCV, datele obținute din analiza mediilor indicilor eritrocitari au prioritate față de valorile certificate în probele de sânge stabilizate.

Presupunând că calibrarea RBC este corectă, tabelul 5 indică motive posibile ieșirea valorilor medii ale indicilor dincolo de toleranța de control.

Tabelul 5

Motive pentru a depăși valorile medii ale indicilor eritrocitari