Mida tähendab HIV ahhaadi analüüs 1 2. Kaasaegsed meetodid HIV-nakkuse diagnoosimiseks

HIV-nakkuse õigeaegne diagnoosimine muutub äärmiselt oluliseks meetmeks, kuna varasem ravi võib suuresti määrata haiguse edasise arengu ja pikendada patsiendi eluiga. AT viimased aastad Selle kohutava haiguse avastamise valdkonnas on tehtud märkimisväärseid edusamme: vanad testimissüsteemid asendatakse arenenumatega, uurimismeetodid muutuvad kättesaadavamaks ja nende täpsus suureneb oluliselt.

Selles artiklis räägime kaasaegsetest HIV-nakkuse diagnoosimise meetoditest, mida on kasulik teada õigeaegne ravi selle probleemi lahendamiseks ja haigete normaalse elukvaliteedi säilitamiseks.

HIV-i diagnoosimise meetodid

Venemaal viiakse HIV-nakkuse diagnoosimiseks läbi standardprotseduur, mis hõlmab kahte taset:

• ELISA testisüsteem (sõelanalüüs);
• immuunblotanalüüs (IB).

Kasutada võib ka muid diagnostilisi meetodeid:

• ekspresstestid.

ELISA testisüsteemid

Diagnoosimise esimeses etapis kasutatakse HIV-nakkuse tuvastamiseks skriiningtesti (ELISA), mis põhineb laborites loodud HIV-valkudel, mis püüavad kinni infektsioonile vastuseks organismis toodetud spetsiifilised antikehad. Pärast nende interaktsiooni katsesüsteemi reagentidega (ensüümidega) muutub indikaatori värvus. Lisaks töödeldakse neid värvimuutusi spetsiaalsel seadmel, mis määrab tehtud analüüsi tulemuse.

Sellised ELISA testid näitavad tulemusi mõne nädala jooksul pärast HIV-nakkuse sissetoomist. See analüüs ei määra viiruse olemasolu, vaid tuvastab selle vastaste antikehade tekke. Mõnikord algab HIV-vastaste antikehade tootmine inimkehas 2 nädalat pärast nakatumist, kuid enamikul inimestel toodetakse neid kauem kui hilisemad kuupäevad 3-6 nädala pärast.

Erineva tundlikkusega ELISA teste on neli põlvkonda. Viimastel aastatel on sagedamini kasutusele võetud III ja IV põlvkonna testimissüsteemid, mis põhinevad sünteetilistel peptiididel või rekombinantsetel valkudel ning on suurema spetsiifilisuse ja täpsusega. Neid saab kasutada HIV-nakkuse diagnoosimiseks, HIV levimuse jälgimiseks ja ohutuse tagamiseks annetatud vere testimisel. III ja IV põlvkonna ELISA testisüsteemide täpsus on 93-99% (tundlikumad on testid, mida toodetakse Lääne-Euroopas - 99%).

ELISA testi tegemiseks võetakse patsiendi veenist 5 ml verd. Viimase söögikorra ja analüüsi vahel peaks olema vähemalt 8 tundi (reeglina tehakse seda hommikul tühja kõhuga). Sellist testi soovitatakse teha mitte varem kui 3 nädalat pärast väidetavat nakatumist (näiteks pärast kaitsmata vahekorda uue seksuaalpartneriga).

ELISA testi tulemused saadakse 2-10 päeva pärast:

• negatiivne tulemus: näitab HIV-nakkuse puudumist ja ei nõua eriarsti suunamist;
• valenegatiivne tulemus: võib täheldada varajased kuupäevad infektsioon (kuni 3 nädalat), AIDSi hilises staadiumis koos raske immuunsupressiooni ja ebaõige vere ettevalmistamisega;
• valepositiivne tulemus: seda võib täheldada mõne haiguse ja vale vere ettevalmistamise korral;
• positiivne tulemus: näitab infektsiooni HIV-nakkus, on vajalik IB ja patsiendi saatekiri AIDS-i keskuse eriarsti vastuvõtule.

Miks võib ELISA test anda valepositiivseid tulemusi?

ELISA-testi HIV-testi valepositiivseid tulemusi võib täheldada vale veretöötluse või selliste seisundite ja haigustega patsientidel:

• hulgimüeloom;
• Epsteini-Barri viiruse põhjustatud nakkushaigused;
• olek pärast ;
• autoimmuunhaigused;
• raseduse taustal;
• seisund pärast vaktsineerimist.

Ülalkirjeldatud põhjustel võib veres esineda mittespetsiifilisi ristreageerivaid antikehi, mille teket HIV-nakkus ei kutsunud esile.

Viimastel aastatel on valepositiivsete tulemuste sagedus oluliselt vähenenud tänu III ja IV põlvkonna testsüsteemide kasutamisele, mis sisaldavad tundlikumaid peptiid- ja rekombinantseid valke (need sünteesitakse in vitro geenitehnoloogia abil). Pärast selliste ELISA testide kasutamist on valepositiivsete tulemuste sagedus oluliselt vähenenud ja on umbes 0,02-0,5%.

Paljastamine on vale positiivne tulemus ei tähenda, et inimene on HIV-nakkusega. Sellistel juhtudel soovitab WHO teist ELISA testi (kohustuslik IV põlvkond).

Patsiendi veri saadetakse referent- või arbitraažilaborisse, millel on märge "korda" ja seda testitakse IV põlvkonna ELISA testisüsteemiga. Kui uue analüüsi tulemus on negatiivne, tunnistatakse esimene tulemus ekslikuks (valepositiivne) ja IB-d ei tehta. Kui teise testi tulemus on positiivne või kaheldav, peab patsient HIV-nakkuse kinnitamiseks või ümberlükkamiseks läbima IB 4-6 nädala pärast.

immuunbloteerimine

HIV-nakkuse lõpliku diagnoosi saab määrata alles pärast positiivse tulemuse saamist. immuunbloteerimine(IB). Selle rakendamiseks kasutatakse nitrotselluloosi riba, millele kantakse viirusvalgud.

IB vereproovid võetakse veenist. Seejärel läbib see eritöötluse ning selle seerumis sisalduvad valgud eraldatakse spetsiaalses geelis vastavalt nende laengule ja molekulmassile (manipulatsioon toimub spetsiaalsel seadmel elektrivälja mõjul). Vereseerumi geelile kantakse nitrotselluloosi riba ja spetsiaalses kambris tehakse blotimine (“bloteerimine”). Riba töödeldakse ja kui kasutatud materjalid sisaldavad HIV-vastaseid antikehi, seostuvad need IB antigeensete ribadega ja ilmuvad joontena.

IB loetakse positiivseks, kui:

• Ameerika CDC kriteeriumide järgi - ribal on kaks või kolm rida gp41, p24, gp120 / gp160;
• Ameerika FDA kriteeriumide kohaselt - ribal on kaks rida p24, p31 ja rida gp41 või gp120 / gp160.

99,9% juhtudest viitab positiivne IB tulemus HIV-nakkusele.

Ridade puudumisel on IB negatiivne.

Liinide tuvastamisel gp160, gp120 ja gp41-ga on IB kaheldav. Sellist tulemust saab tuvastada, kui:

• onkoloogilised haigused;
• Rasedus;
• sagedased vereülekanded.

Sellistel juhtudel on soovitatav läbi viia teine ​​uuring, kasutades teise ettevõtte komplekti. Kui pärast täiendavat IB-d jääb tulemus kahtlane, siis on vajalik järelkontroll kuus kuud (IB tehakse iga 3 kuu järel).

polümeraasi ahelreaktsioon

PCR-testiga saab tuvastada viiruse RNA-d. Selle tundlikkus on üsna kõrge ja võimaldab tuvastada HIV-nakkuse juba 10 päeva pärast nakatumist. Mõnel juhul võib PCR anda valepositiivseid tulemusi, kuna selle kõrge tundlikkus võib reageerida ka teiste infektsioonide antikehadele.

See diagnostikameetod on kallis, nõuab spetsiaalset varustust ja kõrgelt kvalifitseeritud spetsialiste. Need põhjused ei võimalda seda populatsiooni massilise testimise ajal läbi viia.

PCR-i kasutatakse järgmistel juhtudel:

• HIV avastamiseks vastsündinutel, kes on sündinud HIV-nakkusega emadele;
• HIV tuvastamiseks "aknaperioodil" või kahtlase IB korral;
• kontrollida HIV kontsentratsiooni veres;
• doonorivere uurimiseks.

Ainult PCR-testiga HIV-i diagnoosi ei panda, vaid see tehakse nii täiendav meetod diagnostika vaidluste lahendamiseks.

Ekspressmeetodid

HIV-diagnostika üheks uuenduseks on saanud kiirtestid, mille tulemusi saab hinnata 10-15 minutiga. Kõige tõhusamad ja täpsemad tulemused saadakse kapillaaride voolu põhimõttel põhinevate immunokromatograafiliste testidega. Need on spetsiaalsed ribad, millele kantakse verd või muid uuritavaid vedelikke (sülg, uriin). HIV-vastaste antikehade olemasolul ilmub 10-15 minuti pärast testile värviline kontrollriba - positiivne tulemus. Kui tulemus on negatiivne, kuvatakse ainult kontrolljoon.

Nagu ELISA testide puhul, tuleb kiirtesti tulemusi kinnitada IB analüüsiga. Alles pärast seda saab määrata HIV-nakkuse diagnoosi.

Koduseks testimiseks on olemas kiirkomplektid. OraSure Technologies1 (USA) test on FDA poolt heaks kiidetud, saadaval ilma retseptita ja seda saab kasutada HIV tuvastamiseks. Pärast testi, positiivse tulemuse korral, soovitatakse patsiendil diagnoosi kinnitamiseks läbida uuring spetsialiseeritud keskuses.

Ülejäänud koduseks kasutamiseks mõeldud teste ei ole FDA veel heaks kiitnud ja nende tulemused võivad olla väga küsitavad.

Hoolimata asjaolust, et kiirtestid on IV põlvkonna ELISA testidest madalama täpsusega, kasutatakse neid laialdaselt elanikkonna täiendavaks testimiseks.

HIV-nakkuse testi saate teha igas polikliinikus, Regionaalhaiglas või AIDSi spetsialiseeritud keskustes. Venemaa territooriumil hoitakse neid täiesti konfidentsiaalselt või anonüümselt. Iga patsient võib enne või pärast analüüsi oodata meditsiinilist või psühholoogilist nõu. HIV-testide eest peate maksma ainult kaubanduses raviasutused ning avalikes kliinikutes ja haiglates tehakse neid tasuta.

Lisateavet selle kohta, kuidas võite saada HIV-nakkuse ja millised müüdid levivad nakatumisvõimaluste kohta, lugege

1 Määrake ülesanne

1.1 Komplekt on ette nähtud inimese immuunpuudulikkuse viiruse esimest ja teist tüüpi (HIV-1 ja HIV-2) antikehade ja HIV-1 p24 antigeeni samaaegseks tuvastamiseks inimese seerumis ja plasmas "in vitro" kaudse ensüümi abil. seotud immunosorbentanalüüs.

2 Komplekti omadused ja tööpõhimõte

2.1 Määra kompositsioon:

2.2 "ELISA-HIV 1.2 AGAT" komplekti põhikomponendid on immunosorbent, konjugaadilahus nr 1 ja konjugaat nr 2.

Immunosorbent on polüstüreentablett, mille süvendites on adsorbeeritud rekombinantsete HIV-1 (gp41) ja HIV-2 (gp36) antigeenide ning HIV-1 p24 antigeeni vastaste monoklonaalsete antikehade segu.

Konjugaadi lahus nr 1 on segu biotiiniga märgistatud monoklonaalsetest inimese antikehadest HIV-1 p24 antigeeni ja biotiiniga märgistatud rekombinantsete HIV-1 ja HIV-2 valkude vastu.

Konjugaat nr 2 on mädarõika peroksüdaasiga konjugeeritud streptavidiin.

Positiivne kontrollproov AT- inimese vereseerum, mis sisaldab HIV-1 ja HIV-2 vastaseid antikehi, mis ei sisalda C-hepatiidi viiruse ja Treponema pallidum'i antikehi, HIV-1 p24 antigeeni ja HBs antigeeni, inaktiveeritud kuumutamisel 3 tundi temperatuuril 56 ºC.

Positiivne kontrollproov AG– natiivset p24 HIV-1 antigeeni sisaldav inimese vereseerum, mis ei sisalda HIV-1, HIV-2, C-hepatiidi viiruse ning Treponema pallidum'i ja HBs antigeeni antikehi, inaktiveeritud 3 tunni jooksul temperatuuril 56 ºC kuumutamisel.

Negatiivne kontrollproov– inimese vereseerum, mis ei sisalda HIV-1, HIV-2, HCV, HIV-1 p24 antigeeni ja HBs antigeeni antikehi, inaktiveeritud 3 tunni jooksul temperatuuril 56 ºC kuumutamisel.

Komplekti tööpõhimõte. Kui tableti süvenditesse lisatakse konjugaadi nr 1 lahus ja nakatunud vere seerumiproovid, seondub p24 antigeen nii spetsiifiliste antikehadega tahkel faasil kui ka monoklonaalsete biotinüülitud p24-vastaste antikehadega, mis on osa konjugaadilahusest. nr 1; HIV-spetsiifilised antikehad seonduvad nii tahkele faasile adsorbeeritud rekombinantsete HIV-1 ja HIV-2 antigeenidega kui ka konjugaadilahuses nr 1 sisalduvate antigeenidega, moodustades antigeen-antikeha komplekse. P24-vastaste spetsiifiliste antikehade ja p24 antigeeni immuunkompleksid tuvastatakse konjugaadi nr 2 abil. Pärast seondumata komponentide mahapesemist lisatakse plaadi süvenditesse peroksidaasi substraadi (vesinikperoksiid) ja TMB kromogeeni lahus.

Peroksidaasi reaktsioon peatatakse stoppreagendi (0,9 M väävelhappe lahus) lisamisega ja lahuse värvuse intensiivsust süvendites mõõdetakse spektrofotomeetril optilise tiheduse (OD) väärtusena lainepikkusel 450 nm.

OD väärtus on otseselt võrdeline spetsiifiliste antikehade ja/või p24 antigeeni kontsentratsiooniga seerumis või plasmaproovis. Mida suurem on antikehade ja/või p24 antigeeni sisaldus seerumiproovis, seda suurem on värvimise intensiivsus.

2.3 Komplekt on mõeldud käes hoidmiseks 24 lavastust ELISA: 1 seadistus - 1 riba (8 auku). Kokku – 192 määratlused sealhulgas kontrollproovid.

3 Ettevaatusabinõud komplekti kasutamisel

3.1 Kõik komplekti komponendid kasutatud kontsentratsioonides on mittetoksilised. Töötage siiski kõigi uuritud inimese seerumi (plasma) proovidega, mida tuleks pidada potentsiaalselt nakkusohtlikeks, mis on võimelised säilitama ja edasi kandma HIV-i, B-hepatiidi viirust või mõnda muud patogeeni. viirusnakkus, kasutatud lahuste ja vedelikega, mitmesugused seadmed, mis võivad analüüsi käigus saastuda, nõuavad komplekti kasutamisel teatud ohutusmeetmeid:

Tööd tuleb teha spetsiaalselt varustatud ruumis;

Töötada tuleb isikukaitsevahenditega ja ettevaatusabinõude järgimisel vastavalt , , ja nõuetele.

3.2 Väävelhapet sisaldav peatamisreaktiiv on ärritav. Nahale ja limaskestadele sattumisel loputada koheselt rohke veega.

3.3 Komplektiga töötamisel peavad töökohad olema varustatud sissepuhke- ja väljatõmbeventilatsiooniga.

3.4 Kõik komplektidega laboris töötavad isikud peavad läbima kohustusliku arstliku läbivaatuse vastavalt nõuetele.

3.5 Kõrvaldage meditsiinijäätmed ja/või kasutamata komplektid koos aegunud kehtivus peab toimuma vastavalt nõuetele.

4 Komplektiga töötamise reeglid

4.1 Valetulemuste välistamiseks tuleb katseproovid ette valmistada ja säilitada tingimustes, mis takistavad bakterite kasvu. Seerumiproovid, mis sisaldavad agregeeritud seerumikomponente või setet, tuleks selgitada tsentrifuugimisega (5–10) minutit kiirusel 3000 pööret minutis. Seerumiproove võib säilitada temperatuuril (2–8) °C mitte kauem kui 5 päeva. Külmutatud proove (soovitavalt temperatuuril vähemalt miinus 20 °C) võib säilitada mitte kauem kui 1 aasta. Proovide korduvaid külmutamise-sulatamise tsükleid tuleks vältida.

Tuleb meeles pidada, et analüüsiks ei sobi hemolüüsi, hüperlipideemia, bakterite kasvuga proovid, samuti need, mida hoitakse pikka aega ilma külmutamata.

Tulemuste usaldusväärsus sõltub järgmistest reeglitest:

Ei ole lubatud kasutada komplekti pärast kõlblikkusaja lõppu, samuti erinevate seeriate komplektide komponentide segamine;

Iga reaktiivi valmistamiseks tuleks kasutada eraldi mahutit;

Ärge töödelge kõiki reaktiivide valmistamiseks kasutatavaid nõusid desinfitseerimis- ja puhastusvahenditega. Vajadusel loputage joogiveega ja seejärel loputage viis korda destilleeritud veega;

TMB ja RX kromogeeniga töötamiseks on vaja lahuste, pipetiotsikute ja tasside jaoks kasutada eraldi mahuteid.

Reaktiive tuleb hoolikalt segada;

Aeg plaadi süvendite lahuste ja reaktiividega täitmise ja tühjendamise vahel peaks olema vähemalt 30 s. Süvendeid ei ole lubatud kuivatada ELISA seadistuse kõikidel etappidel;

Seibi kasutamisel jälgi plaadi ja ühendusvoolikute pesemiseks mõeldud lahusemahuti seisukorda: neil ei tohiks olla bakterite või seente kasvu märke;

Vajalik on kasutada vahetatavate otsikutega automaatseid pipette, mida tõendab keskmise doosi väärtus ja pipeteerimistulemuste ühtlus (viga mitte üle 3%);

Dosaatoreid ja tööpindu tuleb töödelda lahusega, mille etüülalkoholi mahuosa on 70%. Ärge kasutage kloramiini ja muid kloori sisaldavaid aineid;

Test- ja kontrollproovide käsitsemiseks on soovitatav kasutada ühekordseid pipetiotsikuid. Iga seerumiproov ja ka komplekti reaktiivid tuleb koguda eraldi otsikuga.

PK-1 süvenditesse sisestamisel ärge puudutage pipeti otsaga tableti pinda ega süvendites olevat lahust.

Vältige analüüsi ajal otsest päikesevalgust tööpinnale.

4.2 Lüofiliseeritud komponentide avamisel ja lahustamisel tuleb jälgida, et viaalide kaanele ja seintele ei jääks kuivaine.

5 Analüüsiks vajalikud seadmed ja materjalid

5.1 Vertikaalne skaneeriv spektrofotomeeter, mis võimaldab mõõta lahuste optilist tihedust tableti süvendites lainepikkusel 450 nm;

Pool- või automaatne seade tablettide pesemiseks (pesumasin);

Kuiva õhu termostaat tüüp TC-80 M2, mis hoiab temperatuuri (37 ± 1) ° C või sarnaste omadustega;

Ühe kanaliga automaatsed vahetatavate otstega pipetid, mis võimaldavad võtta vedeliku koguseid 0,01 kuni 5,0 ml;

Vahetatavate otstega 8-kanalilised automaatsed pipetid, mis võimaldavad valida vedeliku koguseid kuni 0,5 ml;

Mõõtesilinder mahuga 2000 ml;

Laborikolb mahuga 2000 ml;

Klaaspudelid mahuga 20 ml;

Reaktiivide või Petri tasside kandikud (läbimõõt 100 mm);

Vatt meditsiiniline hügroskoopne;

Filterpaber;

Kummist kirurgilised kindad;

Lahus etüülalkoholi mahuosaga 70%;

Lahus vesinikperoksiidi massiosaga 6%;

Deioniseeritud või destilleeritud vesi;

konteiner tahkete jäätmete kogumiseks;

Mahuti vedelate jäätmete ärajuhtimiseks.

6 Analüüsiks valmistumine

6.1 Enne analüüsimist eemaldage reaktiivikomplekt külmkapist, avage karbi kaas ja hoidke komplekti komponente temperatuuril (18-25) °C 30 minutit.

Enne analüüsimist segage kõik seerumi (plasma) proovid ja reaktiivid põhjalikult.

Katsekomplekti reaktiivikulu, mis määratakse kasutatud ribade arvu järgi, on toodud lisa A tabelis A.1.

6.2 Plaadipesulahuse valmistamine

Tähelepanu! Valmistage lahus plaadi pesemiseks 15 minutit enne analüüsi algust!

Kui FSB-T × 25 viaal sisaldab sadet, tuleb seda enne kasutamist kuumutada temperatuuril (37 ± 1) ° C, kuni sade on täielikult lahustunud. 2000 ml mahuga mõõtesilindrisse lisage viaali sisu FSB-T × 25-ga, seejärel lisage destilleeritud vesi märgini. 1250 ml ja segage lahus õrnalt. Lahust võib hoida temperatuuril (2–8) °C 72 tundi.

Ühe või mitme riba kasutamisel loksutage viaali sisu FSB-T × 25-ga tugevalt (20-30) sekundit, võtke vajalik kogus lahust (tabel A.1) mõõtetopsi või -silindrisse. , lisage vajalik kogus destilleeritud vett ja segage lahus . Kasutamata FSB-T×25 võib komplekti kõlblikkusaja jooksul hoida suletud viaalis temperatuuril (2–8) °C.

6.3 Immunosorbentpreparaat

Immunosorbent on kasutamiseks valmis.

Avage pakend ja paigaldage raamile vajalik arv ribasid. Ülejäänud ribasid hoida tihedalt suletud kotis koos kuivatusainega temperatuuril (2–8) °C 3 kuud.

6.4 K + AT, K - , RK-1, PP-K2, BRS ja stoppreaktiivi valmistamine

K + AT, K - , RK-1, RR-K2, BRS ja stoppreaktiiv on kasutusvalmis.

Tähelepanu! Sadestumine on võimalik RK-1-ga viaalis. Analüüsiks tuleb kasutada supernatanti.

Kasutamata RK-1, PP-K2, BRS ja stoppreaktiiv pärast viaalide avamist võib komplekti kõlblikkusaja jooksul hoida suletud viaalides temperatuuril (2-8) °C.

Ülejäänud K + AT ja K - pärast pudeli avamist võib komplekti kõlblikkusaja jooksul hoida suletud pudelites temperatuuril (2–8) ° C.

6.5 K + AG lahuse valmistamine

Tähelepanu! K + AG lahus tuleks valmistada 15 minutit enne analüüsi algust!

Lüofiliseeritud K + AG taastamiseks koputage kergelt enne viaali avamist, et raputada maha viaali või korgi seintele kleepunud osakesed. Avage viaal ja asetage kork tagurpidi kuivale pinnale. Lisage viaali 0,8 ml destilleeritud vett. Sulgege viaal korgiga, hoidke 10 minutit temperatuuril (18–25) ° C, kallutage ja pöörake viaali ettevaatlikult, segage selle sisu kuni täieliku lahustumiseni, vältides vahu teket.

Lahustatud K + AG säilib suletud viaalis temperatuuril (2-8) °C üks kuu, temperatuuril miinus 20 °C - kuus kuud. Taastatud K + AG üks külmutamine-sulatamine on lubatud.

6.6 Kg-2 lahuse valmistamine töölahjenduses

Võtke tabelis A.1 näidatud kogus Kg-2 viaalist ja kandke see PP-K2 viaali. Segage viaali sisu hoolikalt, vältides vahu teket.

Kui kasutatakse ühte või mitut riba, võtke vajalik kogus PP-K2 puhtasse viaali, lisage Kg-2 vastavalt tabelile A.1 ja segage lahus vahutamata.

Tähelepanu! Kg-2 lahus töölahjenduses valmistatakse vahetult enne kasutamist! Kg-2 lahust töölahjenduses võib säilitada 15 minutit temperatuuril (18-25) °C. Kasutage ainult uut reaktiivi salve ja uusi otsikuid!

Ülejäänud Kg-2 võib komplekti kõlblikkusaja jooksul hoida suletud viaalis temperatuuril (2–8) °C.

6.7 Tööaluse lahuse valmistamine

TMB kromogeeniga pudelit tuleb enne kasutamist kuumutada temperatuuril (37±1)° C kuni kristallide täieliku lahustumiseni.

Võtke TMB kromogeeniga viaalist tabelis A.1 näidatud kogus ja kandke see BRS-iga viaali. Segage viaali sisu hoolikalt, vältides vahu teket.

Kui kasutatakse ühte või mitut riba, võtke vajalik kogus BRS-i puhtasse viaali, lisage TMB kromogeen vastavalt tabelile A.1 ja segage lahus vahutamata.

Tähelepanu! Substraadi töölahus valmistatakse vahetult enne kasutamist valguse eest kaitstud kohas! Lahust võib hoida 20 minutit temperatuuril (18-25) ° C, valguse eest kaitstult.

Lahust tuleb kaitsta valguse ja kokkupuute eest metallide või metalliioonidega. Substraadi lahus peab enne kasutamist olema värvitu. Nõusid, mis reaktsiooni ajal substraadi lahusega kokku puutuvad, tuleb pesta ilma sünteetilisi aineid kasutamata pesuvahendid. Kasutage ainult uut reaktiivi salve ja uusi otsikuid!

Ülejäänud TMB kromogeeni võib komplekti kõlblikkusaja jooksul hoida suletud viaalis temperatuuril (2–8) °C.

7 Nõuded plaatide pesemisele

Kõigil pesemisetappidel on vaja kontrollida kõigi kaevude täitmist ja vedeliku täielikku eemaldamist (aspiratsiooni) neist;

Igal pesemisel on vaja täita kõik süvendid ääreni lahusega (0,30–0,35 ml süvendi kohta), ilma et vedelik naaberkaevudest üle voolaks ja üle voolaks;

Hoidke plaadipesulahusega täidetud süvendeid 30 s;

Iga aspiratsiooni korral eemaldage ettevaatlikult kaevudest järelejäänud vedelik, koputades raami ümberpööratud asendis olevate ribadega mitu korda volditud filterpaberile, mis on asetatud polüetüleenilehele;

Plaadi halb pesemine põhjustab valesid tulemusi.

8 Analüüsi läbiviimine

8.1 Lisage tableti mis tahes kahte süvendisse 0,07 ml(70 µl) K + AT, kahes teises kaevus - poolt 0,07 ml(70 µl) K + AG, kolmes teises augus - poolt 0,07 ml(70 µl) TO – .

Tähelepanu! ELISA seadistamisel ühele ribale on lubatud kasutada kahte süvendit K - - üks süvend, K + AT - üks kaev, K + AG - üks kaev.

Lisage tableti ülejäänud süvenditesse 0,07 ml(70 µl) uuritud inimese seerumi (plasma) proovidest.

Tähelepanu! Iga proov tuleb võtta ühekordse otsikuga!

8.2 Tableti kõikidesse süvenditesse üle kontrollproovide ja vereseerumi (plasma) testproovide kohe panustama 0,05 ml(50 µl) RK-1. Segage süvendite sisu, koputades õrnalt plaadi servi.

8.3 (37 ± 1) ° Seestpoolt 60 min.

Tähelepanu! Valmistage (1–2) minutit enne inkubatsiooni lõppu Kr-2 lahus töölahjenduses (jaotis 6.6).

8.4 Eemaldage süvendite sisu pesuriga, seejärel peske plaadi süvendid plaadipesulahusega (punkt 6.2). seitse korda.

8.5 Lisage plaadi kõikidesse süvenditesse 0,15 ml(150 µl) lahus Kg-2 tööaretuses (p 6.6).

8.6 Sulgege plaat kilega või katke kaanega ja inkubeerige termostaadis temperatuuril (37 ± 1) ° Seestpoolt 10 min.

8.7 Eemaldage plaadi süvendite sisu pesumasinaga, seejärel peske plaatide süvendid plaadi pesulahusega (punkt 6.2). seitse korda.

8.8 Sisestage tableti kõikidesse süvenditesse 0,15 ml(150 µl) substraadi töölahus(punkt 6.7).

Aluspinna töölahuse valmistamisel (punkt 6.7) f TMB kromogeeniga lakoni tuleb enne kasutamist kuumutada (3-5) minutit temperatuuril (37± 1) °C, kuni kristallid on täielikult lahustunud.

8.9 Sulgege plaat kilega või katke kaanega ja inkubeerige termostaadis temperatuuril (37 ± 1) ° FROM jaoks pimedas kohas 15 minutit.

Tähelepanu! Inkubeerimise lõpus seerumiproovidega süvendites, mis sisaldavad HIV-1 ja/või HIV-2 ja/või HIV-1 p24 antigeeni antikehi, muutub lahuse värvus värvitust siniseks. erineva intensiivsusega sõltuvalt antikehade ja/või antigeeni kontsentratsioonist uuritavas seerumiproovis.

8.10 Peatage peroksidaasi reaktsioon, lisades see kõikidesse süvenditesse 0,05 ml(50 µl) peatage reaktiiv.

Tähelepanu! Süvendid, mille seerumiproovid sisaldavad HIV-1 ja/või HIV-2 ja/või HIV-1 p24 antigeeni vastaseid antikehi, muudavad lahuse värvi erineva intensiivsusega sinisest kollaseks.

8.11 Hiljemalt (1-2) minutit pärast reaktsiooni peatamist määrake OD süvendites ühelainerežiimis lainepikkusel 450 nm.

9 Analüüsitulemuste töötlemine

9.2 Tulemusi arvestatakse ainult siis, kui:

OPsr K väärtus - ei ületa 0,2 OE;

Iga OP K väärtus ei tohiks erineda OP K-st rohkem kui 30%. Kui üks kolmest OP K väärtusest ületab selle piiri, tuleks see OP K - arvutamisest välja jätta. Kui kaks kolmest ODK väärtusest on väljaspool seda piiri, tuleks analüüsi korrata uue reaktiivide komplektiga;

OPsr K + AT väärtus on suurem kui 1,0 OE;

OPsr K + AG väärtus on suurem kui 1,0 OE.

9.3 Kui ülaltoodud tingimused on täidetud, arvutage kriitiline väärtus (OPcrit.), OE, vastavalt valemile (1):

OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).

10 Analüütilised ja diagnostilised omadused

Tundlikkus reaktiivi komplekt ELISA-HIV 1.2 AGAT HIV-1 p24 antigeeni tuvastamiseks –

Spetsiifilisus reaktiivi komplekt ELISA-HIV 1.2 AGAT– 100% standardne AT(-)HIV. Standardne seerumite paneel, mis ei sisalda inimese immuunpuudulikkuse viiruse esimest ja teist tüüpi (HIV-1,2) ja HIV-1 antigeeni (p24) vastaseid antikehi. CJSC MBS.

11 Komplekti vabastamise vorm

11.1 Komplekt on saadaval viies konfiguratsioonis:

1 komplekt 1P - käsitsi analüüs. Komplekt on ette nähtud 12 ELISA katse jaoks kokkupandaval plaadil: 1 käik - 1 riba (8 auku). Kokku - 96 määramist, sealhulgas kontrollproovid;

2 komplekti 2M - käsitsi analüüs. Komplekt on ette nähtud kaheks ELISA katseks monoliitplaatidel: 1 katse – 1 plaat. Kokku – 192 määramist, sealhulgas kontrollproovid;

3 komplekt 2R- käsitsi analüüs. Komplekt on mõeldud hoidmiseks 24 lavastust ELISA 2 jaoks kokkupandav x tabletid: 1 seade - 1 riba (8 auku). Kokku – 192 määratlust, sealhulgas kontrollproovid;

4 komplekti A2M - analüüs automaatsel analüsaatoril. Komplekt on ette nähtud kaheks ELISA katseks monoliitplaatidel: 1 katse – 1 plaat. Kokku – 192 määramist, sealhulgas kontrollproovid;

5 komplekti A2P - analüüs automaatsel analüsaatoril. Komplekt on ette nähtud 24 ELISA testi jaoks kahel kokkupandaval plaadil: 1 käik – 1 riba (8 auku). Kokku 192 määramist, sealhulgas kontrollproovid.

12 Komplekti hoiu- ja kasutustingimused

12.1 Komplekti tuleb kogu säilivusaja jooksul hoida puhtas, niiskuse ja valguse eest kaitstud ruumis temperatuuril (2–8) °C. Ärge külmutage komplekti komponente.

12.2 Usaldusväärsete tulemuste saamiseks on vaja rangelt järgida komplekti kasutusjuhendit.

12.3 Komplekti aegumiskuupäev 12 kuud.

Lisa A

Tabel A.1 – ELISA komplekti reaktiivide tarbimine

Bibliograafia

Unikaalne registrikande number

Registreerimisnumber Meditsiiniline seade

FSR 2011/10182

kuupäev riiklik registreerimine Meditsiiniline seade

Meditsiiniseadme nimi

Reaktiivikomplekt "MilaLab-IFA-HIV-AGAT" ensüümi immuunanalüüs inimese immuunpuudulikkuse viiruste tüüpide 1 ja 2 (HIV-1 ja HIV-2), HIV-1 rühma O ja HIV-1 p24 antigeenide tuvastamiseks vastavalt TU 9398-le -187-05941003-2017
mis koosneb: - Immunosorbendist - 96 süvendiga ribadeks (või süvenditeks) kokkupandav polüstüreenplaat, mille süvendites on sorbeeritud tehisantigeenid - gp160, gp41, p31 HIV-1, gp41 HIV-1 rühm O, gp36 HIV- 2 ja HIV-1 p24 antigeeni vastased antikehad: komplekt 1 (1 tablett), komplekt 2 (2 tabletti), komplekt 3 (5 tabletti), - konjugaat-1: komplekt 1 (1 viaal 1,2 ml), komplekt 2 (1 viaal) 1,2 ml), komplekt 3 (1 viaal 3,6 ml või 3 viaali, igaüks 1,2 ml), - Konjugaat-2: komplekt 1 (1 viaal 2,0 ml), komplekt 2 (1 viaal 1,2 ml). 2,0 ml), komplekt 3 (1 viaal 4,0 ml või 2 viaali, igaüks 2,0 ml), - RRK-1 - lahus konjugaat-1 lahjendamiseks: komplekt 1 (1 viaal 12,0 ml), komplekt 2 (1 viaal 12,0 ml), komplekt 3 (3 viaali, igaüks 12,0 ml) , - RRK-2 - lahus konjugaat-2 lahjendamiseks: komplekt 1 (1 viaal 20,0 ml), komplekt 2 (1 viaal 20,0 ml), komplekt 3 (2 viaali, kumbki 20,0 ml), - K + AT - positiivne kontrollproov, mis sisaldab HIV-vastased antikehad: komplekt 1 (1 viaal 2,0 ml) , komplekt 2 (1 viaal 2,0 ml), komplekt 3 (1 viaal 4,0 ml või 2 viaali 2,0 ml kumbki), - K + AG - con trol-positiivne proov, mis sisaldab kunstlikku p24 HIV-1 antigeeni: komplekt 1 (1 viaal. 2,0 ml), komplekt 2 (1 viaal 2,0 ml), komplekt 3 (1 viaal 4,0 ml või 2 viaali 2,0 ml), - K- - kontroll negatiivne proov: komplekt 1 (1 viaal 2,5 ml), komplekt 2 (1 viaal 2,5 ml), komplekt 3 (1 viaal 5,0 ml või 2 viaali, igaüks 2,5 ml), - PR - loputuslahus: komplekt 1 (1 viaal 50,0 ml), komplekt 2 (1 viaal 120,0 ml), komplekt 3 (2 viaali 120,0 ml kumbki) ), - Stop Reagent: komplekt 1 (1 viaal 25,0 ml ), komplekt 2 (2 viaali 25,0 ml), komplekt 3 (2 viaali 50,0 ml või 4 viaali 25,0 ml), - SB - substraadi puhverlahus: komplekt 1 (1 viaal 25 0 ml), komplekt 2 (1 viaal 25,0 ml), komplekt 3 (2 viaali, igaüks 50,0 ml või 3 viaali, igaüks 25,0 ml), - TMB - lahus, mis sisaldab 3,3", 5,5"-tetrametüülbensidiini: komplekt 1 ( 1 viaal 2,5 ml), komplekt 2 (1 viaal 2,5 ml), komplekt 3 (2 viaali 3,5 ml või 3 viaali 2,5 ml) ml). Lisatarvikud: - 96 süvendiga polüstüreenplaatide kaaned: komplekt 1 (1 tk.), komplekt 2 (2 tk.), komplekt 3 (5 tk.) või - ELISA plaatide kaitsekiled: komplekt 1 (2 tk.) , komplekt 2 (4 tk.), komplekt 3 (10 tk.), - ühekordsed otsikud: komplekt 1 (16 tk.), komplekt 2 (32 tk.), komplekt 3 (80 tk.), - plastalused vedelate reaktiivide jaoks : komplekt 1 (2 tk.), komplekt 2 (4 tk.), komplekt 3 (10 tk.), - Zip-Lock lukuga kilekotid: komplekt 1 (1 tk.), komplekt 2 (2 tk.) , komplekt 3 (3 tk.).

Organisatsiooni nimi – meditsiinitoote taotleja

Meditsiiniseadme taotleja organisatsiooni asukoht

Meditsiiniseadme taotleja organisatsiooni juriidiline aadress

603014, Venemaa, Nižni Novgorod, st. Komintern, 47

Meditsiiniseadme või meditsiiniseadme tootja nimi

OOO "MTÜ "Diagnostikasüsteemid"

Meditsiiniseadme organisatsiooni-tootja või meditsiiniseadme tootja-organisatsiooni asukoht

603093, Venemaa, Nižni Novgorod, st. Yabloneva, 22, postkast 69

Organisatsiooni-meditsiiniseadme tootja või meditsiiniseadme tootja-organisatsiooni juriidiline aadress