Ce înseamnă analiza agatelor HIV 1 2. Metode moderne de diagnosticare a infecției cu HIV

Diagnosticul în timp util al infecției cu HIV devine o măsură extrem de importantă, deoarece inițierea timpurie a tratamentului poate determina în mare măsură dezvoltarea ulterioară a bolii și poate prelungi viața pacientului. ÎN anul trecut S-au înregistrat progrese semnificative în identificarea acestei boli groaznice: sistemele de testare mai vechi sunt înlocuite cu altele mai avansate, metodele de examinare devin din ce în ce mai accesibile, iar acuratețea lor crește semnificativ.

În acest articol vom vorbi despre metodele moderne de diagnosticare a infecției cu HIV, a căror cunoaștere este utilă tratament în timp util această problemă și menținerea calității normale a vieții pacientului.

Metode de diagnosticare HIV

În Rusia, se efectuează o procedură standard pentru a diagnostica infecția cu HIV, care include două niveluri:

• Sistem de testare ELISA (analiza screening);
• imunoblot (IB).

Pentru diagnosticare pot fi utilizate și alte metode:

• teste rapide.

Sisteme de testare ELISA

În prima etapă a diagnosticului, un test de screening (ELISA) este utilizat pentru a detecta infecția cu HIV, care se bazează pe proteinele HIV create în laboratoare care captează anticorpi specifici produși în organism ca răspuns la infecție. După interacțiunea lor cu reactivii (enzimele) sistemului de testare, culoarea indicatorului se schimbă. În continuare, aceste modificări de culoare sunt procesate cu ajutorul unor echipamente speciale, care determină rezultatul analizei efectuate.

Astfel de teste ELISA pot arăta rezultate în câteva săptămâni de la introducerea infecției cu HIV. Acest test nu determină prezența virusului, ci detectează producția de anticorpi împotriva acestuia. Uneori, în corpul uman, producția de anticorpi împotriva HIV începe după 2 săptămâni de infecție, dar la majoritatea oamenilor aceștia sunt produși pentru mai mult timp. mai tarziu, după 3-6 săptămâni.

Există patru generații de teste ELISA cu sensibilități diferite. În ultimii ani, au fost din ce în ce mai utilizate sisteme de testare de generația a treia și a patra, care se bazează pe peptide sintetice sau proteine ​​recombinate și au o specificitate și o precizie mai mare. Acestea pot fi utilizate pentru a diagnostica infecția cu HIV, pentru a monitoriza prevalența HIV și pentru a asigura siguranța la testarea sângelui donat. Precizia sistemelor de testare ELISA din generațiile III și IV este de 93-99% (testele produse în Europa de Vest sunt mai sensibile - 99%).

Pentru a efectua un test ELISA, se prelevează 5 ml de sânge din vena pacientului. Între ultima masă și analiză trebuie să treacă cel puțin 8 ore (de obicei se face dimineața pe stomacul gol). Se recomandă efectuarea unui astfel de test nu mai devreme de 3 săptămâni de la infecția suspectată (de exemplu, după un contact sexual neprotejat cu un nou partener sexual).

Rezultatele testului ELISA se obțin în 2-10 zile:

• rezultat negativ: indică absența infecției cu HIV și nu necesită contactarea unui specialist;
• rezultat fals negativ: poate fi observat pe primele etape infecție (până la 3 săptămâni), în stadiile târzii ale SIDA cu imunosupresie severă și pregătirea necorespunzătoare a sângelui;
• rezultat fals pozitiv: poate fi observat în unele boli și în caz de pregătire necorespunzătoare a sângelui;
• rezultat pozitiv: indică infecție infecție cu HIV, necesită efectuarea IB și pacientul să contacteze un specialist la centrul SIDA.

De ce poate un test ELISA să dea rezultate fals pozitive?

Rezultatele fals pozitive ale testelor HIV ELISA pot apărea din cauza procesării necorespunzătoare a sângelui sau la pacienții cu următoarele afecțiuni și boli:

• mielom multiplu;
• boli infecțioase cauzate de virusul Epstein-Barr;
• stare dupa ;
• boală autoimună;
• pe fundalul sarcinii;
• starea după vaccinare.

Din motivele descrise mai sus, anticorpii nespecifici cu reacție încrucișată pot fi prezenți în sânge, a căror producție nu a fost provocată de infecția cu HIV.

În ultimii ani, frecvența rezultatelor fals-pozitive a scăzut semnificativ datorită utilizării sistemelor de testare din generația III și IV, care conțin peptide mai sensibile și proteine ​​recombinante (sunt sintetizate prin inginerie genetică in vitro). După introducerea unor astfel de teste ELISA, frecvența rezultatelor fals pozitive a scăzut semnificativ și este de aproximativ 0,02-0,5%.

Detectarea este falsă rezultat pozitiv nu înseamnă că o persoană este infectată cu HIV. În astfel de cazuri, OMS recomandă efectuarea unui alt test ELISA (neapărat generația IV).

Sângele pacientului este trimis la un laborator de referință sau de arbitraj cu marcajul „repetare” și testat folosind un sistem de testare ELISA de generația IV. Dacă rezultatul noii analize este negativ, atunci primul rezultat este considerat eronat (fals pozitiv) și IS nu este efectuat. Dacă rezultatul este pozitiv sau discutabil în timpul celui de-al doilea test, pacientul trebuie să fie supus IB după 4-6 săptămâni pentru a confirma sau infirma infecția cu HIV.

Blotting imun

Un diagnostic final al infecției cu HIV poate fi pus doar după obținerea unui rezultat pozitiv. imunoblotting(IB). Pentru a-l realiza, se folosește o bandă de nitroceluloză, pe care se aplică proteine ​​virale.

Prelevarea de sânge pentru IB se efectuează dintr-o venă. În continuare, suferă o prelucrare specială, iar proteinele conținute în serul său sunt separate într-un gel special în funcție de sarcina și greutatea moleculară a acestora (manipularea se realizează folosind echipamente speciale sub influența unui câmp electric). Pe gelul de ser sanguin se aplică o bandă de nitroceluloză și se efectuează blotting („blotting”) într-o cameră specială. Banda este procesată și dacă materialele folosite conțin anticorpi împotriva HIV, aceștia se leagă de benzile antigenice de pe IB și apar ca linii.

IB este considerat pozitiv dacă:

• conform criteriilor americane CDC - există două sau trei linii gp41, p24, gp120/gp160 pe bandă;
• conform criteriilor FDA americane, banda are două linii p24, p31 și o linie gp41 sau gp120/gp160.

În 99,9% din cazuri, un rezultat pozitiv IB indică infecția cu HIV.

Dacă nu există linii, IB este negativ.

La identificarea liniilor cu gr160, gr120 și gr41, IB este îndoielnic. Acest rezultat poate apărea atunci când:

• boli oncologice;
• sarcina;
• transfuzii de sânge frecvente.

În astfel de cazuri, se recomandă repetarea studiului folosind un kit de la o altă companie. Dacă după IB suplimentar rezultatul rămâne îndoielnic, atunci observarea este necesară timp de șase luni (IB se efectuează la fiecare 3 luni).

Reacția polimerazei în lanț

Un test PCR poate detecta ARN-ul virusului. Sensibilitatea sa este destul de mare și permite detectarea infecției cu HIV în 10 zile de la infectare. În unele cazuri, PCR poate da rezultate fals pozitive, deoarece sensibilitatea sa ridicată poate răspunde și la anticorpii la alte infecții.

Această tehnică de diagnosticare este costisitoare și necesită echipamente speciale și specialiști cu înaltă calificare. Aceste motive nu fac posibilă efectuarea de teste în masă a populației.

PCR este utilizată în următoarele cazuri:

• depistarea HIV la nou-născuții născuți din mame infectate cu HIV;
• pentru a detecta HIV în „perioada fereastră” sau în caz de IB îndoielnic;
• pentru a controla concentrația HIV în sânge;
• pentru studiul sângelui donatorului.

Testul PCR singur nu pune un diagnostic de HIV, ci este efectuat ca a metoda suplimentara diagnosticare pentru a rezolva situații controversate.

Metode expres

Una dintre inovațiile în diagnosticarea HIV sunt testele rapide, ale căror rezultate pot fi evaluate în 10-15 minute. Cele mai eficiente și precise rezultate se obțin cu ajutorul testelor imunocromatografice bazate pe principiul fluxului capilar. Sunt benzi speciale pe care se aplică sânge sau alte fluide de testare (salivă, urină). Dacă sunt prezenți anticorpi împotriva HIV, după 10-15 minute pe test apare o bandă colorată și de control - un rezultat pozitiv. Dacă rezultatul este negativ, apare doar banda de control.

Ca și în cazul testelor ELISA, rezultatele testelor rapide trebuie confirmate prin analiza IB. Numai după aceasta se poate face un diagnostic de infecție cu HIV.

Există kituri de testare rapidă la domiciliu disponibile. Testul OraSure Technologies1 (SUA) este aprobat de FDA, disponibil la ghișeu și poate fi folosit pentru a detecta HIV. După test, dacă rezultatul este pozitiv, pacientului i se recomandă să fie supus unei examinări la un centru specializat pentru confirmarea diagnosticului.

Alte teste pentru uz casnic nu au fost încă aprobate de FDA și rezultatele lor pot fi foarte discutabile.

În ciuda faptului că testele rapide sunt inferioare ca precizie față de testele ELISA de generația IV, acestea sunt utilizate pe scară largă pentru testarea suplimentară a populației.

Puteți face teste pentru depistarea infecției cu HIV la orice clinică, spital central raional sau centre specializate SIDA. Pe teritoriul Rusiei, acestea se desfășoară în mod absolut confidențial sau anonim. Fiecare pacient se poate aștepta să primească consult medical sau psihologic înainte sau după test. Va trebui să plătiți doar pentru testele HIV în reclamă institutii medicale, iar în clinicile și spitalele publice se efectuează gratuit.

Citiți despre modalitățile prin care vă puteți infecta cu HIV și ce mituri există despre posibilitățile de a vă infecta.

1 Scopul apelării

1.1 Trusa este destinată detectării simultane a anticorpilor împotriva virusului imunodeficienței umane tipurile 1 și 2 (HIV-1 și HIV-2) și a antigenului HIV-1 p24 în ser uman și plasma sanguină „in vitro” folosind metoda enzimei indirecte. -test imunosorbent legat.

2 Caracteristicile și principiul de funcționare a ansamblului

2.1 Conținutul setului:

2.2 Principalele componente ale trusei „ELISA-HIV 1,2 AGAT” sunt imunosorbente, soluția de conjugat nr. 1 și conjugatul nr. 2.

Imunosorbent este o placă de polistiren în godeurile căreia este adsorbit un amestec de antigeni recombinanți HIV-1 (gp41) și HIV-2 (gp36) și anticorpi monoclonali la antigenul HIV-1 p24.

Soluția conjugată nr. 1 este un amestec de anticorpi monoclonali umani marcați cu biotină împotriva antigenului HIV-1 p24 și proteine ​​HIV-1 și HIV-2 recombinante marcate cu biotină.

Conjugatul nr. 2 este streptavidina conjugată cu peroxidază de hrean.

Probă de control pozitiv AT– ser din sânge uman care conține anticorpi la HIV-1 și HIV-2, care nu conține anticorpi la virusul hepatitei C și Treponema pallidum, antigenul HIV-1 p24 și antigenul HBs, inactivat prin încălzire timp de 3 ore la o temperatură de 56 ºC.

Probă de control AG pozitivă– ser din sânge uman care conține antigenul nativ HIV-1 p24, care nu conține anticorpi la HIV-1, HIV-2, virusul hepatitei C și antigenul Treponema pallidum și HBs, inactivat prin încălzire timp de 3 ore la o temperatură de 56 ºC.

Probă de control negativă– ser din sânge uman care nu conține anticorpi împotriva antigenului HIV-1, HIV-2, HCV, HIV-1 p24 și antigenului HBs, inactivat prin încălzire timp de 3 ore la o temperatură de 56 ºC.

Principiul de funcționare al setului. Când o soluție de conjugat nr. 1 și mostre de ser sanguin infectat sunt adăugate în godeurile unei plăci, antigenul p24 se leagă atât de anticorpi specifici din faza solidă, cât și de anticorpi monoclonali biotinilați anti-p24 care fac parte din soluția de conjugatul nr. 1; Anticorpii specifici HIV se leagă atât la antigenele recombinante HIV-1 și HIV-2 adsorbite pe faza solidă, cât și la antigenii incluși în soluția de conjugat nr. 1, formând complexe antigen-anticorp. Complexele imune de anticorpi specifici anti-p24 și antigenul p24 sunt detectate prin conjugatul nr. 2. După spălarea componentelor nelegate, în godeurile plăcii se adaugă o soluție de substrat de peroxidază (peroxid de hidrogen) și cromogen TMB.

Reacția peroxidazei este oprită prin adăugarea unui reactiv de oprire (soluție de acid sulfuric 0,9 M), iar intensitatea culorii soluției din godeuri este măsurată pe un spectrofotometru ca valoare a densității optice (OD) la o lungime de undă de 450 nm.

Valoarea OD este direct proporțională cu concentrația de anticorpi specifici și/sau antigenul p24 din proba de ser sau plasmă. Cu cât conținutul de anticorpi și/sau antigen p24 este mai mare în proba de ser, cu atât intensitatea colorării este mai mare.

2.3 Setul este proiectat pentru a realiza 24 de producții ELISA: 1 set – 1 bandă (8 găuri). Total - 192 definiții, inclusiv probe de control.

3 Măsuri de precauție atunci când lucrați cu kitul

3.1 Toate componentele trusei sunt netoxice în concentrațiile utilizate. Cu toate acestea, lucrați cu toate probele de testare de ser de sânge uman (plasmă), care ar trebui considerate ca potențial infectate, capabile să stocheze și să transmită HIV, virusul hepatitei B sau orice alt agent patogen infectie virala, cu soluții și lichide reziduale, diverse echipamente care pot fi contaminate în timpul procesului de analiză, necesită anumite măsuri de siguranță la utilizarea trusei:

Lucrarea trebuie efectuată într-o încăpere special echipată;

Este necesar să se lucreze folosind echipament individual de protecție și luarea măsurilor de precauție în conformitate cu cerințele , și .

3.2 Reactivul Stop care conține acid sulfuric este iritant. În cazul contactului cu pielea și mucoasele, clătiți imediat cu multă apă.

3.3 Când se lucrează cu kitul, locurile de muncă trebuie să fie prevăzute cu ventilație de alimentare și evacuare.

3.4 Toate persoanele care lucrează în laborator cu truse trebuie să fie supuse unui examen medical obligatoriu în conformitate cu cerințele.

3.5 Eliminarea deșeurilor medicale și/sau a truselor neutilizate din expirat valabilitatea trebuie efectuată în conformitate cu cerințele.

4 Reguli pentru lucrul cu setul

4.1 Pentru a evita rezultatele false, probele de testare trebuie să fie pregătite și depozitate în condiții care împiedică dezvoltarea bacteriilor. Probele de ser care conțin componente de ser agregate sau sedimente trebuie clarificate prin centrifugare timp de (5-10) minute la 3000 rpm. Probele de ser pot fi păstrate la o temperatură de (2-8) °C timp de cel mult 5 zile. Probele congelate (de preferință la o temperatură de cel puțin minus 20 °C) pot fi păstrate cel mult 1 an. Ciclurile repetate de îngheț-dezgheț ale probelor trebuie evitate.

Trebuie amintit că probele cu hemoliză, hiperlipidemie, creștere bacteriană, precum și cele depozitate timp îndelungat fără înghețare nu sunt potrivite pentru analiză.

Fiabilitatea rezultatelor depinde de următoarele reguli:

Nu este permisă utilizarea kitului după data de expirare, precum și amestecarea componentelor truselor din diferite serii;

Pentru prepararea fiecărui reactiv trebuie folosit un recipient separat;

Nu tratați toate ustensilele folosite pentru prepararea reactivilor cu dezinfectanți și detergenți. Dacă este necesar, clătiți cu apă curentă de băut și apoi clătiți de cinci ori cu apă distilată;

Pentru a lucra cu cromogenul TMB și PX, este necesar să folosiți recipiente separate pentru soluții, vârfuri de pipetă și vase.

Este necesar să se acorde atenție amestecării minuțioase a reactivilor;

Timpul dintre umplerea și golirea godeurilor plăcii cu soluții și reactivi trebuie să fie de cel puțin 30 s. Uscarea godeurilor nu este permisă în toate etapele ELISA;

Când utilizați mașina de spălat, monitorizați starea recipientului pentru soluția de spălare a tabletei și a furtunurilor de conectare: acestea nu trebuie să prezinte semne de creștere a bacteriilor sau fungilor;

Este necesar să se utilizeze pipete automate cu vârfuri înlocuibile, certificate pentru doza medie și consistența rezultatelor pipetării (eroarea nu mai mult de 3%);

Tratați dozatoarele și suprafețele de lucru cu o soluție care conține 70% alcool etilic în volum. Nu utilizați cloramină sau alte substanțe care conțin clor;

Se recomandă utilizarea vârfurilor de pipetă de unică folosință pentru lucrul cu probele de testare și de control. Fiecare probă de ser, precum și reactivii trusei, trebuie colectate cu un vârf separat.

Când adăugați RK-1 în godeuri, nu atingeți suprafața plăcii și soluția din godeuri cu vârful pipetei.

În timpul analizei, lumina directă a soarelui trebuie evitată pe suprafața de lucru.

4.2 La deschiderea și dizolvarea componentelor liofilizate, este necesar să se asigure că nu rămâne substanță uscată pe capacul și pereții sticlelor.

5 Echipamente și materiale necesare pentru analiză

5.1 Spectrofotometru cu scanare verticală, care permite măsurători ale densității optice a soluțiilor din godeurile unei plăci la o lungime de undă de 450 nm;

Dispozitiv semi-sau automat pentru spalarea tabletelor (masina de spalat);

Termostat aer uscat tip TS-80 M2, menținând o temperatură de (37±1) °C, sau caracteristici similare acestuia;

Pipete automate cu un singur canal cu vârfuri înlocuibile, permițându-vă să retrageți volume de lichid de la 0,01 la 5,0 ml;

Pipete automate cu 8 canale cu vârfuri înlocuibile, permițându-vă să retrageți volume de lichid de până la 0,5 ml;

Cilindru dozator cu o capacitate de 2000 ml;

Balon de laborator cu o capacitate de 2000 ml;

Sticle de sticla cu o capacitate de 20 ml;

Tavi pentru reactivi sau vase Petri (diametru 100 mm);

Vată medicală higroscopică;

Hârtie de filtru;

Mănuși chirurgicale din cauciuc;

O soluție cu o fracție volumică de alcool etilic de 70%;

O soluție cu o fracție de masă de peroxid de hidrogen 6%;

apă deionizată sau distilată;

Container pentru colectarea deșeurilor solide;

Recipient pentru scurgerea deșeurilor lichide.

6 Pregătirea pentru analiză

6.1 Înainte de a efectua analiza, scoateți trusa de reactivi din frigider, deschideți capacul cutiei și mențineți componentele kit-ului la temperatură (18-25) °C timp de 30 min.

Amestecați bine toate probele de ser (plasmă) și reactivii înainte de testare.

Consumul de reactivi din trusa de testare, care este determinat de numărul de benzi utilizate, este prezentat în tabelul A.1 din apendicele A.

6.2 Prepararea soluției pentru spălarea plăcii

Atenţie! Pregătiți soluția pentru spălarea plăcii cu 15 minute înainte de începerea analizei!

Dacă o sticlă cu FSB-T×25 conține sediment, aceasta trebuie încălzită înainte de utilizare la o temperatură de (37±1) °C până când sedimentul este complet dizolvat. Adăugați conținutul sticlei cu FSB-T×25 într-un cilindru de măsurare cu o capacitate de 2000 ml, apoi adăugați apă distilată până la semn. 1250 mlși amestecați cu grijă soluția. Soluția poate fi păstrată la (2-8) °C timp de 72 de ore.

Dacă se utilizează una sau mai multe benzi, agitați puternic conținutul sticlei cu FSB-T×25 timp de (20-30) s, luați volumul necesar de soluție (Tabelul A.1) într-o cană de măsurare sau cilindru, adăugați cantitatea necesară de apă distilată și amestecați soluția. FSB-T×25 neutilizat poate fi păstrat într-o sticlă închisă la o temperatură de (2-8) °C pe durata de valabilitate a trusei.

6.3 Prepararea imunosorbantului

Imunosorbentul este gata de utilizare.

Deschideți pachetul și instalați numărul necesar de benzi pe cadru. Păstrați benzile rămase într-o pungă închisă ermetic cu un desicant la o temperatură de (2-8) °C timp de 3 luni.

6.4 Prepararea K + AT, K –, RK-1, RR-K2, BRS și reactiv de oprire

K + AT, K – , RK-1, RR-K2, BRS și reactivul de oprire sunt gata de utilizare.

Atenţie! Se pot forma precipitații în sticlă cu RK-1. Pentru analiză trebuie utilizat un lichid supernatant.

RK-1, RR-K2, BRS și reactivul de oprire neutilizat după deschiderea flacoanelor pot fi păstrate în flacoane închise la o temperatură de (2-8) °C pe durata de valabilitate a trusei.

Restul de K + AT și K - după deschiderea flaconului poate fi păstrat în flacoane închise la o temperatură de (2-8) °C pe durata de valabilitate a trusei.

6.5 Prepararea soluției de K + AG

Atenţie! Preparați soluția K + AG cu 15 minute înainte de începerea analizei!

Pentru a restabili K + AG liofilizat, înainte de a deschide sticla, atingeți ușor pentru a scutura particulele care aderă de pereții sticlei sau ai dopului. Deschideți sticla și puneți dopul cu susul în jos pe o suprafață uscată. Adăugați 0,8 ml de apă distilată în sticlă. Închideți sticla cu dop, țineți timp de 10 minute la o temperatură de (18-25) °C și înclinați și rotiți cu grijă sticla, amestecați conținutul acesteia până se dizolvă complet, evitând formarea spumei.

K + AG redus poate fi păstrat într-o sticlă închisă la o temperatură de (2-8) °C timp de o lună, la o temperatură de minus 20 °C timp de șase luni. Este permisă o singură congelare-dezghețare a K + AG redus.

6.6 Prepararea soluției de Kg-2 în diluție de lucru

Din sticla cu Kg-2 se ia volumul indicat in Tabelul A.1 si se transfera in sticla cu PP-K2. Amestecați bine conținutul sticlei, evitând formarea spumei.

Dacă utilizați una sau mai multe benzi, luați cantitatea necesară de PP-K2 într-o sticlă curată, adăugați Kg-2 în conformitate cu Tabelul A.1 și amestecați soluția, evitând formarea de spumă.

Atenţie! Soluția Kg-2 în diluție de lucru se prepară imediat înainte de utilizare! Soluția Kg-2 în diluție de lucru poate fi păstrată timp de 15 minute la o temperatură de (18-25) °C. Folosiți doar o baie de reactiv nouă și vârfuri noi!

Restul de Kg-2 poate fi păstrat într-un flacon închis la o temperatură de (2-8) °C pe durata de valabilitate a trusei.

6.7 Prepararea soluției substratului de lucru

Sticla cu cromogen TMB trebuie încălzită înainte de utilizare la o temperatură de (37±1)° Până când cristalele sunt complet dizolvate.

Din sticla cu cromogen TMB, se ia volumul indicat în Tabelul A.1 și se transferă în sticla cu BRS. Amestecați bine conținutul sticlei, evitând formarea spumei.

Dacă se utilizează una sau mai multe benzi, luați cantitatea necesară de BRS într-o sticlă curată, adăugați cromogen TMB în conformitate cu Tabelul A.1 și amestecați soluția, evitând formarea de spumă.

Atenţie! Soluția de lucru a substratului se prepară imediat înainte de utilizare într-un loc ferit de lumină! Soluția poate fi păstrată timp de 20 de minute la o temperatură de (18-25) °C într-un loc ferit de lumină.

Soluția trebuie protejată de lumină și contactul cu metale sau ionii metalici. Soluția de substrat trebuie să fie incoloră înainte de utilizare. Vasele care vor intra în contact cu soluția de substrat în timpul reacției trebuie spălate fără utilizarea detergenților sintetici. detergenti. Folosiți doar o baie de reactiv nouă și vârfuri noi!

Restul de cromogen TMB poate fi păstrat într-un flacon închis la (2-8) °C până la data de expirare a trusei.

7 Cerințe pentru spălarea plăcii

În toate etapele de spălare, este necesar să se controleze umplerea tuturor puțurilor și îndepărtarea completă (aspirația) a lichidului din acestea;

În timpul fiecărei spălări, este necesar să umpleți toate godeurile cu soluția până la refuz (0,30-0,35 ml per godeu), fără revărsare sau revărsare de lichid din sondele adiacente;

Este necesar să se mențină godeurile umplute cu o soluție pentru spălarea plăcii timp de 30 s;

În timpul fiecărei aspirații, se îndepărtează cu grijă lichidul rezidual din godeuri lovind cadrul cu benzi în poziție inversată pe hârtie de filtru pliată de mai multe ori, așezată pe o foaie de polietilenă;

Spălarea slabă a plăcii duce la rezultate incorecte.

8 Efectuarea analizei

8.1 Se toarnă în oricare două godeuri ale plăcii 0,07 ml(70 µl) K + AT, în celelalte două găuri - fiecare 0,07 ml(70 µl) K + AG, în celelalte trei găuri - fiecare 0,07 ml(70 µl) LA - .

Atenţie! Când se efectuează ELISA pe o bandă, este permisă utilizarea a două godeuri pentru K – -, una pentru K + AT și una pentru K + AG.

Se toarnă în godeurile rămase ale plăcii 0,07 ml(70 µl) din probele studiate de ser de sânge uman (plasmă).

Atenţie! Fiecare probă trebuie colectată cu un vârf de unică folosință!

8.2 În toate godeurile plăcii deasupra probelor de control și probelor de testare de ser de sânge (plasmă) pe loc depozit de către 0,05 ml(50 µl) RK-1. Se amestecă conținutul godeurilor atingând ușor marginile plăcii.

8.3 (37 ± 1) ° Din cadrul 60 min.

Atenţie!(1-2) minute înainte de sfârșitul incubației, se prepară o soluție de Kg-2 într-o diluție de lucru (secțiunea 6.6).

8.4 Îndepărtați conținutul godeurilor folosind o șaibă, apoi spălați godeurile plăcii cu o soluție pentru spălarea plăcii (secțiunea 6.2) de șapte ori.

8.5 Se toarnă în toate godeurile farfurii 0,15 ml(150 ul) soluție Kg-2în diluție de lucru (clauza 6.6).

8.6 Acoperiți placa cu folie sau închideți cu un capac și incubați într-un termostat la o temperatură (37 ± 1) ° Din cadrul 10 minute.

8.7 Îndepărtați conținutul godeurilor plăcii folosind o spălătorie, apoi spălați godeurile plăcii cu o soluție de spălare a plăcii (secțiunea 6.2) de șapte ori.

8.8 Se toarnă în toate godeurile farfurii 0,15 ml(150 µl) soluție de lucru a substratului(clauza 6.7).

Când se prepară o soluție de lucru a substratului (clauza 6.7) f Lacul cu cromogen TMB trebuie încălzit înainte de utilizare timp de (3-5) minute la o temperatură de (37± 1) ° C până când cristalele sunt complet dizolvate.

8.9 Acoperiți placa cu folie sau închideți cu un capac și incubați într-un termostat la o temperatură (37 ± 1) ° CU într-un loc ferit de lumină pt 15 minute.

Atenţie! La sfârșitul incubării în godeuri cu probe de ser care conțin anticorpi la HIV-1 și/sau HIV-2 și/sau antigenul HIV-1 p24, culoarea soluției se va schimba de la incolor la albastru. intensitate variabilăîn funcție de concentrația de anticorpi și/sau antigen din proba de ser testată.

8.10 Opriți reacția peroxidazei prin adăugare 0,05 ml(50 µl) opriți reactivul.

Atenţie!În godeurile cu probe de ser care conțin anticorpi la HIV-1 și/sau HIV-2 și/sau antigenul HIV-1 p24, culoarea soluției se va schimba de la albastru la galben de intensitate diferită.

8.11 Nu mai târziu de (1-2) minute după oprirea reacției, determinați OD în godeuri în modul cu o singură undă la lungimea de undă 450 nm.

9 Prelucrarea rezultatelor analizei

9.2 Rezultatele sunt luate în considerare numai dacă:

Valoarea OPsr K - nu depășește 0,2 OE;

Fiecare valoare individuală a OP K - nu ar trebui să se abate de la OPsr K - cu mai mult de 30%. Dacă una dintre cele trei valori ale OP K - depășește această limită, ar trebui exclusă din calculul OPsr K - . Dacă două dintre cele trei valori OD K - sunt în afara acestei limite, analiza trebuie repetată folosind reactivii unui nou set;

Valoarea OPsr K + AT este mai mare de 1,0 OE;

Valoarea OPsr K + AG este mai mare de 1,0 OU.

9.3 Dacă sunt îndeplinite condițiile de mai sus, calculați valoarea critică (OPcrit.), OE, folosind formula (1):

OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).

10 Caracteristici analitice și diagnostice

Sensibilitate set de reactivi ELISA-HIV 1.2 AGAT pentru detectarea antigenului HIV-1 p24 -

Specificitate set de reactivi ELISA-HIV 1.2 AGAT– 100% standard AT(-)HIV. Panou standard de seruri care nu conțin anticorpi împotriva virusului imunodeficienței umane tipurile 1 și 2 (HIV-1,2) și antigen HIV-1 (p24).OCO42-28-214-02P.CatNo.INS-20. CJSC „MBS”

11 Setați formularul de eliberare

11.1 Setul este disponibil în cinci opțiuni de configurare:

1 set de 1P – analiză manuală. Kitul este conceput pentru a efectua 12 setări ELISA pe o placă pliabilă: 1 rundă – 1 bandă (8 godeuri). Total – 96 determinări, inclusiv probe de control;

2 set 2M – analiza manuala. Kitul este conceput pentru a efectua 2 teste ELISA pe plăci monolitice: 1 test – 1 placă. Total – 192 determinări, inclusiv probe de control;

3 set 2P– efectuarea manuală a analizei. Setul este proiectat pentru a realiza 24 de producții ELISA pentru 2 demontabil x comprimate: 1 set – 1 bandă (8 godeuri). Total - 192 de definiții, inclusiv probele de control;

4 set A2M – analiză pe un analizor automat. Kitul este conceput pentru a efectua 2 teste ELISA pe plăci monolitice: 1 test – 1 placă. Total – 192 determinări, inclusiv probe de control;

5 set A2P – analiză pe un analizor automat. Kitul este conceput pentru a efectua 24 de setări ELISA pe 2 plăci pliabile: 1 rundă – 1 bandă (8 godeuri). Un total de 192 de determinări, inclusiv probe de control.

12 Condiții de depozitare și utilizare a trusei

12.1 Setul trebuie depozitat într-o cameră curată, ferită de umiditate și lumină, la o temperatură de (2-8) °C pe toată durata de valabilitate. Nu înghețați componentele kit-ului.

12.2 Pentru a obține rezultate fiabile, este necesară respectarea strictă a instrucțiunilor de utilizare a kit-ului.

12.3 Data expirării setului - 12 luni.

Anexa A

Tabelul A.1 - Consumul de reactivi pentru trusa ELISA

Bibliografie

Număr unic de înregistrare în registru

Număr de înregistrare aparat medical

FSR 2011/10182

Data înregistrare de stat aparat medical

Denumirea produsului medical

Set de reactivi „MilaLab-IFA-HIV-AGAT” Sistem de testare imunoenzimatică pentru detectarea anticorpilor la virusurile imunodeficienței umane tipurile 1 și 2 (HIV-1 și HIV-2), HIV-1 grupa O și antigenul HIV-1 p24 conform TU 9398 -187-05941003-2017
constând din: - Imunosorbent - o tabletă demontabilă din polistiren cu 96 de godeuri în benzi (sau godeuri), în godeurile cărora sunt absorbiți antigeni artificiali - gp160, gp41, p31 HIV-1, gp41 HIV-1 grupa O, gp36 HIV-2 și anticorpi la antigenul HIV-1 p24: set 1 (1 comprimat), set 2 (2 comprimate), set 3 (5 comprimate), - Conjugat-1: set 1 (1 flacon 1,2 ml), set 2 (1 flacon. 1,2 ml), set 3 (1 flacon de 3,6 ml sau 3 fiole de 1,2 ml fiecare), - Conjugate-2: set 1 (1 flacon de 2,0 ml), setul 2 (1 flacon de 2,0 ml). 2,0 ml), set 3 (1 flacon de 4,0 ml sau 2 flacoane de 2,0 ml), - RRK-1 - soluție pentru diluarea Conjugat-1: set 1 (1 flacon de 12,0 ml), set 2 (1 flacon de 12,0 ml), set 3 (3 flacon de 12,0 ml) fiecare), - RRK-2 - soluție pentru diluarea Conjugatului-2: set 1 (1 flacon de 20,0 ml), setul 2 (1 flacon de 20,0 ml), setul 3 (2 fiole de 20,0 ml fiecare), - K+AT - control pozitiv Probă care conține anticorpi împotriva HIV: set 1 (1 flacon de 2,0 ml), set 2 (1 flacon de 2,0 ml), set 3 (1 flacon de 4,0 ml sau 2 fiole de 2,0 ml fiecare), - K+AG - probă de control pozitivă care conține HIV artificial -1 antigen p24: set 1 (1 fl. 2,0 ml), set 2 (1 flacon de 2,0 ml), set 3 (1 flacon de 4,0 ml sau 2 flacoane de 2,0 ml fiecare), - K- - proba de control negativ: set 1 (1 flacon de 2,5 ml), set 2 (1 flacon 2,5 ml), set 3 (1 flacon de 5,0 ml sau 2 sticle de 2,5 ml fiecare), - PR - soluție de spălare: set 1 (1 flacon de 50,0 ml), set 2 (1 flacon de 120,0 ml), set 3 (2 sticle de 120,0 ml) fiecare), - Opriți reactiv: set 1 (1 flacon de 25,0 ml), set 2 (2 sticle de 25,0 ml), set 3 (2 sticle de 50,0 ml sau 4 sticle de 25,0 ml), - SB - soluție tampon de substrat: set 1 (1 flacon de 25,0 ml), set 2 (1 flacon de 25,0 ml), set 3 (2 sticle de 50,0 ml sau 3 sticle de 25,0 ml), - TMB - soluție care conține 3,3", 5,5"-tetrametilbenzidină: set 1 ( 1 flacon de 2,5 ml), set 2 (1 flacon de 2,5 ml), set 3 (2 sticle de 3,5 ml sau 3 sticle de 2,5 ml). Accesorii: - capace pentru plăci din polistiren cu 96 godeuri: set 1 (1 buc.), set 2 (2 buc.), set 3 (5 buc.) sau - folii de protecție pentru plăci ELISA: set 1 (2 buc.) , set 2 (4 buc.), set 3 (10 buc.), - vârfuri de unică folosință: set 1 (16 buc.), set 2 (32 buc.), set 3 (80 buc.), - tăvi din plastic pentru reactivi lichizi : set 1 (2 buc.), set 2 (4 buc.), set 3 (10 buc.), - pungi de plastic cu Zip-Lock: set 1 (1 buc.), set 2 (2 buc.) , set 3 (3 buc.).

Denumirea organizației - solicitantul dispozitivului medical

Locația organizației solicitante pentru dispozitivul medical

Adresa juridică a organizației solicitante pentru dispozitivul medical

603014, Rusia, Nijni Novgorod, st. Komintern, 47

Numele producătorului dispozitivului medical sau al producătorului dispozitivului medical

SRL „NPO „Sisteme de diagnosticare”

Locația organizației-producător al dispozitivului medical sau organizației-producătorului dispozitivului medical

603093, Rusia, Nijni Novgorod, st. Yabloneva, 22, PO Box 69

Adresa juridică a organizației-producătorului dispozitivului medical sau organizației-producătorului dispozitivului medical